諾博萊(lai)德(de) 小量(liang)全(quan)血基因(yin)組(zu)DNA快(kuai)速(su)提qu試劑盒 核(he)酸提取

Blood Genomic DNA Mini Kit小量(liang)血液(ye)基因(yin)組(zu)DNA提qu試劑盒（溶液(ye)型(xing)）

產(chan)品內(nei)容(rong)：

自備(bei)試劑：

無水乙(yi)醇(chun)、異丙(bing)醇(chun)、70％乙(yi)醇(chun)

保(bao)存(cun)條件(jian)：

室(shi)溫(wen)（15~25℃）

蛋(dan)白(bai)酶K，室(shi)溫(wen)可保(bao)存(cun)6個(ge)月(yue)，4℃保(bao)存(cun)12個(ge)月(yue)，~20℃保(bao)存(cun)2年(nian)。

產(chan)品簡介：

適用(yong)於(yu)從新鮮、冷凍(dong)或加入各(ge)種抗凝(ning)劑(ji)的血液(ye)樣(yang)本(ben)中快(kuai)速(su)提取高(gao)質量(liang)的(de)基因(yin)組(zu)DNA，也(ye)可以(yi)提取白(bai)膜(mo)層(ceng)和血凝(ning)塊。

首(shou)先(xian)紅(hong)細胞裂解液(ye)裂(lie)解去(qu)除(chu)不含DNA的紅(hong)細胞，細胞核裂解液(ye)裂(lie)解白(bai)細胞釋(shi)放出(chu)基因(yin)組(zu)DNA，然(ran)後(hou)蛋(dan)白(bai)沈澱(dian)液(ye)選(xuan)擇性沈(chen)澱(dian)去(qu)除(chu)蛋(dan)白(bai)，最後(hou)純凈(jing)的基因(yin)組(zu)DNA通(tong)過異丙(bing)醇(chun)沈澱(dian)並重(zhong)溶解於(yu)DNA溶解液(ye)。

產(chan)品特(te)點：

1.  簡便(bian)快(kuai)速(su)：30min內(nei)可(ke)獲得高純(chun)度的(de)基因(yin)組(zu)DNA。

2. 安全(quan)無毒(du)：無(wu)需ben酚(fen)/氯仿(fang)抽提。

3. 高產(chan)：典(dian)型(xing)的產(chan)量(liang)300µl全(quan)血可提取出(chu)5～15µg基因(yin)組(zu)DNA。

4. 高純(chun)：OD260/280=1.7～1.9，長度可(ke)達50～150kb，可直(zhi)接(jie)進(jin)行(xing)可直接(jie)用(yong)於(yu)構建文庫(ku)、PCR、酶切(qie)、Southern-blot等分子生物學實驗(yan)。

註意事(shi)項(xiang)：

1.  本(ben)試劑盒可(ke)運(yun)用於(yu)多種抗凝(ning)劑(ji)的全(quan)血，如(ru)EDTA、檸檬酸、肝素(su)抗凝(ning)血。其(qi)中(zhong)由(you)於肝(gan)素抗凝(ning)血的白(bai)細胞沈澱(dian)團(tuan)很難打散重(zhong)懸，影響(xiang)裂解效(xiao)果(guo)，建議選(xuan)用(yong)非肝(gan)素(su)的(de)抗凝(ning)劑(ji)收集(ji)血液(ye)標本(ben)。

2. 為(wei)了(le)最佳(jia)效guo，最好(hao)使用新(xin)鮮血液(ye)標本(ben)或者4℃存(cun)放少(shao)於(yu)3天的(de)標本(ben)，不要使用(yong)反(fan)復凍(dong)融(rong)超過3次(ci)的(de)標本(ben)，否(fou)則會(hui)嚴(yan)重(zhong)降低(di)產(chan)量(liang)。

3. 不同樣品(pin)尤(you)其(qi)疾病樣品中(zhong)白(bai)細胞數量(liang)差異可(ke)能(neng)非常(chang)大(da)，血液(ye)DNA產(chan)量(liang)的(de)個(ge)體差異也(ye)可(ke)能(neng)非常(chang)大(da)。

4.  如(ru)果(guo)結合液(ye)CB、抑(yi)制物(wu)去(qu)除(chu)液(ye)IR有沈(chen)澱(dian)析(xi)出(chu)，可在37℃水浴溶解，搖(yao)勻(yun)後使(shi)用。

5. 本(ben)試劑盒為(wei)溶液(ye)型(xing)，可以(yi)很容(rong)易的(de)按照(zhao)比(bi)例擴(kuo)大(da)或者縮(suo)小(xiao)每(mei)次處(chu)理(li)的(de)全(quan)血量(liang)（20µl-10ml），請聯系我們(men)索取其(qi)它處(chu)理(li)量(liang)的(de)操(cao)作手(shou)冊。

6.DNA溶解液(ye)是(shi)TE緩沖液(ye)洗(xi)脫（10mMTris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），長期(qi)保(bao)存(cun)DNA，但是(shi)EDTA可(ke)能(neng)下遊酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)，使用(yong)時可以(yi)適當(dang)稀(xi)釋(shi)。也可以(yi)使用(yong)水洗(xi)脫，但(dan)應該確保(bao)批pH大(da)於(yu)7.5， pH過低(di)影響(xiang)洗脫效(xiao)率(lv)。用水洗(xi)脫DNA應該保(bao)存(cun)在－20℃。

操作(zuo)步(bu)驟(zhou)：

使用(yong)前，請先(xian)用(yong)去(qu)離(li)子水將(jiang) 10x 紅(hong)細胞裂解液(ye)稀(xi)釋(shi) 10 倍(bei)到(dao) 1x。

1. 吸(xi)取900μl1x紅(hong)細胞裂解液(ye)到(dao)壹(yi)個(ge)1.5ml離心(xin)管(guan)。

2. 將抗凝(ning)全(quan)血（使用(yong)前恢(hui)復至(zhi)室(shi)溫(wen)）顛(dian)倒混勻(yun)後，吸(xi)取 300 μl 加(jia)到(dao)上壹步(bu)裝有紅(hong)細胞裂解液(ye)的(de)離心(xin)管(guan)中，顛(dian)倒6-8次，並(bing)倒置輕(qing)彈管(guan)壁，確保(bao)充(chong)分混勻(yun)。

3.  室(shi)溫(wen)放置10min（期(qi)間(jian)應該顛(dian)倒輕(qing)彈，混勻(yun)數次(ci)幫助(zhu)裂(lie)解紅(hong)細胞）。

4.  12,000rpm離心(xin)20sec，倒棄(qi)紅(hong)色(se)上清，並小(xiao)心(xin)的盡(jin)可能(neng)多的(de)吸(xi)棄(qi)上清，留下完(wan)整(zheng)的(de)管(guan)底白(bai)細胞團(tuan)和大(da)約(yue)10μl的(de)殘留上清。

註意：離(li)心(xin)後在管(guan)底應(ying)該見(jian)到(dao)白(bai)色(se)的白(bai)細胞團(tuan)，也可(ke)能(neng)有壹(yi)些(xie)紅(hong)細胞殘片和白(bai)細胞團(tuan)在壹(yi)起(qi)，但(dan)是如(ru)果(guo)看到(dao)的(de)是(shi)大(da)部(bu)分的紅(hong)色(se)細胞團(tuan)，說(shuo)明紅(hong)細胞裂解很不充(chong)分，應該再(zai)加入(ru)900μl紅(hong)細胞裂解液(ye)重(zhong)懸細胞團(tuan)後重(zhong)復步(bu)驟(zhou)3，4。

5.  渦旋(xuan)振蕩(dang)直(zhi)到(dao)白(bai)細胞團(tuan)充(chong)分重(zhong)懸、分散。

註意：白(bai)細胞的重(zhong)懸分散對下壹步(bu)裂(lie)解非常(chang)重(zhong)要，白(bai)細胞未(wei)打散就(jiu)加入(ru)細胞核裂解液(ye)，會(hui)導致白(bai)細胞不能(neng)充(chong)分裂解，形成肉(rou)眼可見(jian)團(tuan)塊。

6. 加入(ru)300μl細胞核裂解液(ye)到(dao)重(zhong)懸的(de)白(bai)細胞，上下吹(chui)打裂解白(bai)細胞，或者劇烈(lie)渦旋(xuan)10sec幫助(zhu)裂(lie)解白(bai)細胞。

7. (可選(xuan)步(bu)驟(zhou)，壹般(ban)不需要)在(zai)裂解物(wu)中(zhong)加(jia)入(ru)RNaseA（10mg/ml）至終(zhong)濃度30μg/ml，顛(dian)倒25次混勻(yun)，37℃溫(wen)育15min去(qu)除(chu)殘留RNA，然(ran)後(hou)冷卻(que)回(hui)室(shi)溫(wen)。

8. 加入(ru)100μl蛋(dan)白(bai)沈澱(dian)液(ye)後(hou)，渦旋振蕩(dang)25sec,充(chong)分混勻(yun)，可能(neng)見(jian)到(dao)壹(yi)些(xie)小(xiao)的蛋(dan)白(bai)團(tuan)塊。

9. 13,000rpm離心(xin)5min。這時候(hou)應(ying)該可以(yi)見(jian)到(dao)管(guan)底暗褐色(se)的蛋(dan)白(bai)沈澱(dian)，

也可(ke)能(neng)見(jian)到(dao)壹(yi)些(xie)蛋(dan)白(bai)沈澱(dian)漂(piao)浮(fu)在液(ye)體表(biao)面(mian)。

  10. 小心(xin)吸(xi)取上清（大(da)約(yue)300μl）到(dao)壹(yi)個(ge)新(xin)的1.5ml離心(xin)管(guan)中。

註意：吸(xi)取上清時，註意不要吸(xi)到(dao)管(guan)底和漂(piao)浮(fu)在液(ye)體表(biao)面(mian)的(de)蛋(dan)白(bai)沈澱(dian)。如(ru)果(guo)不小心(xin)將蛋(dan)白(bai)沈澱(dian)轉入新(xin)的(de)離心(xin)管(guan)中，可(ke)再(zai)次離(li)心(xin)2min後取上清。

11. 加入(ru)等(deng)體積(ji)的(de)室(shi)溫(wen)異丙(bing)醇(chun)（300μl），輕(qing)柔顛(dian)倒30次混勻(yun)或者直到(dao)出(chu)現(xian)棉絮狀（絲狀）白(bai)色(se)DNA沈澱(dian)。

12.12,000rpm離心(xin)1min，在管(guan)底可(ke)以(yi)見(jian)到(dao)白(bai)色(se)DNA沈澱(dian)塊，倒棄(qi)上清。

13. 加入(ru)1ml70％乙(yi)醇(chun)，顛(dian)倒幾次(ci)漂(piao)洗DNA沈澱(dian)，12,000rpm離心(xin)1min，倒去(qu)上清（註意不要把(ba)DNA沈澱(dian)倒掉(diao)了(le)），倒置後(hou)在(zai)吸(xi)水紙(zhi)上輕(qing)敲幾下(xia)以(yi)控幹(gan)殘留乙(yi)醇(chun)，還(hai)可(ke)以(yi)用槍(qiang)頭(tou)小心(xin)吸(xi)掉(diao)管(guan)底沈(chen)澱(dian)周圍(wei)和管(guan)壁的(de)殘留乙(yi)醇(chun)，空氣(qi)晾幹(gan)沈(chen)澱(dian)幾分鐘。

註意：不要幹(gan)燥(zao)過頭(tou)，否(fou)則DNA極(ji)其(qi)難(nan)溶；也不能(neng)殘留太多乙(yi)醇(chun)，否(fou)則乙(yi)醇(chun)可(ke)能(neng)抑制下(xia)遊如(ru)酶(mei)切(qie)反(fan)應(ying)。

14.  加入(ru)100μlDNA溶解液(ye)重(zhong)新溶解DNA沈澱(dian)，輕(qing)彈管(guan)壁混勻(yun)，可以(yi)放置在65℃溫(wen)育30-60min（不要超(chao)過壹(yi)小(xiao)時），期(qi)間(jian)不時的輕(qing)彈管(guan)壁幫(bang)助(zhu)重(zhong)新水化DNA。也可(ke)以(yi)在室(shi)溫(wen)或者4℃放置過夜來(lai)重(zhong)新水化DNA。

15.   DNA可以(yi)存(cun)放在(zai)2-8℃，如(ru)果(guo)要長時間(jian)存(cun)放，可(ke)以(yi)放置在(zai)－20℃。

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