諾(nuo)博(bo)萊德 小(xiao)量(liang)全血(xue)基(ji)因組(zu)DNA快(kuai)速(su)提qu試劑(ji)he核酸提(ti)取(qu)

FlashPure Blood Genomic DNA Kit血(xue)液(ye)基(ji)因組(zu)DNA提qu試劑(ji)he（離心(xin)柱型(xing)）

目(mu)錄(lu)號(hao):40011

產(chan)品(pin)內(nei)容：

自備試劑(ji)：

無水乙(yi)醇，RNase A（可(ke)選(xuan)）

保(bao)存(cun)條(tiao)件：

室(shi)溫(wen)（15~25℃）

蛋白(bai)酶K，室(shi)溫(wen)可(ke)保(bao)存(cun)6個(ge)月(yue)，4℃保(bao)存(cun)12個(ge)月(yue)，~20℃保(bao)存(cun)2年。

具(ju)體(ti)產(chan)品(pin)的(de)參(can)數以(yi)收到(dao)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書的(de)參數為準

產(chan)品(pin)簡(jian)介(jie)：

適(shi)用於(yu)從新(xin)鮮(xian)、冷(leng)凍(dong)或(huo)加(jia)入各種(zhong)抗凝劑(ji)的血(xue)液(ye)樣本中快(kuai)速(su)提取(qu)高(gao)質(zhi)量(liang)的(de)基(ji)因組(zu)DNA，也可(ke)以(yi)提取(qu)白(bai)膜(mo)層和(he)血(xue)凝塊。

本試劑(ji)盒(he)采用獨(du)te的裂(lie)解液，利用矽(gui)膠膜(mo)特(te)異吸附(fu)DNA，無需(xu)酚氯仿等有毒(du)試劑(ji)，也無需(xu)進(jin)行耗(hao)時的(de)醇類(lei)沈(chen)澱，最(zui)大限度的去(qu)除蛋白(bai)及(ji)其(qi)他抑(yi)制(zhi)性(xing)雜質(zhi)，得到(dao)基(ji)因組(zu)DNA，無蛋白(bai)、核酸酶(mei)汙染(ran)，可(ke)直(zhi)接(jie)進(jin)行PCR、酶切(qie)和(he)雜交等相(xiang)關分(fen)子(zi)生物(wu)學(xue)實驗(yan)。

產(chan)品(pin)特(te)點(dian)：  

1.  簡(jian)便(bian)快(kuai)速(su)：30min內(nei)可(ke)獲得(de)高純度(du)的(de)基(ji)因組(zu)DNA。

2. 安(an)全無毒：無需(xu)ben酚/氯仿抽提。

3. 高(gao)產(chan)：典(dian)型(xing)的(de)產(chan)量(liang)200µl全血(xue)可(ke)提(ti)取(qu)出(chu)3～6µg基(ji)因組(zu)DNA，

4.高(gao)純(chun)：OD260/280=1.7～1.9，長(chang)度(du)可(ke)達(da)30～50kb，可(ke)直(zhi)接(jie)進(jin)行PCR、酶切(qie)和(he)雜交等分(fen)子(zi)生物(wu)學(xue)實驗(yan)。

註意(yi)事(shi)項(xiang)：

1. 如果(guo)結合液CB、抑(yi)制(zhi)物(wu)去除液IR有(you)沈(chen)澱析(xi)出，可(ke)在37℃水浴(yu)溶解，搖(yao)勻後(hou)使用。

2. 開(kai)始實(shi)驗(yan)前(qian)將(jiang)需(xu)要的(de)水浴(yu)先預熱到(dao)70℃備用。

3. 為(wei)了(le)最(zui)佳(jia)效guo，最(zui)好使(shi)用新(xin)鮮(xian)血(xue)液(ye)標本或者4℃存(cun)放少(shao)於(yu)3天(tian)的標(biao)本，不要使(shi)用反復(fu)凍(dong)融(rong)超(chao)過(guo)3次的標本，否則會(hui)嚴(yan)重(zhong)降(jiang)低產(chan)量(liang)。

4. 不(bu)同(tong)樣品(pin)尤其(qi)疾病(bing)樣品(pin)中白細胞(bao)數(shu)量(liang)差(cha)異可(ke)能(neng)非(fei)常大，因此(ci)產(chan)量(liang)的(de)個(ge)體(ti)差(cha)異也可(ke)能(neng)非(fei)常大。

5. 洗(xi)脫(tuo)液(ye)EB不(bu)含(han)有(you)螯合劑(ji)EDTA，不影(ying)響(xiang)下(xia)遊(you)酶切(qie)、連(lian)接等反應。也(ye)可(ke)以(yi)使用水洗脫(tuo)，但(dan)應該確(que)保(bao)批pH大(da)於(yu)7.5，pH過(guo)低(di)影(ying)響(xiang)洗脫(tuo)效(xiao)率(lv)。用水洗脫(tuo)DNA應該保(bao)存(cun)在－20℃。DNA如果(guo)需(xu)要長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)，可(ke)以(yi)用TE緩沖液(ye)洗(xi)脫(tuo)（10mMTris-HCl，1mMEDTA，pH8.0），但(dan)是EDTA可(ke)能(neng)下(xia)遊(you)酶切(qie)反應，使(shi)用時(shi)可(ke)以(yi)適當稀(xi)釋(shi)

操作步(bu)驟(zhou)：

第(di)壹次使用前(qian)，請(qing)先(xian)在漂(piao)洗液(ye)WB中(zhong)加(jia)入指(zhi)ding量(liang)無水乙(yi)醇，詳(xiang)見瓶身(shen)的(de)標簽。提(ti)示(shi)：所有離心(xin)步(bu)驟(zhou)必(bi)須在室(shi)溫(wen)（15~25℃）下(xia)進(jin)行。

1. 柱(zhu)平(ping)衡(heng)：向(xiang)吸附(fu)柱(zhu)的(de)膜(mo)中央(yang)（吸(xi)附(fu)柱(zhu)放入收集(ji)管中）加(jia)入100μl平(ping)衡(heng)液(ye)，

12,000rpm離心(xin)1min，棄濾(lv)液(ye)，將(jiang)吸(xi)附(fu)柱(zhu)重(zhong)新(xin)放回收(shou)集(ji)管中。（請(qing)使(shi)用當天(tian)處理(li)過(guo)的(de)柱(zhu)子(zi)）

2. 取(qu)200μl新(xin)鮮(xian)、冷(leng)凍(dong)或(huo)加(jia)入各種(zhong)抗凝劑(ji)的血(xue)液(ye)，放入1.5ml離心(xin)管。

▲如果(guo)血(xue)液(ye)起始量(liang)小(xiao)於(yu)200μl，則用1×PBS補(bu)足到(dao)200μl。

如果(guo)起始量(liang)介(jie)於(yu)200μl-300μl之(zhi)間，則需(xu)要按照比(bi)例(li)增加(jia)試劑(ji)用量(liang)。如果(guo)起始量(liang)介(jie)於(yu)300μl~1 ml之(zhi)間，則需(xu)要先(xian)進(jin)行紅細胞(bao)裂(lie)解操作:將(jiang)10x紅(hong)細胞(bao)裂(lie)解液用滅(mie)菌(jun)水稀(xi)釋(shi)到(dao)1x，然後在樣品(pin)中加入3倍體(ti)積(ji)的(de)1x紅(hong)細胞(bao)裂(lie)解液，顛(dian)倒(dao)混(hun)勻，室(shi)溫(wen)放置(zhi)10 min，期(qi)間再顛(dian)倒(dao)混(hun)勻幾次。13,000rpm離心(xin)20sec(對(dui)於(yu)1.5ml離心(xin)管)2,000~3,000rpm離心(xin)5min(對(dui)於(yu)15ml離心(xin)管)，吸去(qu)上(shang)清，留(liu)下(xia)白(bai)細胞(bao)沈(chen)澱（如果(guo)看到(dao)的(de)是大部分(fen)的(de)紅(hong)色(se)細胞(bao)團(tuan)，則(ze)再(zai)次加入3倍1x紅(hong)細胞(bao)裂(lie)解液，重(zhong)復(fu)裂解壹次），加(jia)入200μl1×PBS，振蕩至徹di懸浮。

▲提(ti)取(qu)凝固血(xue)時(shi)需(xu)要在操作前(qian)用槍頭搗(dao)碎(sui)血(xue)凝塊後按照正常步(bu)驟(zhou)進(jin)行。

▲如果(guo)處理(li)血(xue)樣為(wei)禽類(lei)、鳥(niao)類(lei)、兩(liang)棲類或更低(di)級(ji)生物(wu)的抗凝血(xue)液(ye)，其紅細胞(bao)為(wei)有(you)核(he)細胞(bao)，因此(ci)處理量(liang)僅(jin)用5~20μl，可(ke)加(jia)1×PBS補(bu)足(zu)到(dao)200μl後(hou)，進(jin)行下(xia)面(mian)的裂解步(bu)驟(zhou)。

3. （可(ke)選(xuan)，壹般不需(xu)要）如果(guo)需(xu)要去(qu)除RNA，可(ke)向(xiang)200μl 的(de)血(xue)液(ye)樣品(pin)中加入5μlRNaseA(100mg/ml)溶液，振蕩混勻，室(shi)溫(wen)放置(zhi)5~10min。

4. 加(jia)入20μl蛋白(bai)酶K溶液，充(chong)分(fen)振(zhen)蕩混勻。

5. 加(jia)入200μl結(jie)合液CB，充(chong)分(fen)振(zhen)蕩混勻，70℃放置(zhi)10 min，期(qi)間顛(dian)倒(dao)混(hun)勻幾次，溶液應該變清亮(liang)，但(dan)顏(yan)色偏黑。（如果(guo)未變(bian)清亮(liang)，請(qing)延長(chang)時(shi)間）

6. 冷(leng)卻(que)後(hou)加100μl無水乙(yi)醇(或(huo)異丙醇)，充(chong)分(fen)振(zhen)蕩混勻，此(ci)時可(ke)能(neng)會(hui)出(chu)現絮狀(zhuang)沈(chen)澱，短(duan)暫離心(xin)以(yi)去除管蓋內(nei)壁水珠。

7. 將(jiang)所得溶液和(he)絮(xu)狀(zhuang)沈(chen)澱加(jia)入壹個DNA吸(xi)附(fu)柱(zhu)中(zhong)，（吸(xi)附(fu)柱(zhu)放入收集(ji)管中）

13,000rpm離心(xin)1min，DNA被吸附(fu)在膜上(shang)，倒(dao)棄濾(lv)液(ye)。

8.加(jia)入500μl抑(yi)制(zhi)物(wu)去除液IR，13,00rpm離心(xin)30sec，倒(dao)棄濾(lv)液(ye)。

9. 加(jia)入600μl漂(piao)洗液(ye)WB（請(qing)檢(jian)查(zha)是否已加入無水乙(yi)醇），13,000rpm離心(xin)30sec，倒(dao)棄濾(lv)液(ye)。

10. 重(zhong)復(fu)步(bu)驟(zhou)9壹遍。

11. 將(jiang)DNA吸(xi)附(fu)柱(zhu)放回空(kong)收(shou)集管中，13, 000 rpm離心(xin)2 min，盡(jin)量(liang)除去漂(piao)洗液(ye)，以(yi)免漂(piao)洗液(ye)中殘(can)留(liu)乙(yi)醇抑(yi)制(zhi)下(xia)遊(you)反應。

12.取(qu)出(chu)DNA吸(xi)附(fu)柱(zhu)，放入壹個幹(gan)凈的(de)1.5ml離心(xin)管中，向(xiang)吸(xi)附(fu)膜(mo)的(de)中(zhong)央(yang)加入100μl洗(xi)脫(tuo)緩沖液(ye)EB（洗(xi)脫(tuo)緩沖液(ye)事(shi)先在80 ~ 100℃水浴(yu)中預熱可(ke)以(yi)提高(gao)產(chan)量(liang)），室(shi)溫(wen)放置(zhi)3~5min，13, 000rpm離心(xin)1min。

▲可(ke)將(jiang)第(di)壹次洗脫(tuo)所得的(de)DNA溶液重新(xin)加入離心(xin)柱中，室(shi)溫(wen)放置(zhi) 2 min，13,000rpm離心(xin)1min。可(ke)以(yi)提高(gao)濃(nong)度(du)10%左右。

13. DNA可(ke)以(yi)存(cun)放在2~8℃，如果(guo)要長(chang)時(shi)間存(cun)放，可(ke)以(yi)放置(zhi)在-20℃。

相(xiang)關產(chan)品(pin)：

50110-500 10000x GenGreen（同(tong)GelGreen） 無毒核(he)酸染(ran)料 藍(lan)光切(qie)膠儀(yi)用

50111-500 10000x GenRed（同(tong)GelRed） 無毒核(he)酸染(ran)料 凝膠成像儀(yi)用

71800-05 2x Lightning Taq PCR MasterMix（含(han)染(ran)料） 延伸速(su)度：6 kb/min

71814-05  2x LongHiFi PCR MasterMix（含(han)染(ran)料）擴(kuo)增(zeng)長(chang)度(du)≤10kb  4 kb/min

71517-05  2x KOD PCR MasterMix（含(han)染(ran)料）  擴(kuo)增(zeng)長(chang)度(du)≤6kb  6 kb/min

小(xiao)量(liang)全血(xue)基(ji)因組(zu)DNA快(kuai)速(su)提qu試劑(ji)he核酸提(ti)取(qu)