Blood Genomic DNA Midi Kit

諾(nuo)博(bo)萊(lai)德(de)中量(liang)血液(ye)基(ji)因組DNA 提qu試劑盒（溶液型(xing)）

 中量(liang)全(quan)血基(ji)因組DNA提qu試劑he 核酸(suan)提取

目錄號:40013

產品內容(rong)：

自備試劑：

異丙醇、70％乙(yi)醇(chun)

保(bao)存(cun)條(tiao)件：

室(shi)溫(wen)（15~25℃）

蛋白(bai)酶(mei) K，室(shi)溫(wen)可(ke)保(bao)存(cun) 6 個月(yue)，4℃保(bao)存(cun) 12 個月(yue)，~ 20℃保(bao)存(cun) 2 年(nian)。

具(ju)體(ti)產品的(de)參(can)數(shu)以收(shou)到(dao)產品說(shuo)明(ming)書(shu)的參(can)數(shu)為準(zhun)

產品簡介(jie)：

適用於(yu)從新鮮(xian)、冷凍(dong)或加(jia)入(ru)各(ge)種(zhong)抗(kang)凝劑的(de)血液(ye)樣本中快(kuai)速(su)提取高(gao)質(zhi)量(liang)的(de)基(ji)因組DNA，也可(ke)以提取白(bai)膜(mo)層和血凝塊。

首先紅細胞裂解(jie)液(ye)裂解(jie)去除不含(han)DNA的(de)紅細胞，細胞核裂解(jie)液(ye)裂解(jie)白(bai)細胞釋放出(chu)基(ji)因組DNA， 然(ran)後(hou)蛋白(bai)沈(chen)澱(dian)液(ye)選擇性沈(chen)澱(dian)去除蛋白(bai)，最(zui)後純(chun)凈的(de)基(ji)因組DNA通(tong)過異丙醇沈(chen)澱(dian)並重(zhong)溶解(jie)於(yu)DNA溶解(jie)液(ye)。

產品特點(dian)：

1. 簡便(bian)快(kuai)速(su)：30 min 內可(ke)獲(huo)得高(gao)純(chun)度的(de)基(ji)因組 DNA。

2. 安(an)全無(wu)毒：無(wu)需苯(ben)fen/氯仿(fang)抽(chou)提。

3. 高(gao)產：典(dian)型(xing)的(de)產量 3 ml 全血可(ke)提取出(chu) 50～150µg 基(ji)因組 DNA。

4. 高(gao)純(chun)：OD260/280=1.7～1.9，長(chang)度可(ke)達 50～150 kb，可(ke)直(zhi)接進行可(ke)直(zhi)接用於(yu)構(gou)建(jian)文庫(ku)、PCR、、酶(mei)切、Southern-blot 等分(fen)子生(sheng)物學實(shi)驗。

註(zhu)意事項(xiang)：

1. 本試劑盒可(ke)運用(yong)於(yu)多(duo)種(zhong)抗(kang)凝劑的(de)全血，如 EDTA、檸檬(meng)酸(suan)、肝(gan)素抗(kang)凝血。其中由(you)於肝(gan)素抗(kang)凝血的(de)白(bai)細胞沈(chen)澱(dian)團(tuan)很難打(da)散(san)重懸，影響(xiang)裂解(jie)效(xiao)果，建(jian)議選用(yong)非(fei)肝(gan)素的抗(kang)凝劑收(shou)集(ji)血液(ye)標(biao)本。

2. 為了優(you)良(liang)效(xiao)果，zui hao使(shi)用(yong)新(xin)鮮(xian)血液(ye)標(biao)本或(huo)者4℃存放少(shao)於(yu)3天的標(biao)本，不(bu)要(yao)使(shi)用(yong)反復凍融(rong)超(chao)過3次的標(biao)本，否則(ze)會嚴重降(jiang)低產量。

3. 不同樣(yang)品尤(you)其疾病樣品中白(bai)細胞數量差異可(ke)能(neng)非(fei)常大(da)，血液(ye)DNA產量的個體(ti)差異也可(ke)能(neng)非(fei)常大(da)。

4. 如果結合(he)液(ye)CB、抑(yi)制(zhi)物去除液IR有(you)沈(chen)澱(dian)析(xi)出(chu)，可(ke)在37℃水(shui)浴溶解(jie)，搖(yao)勻後(hou)使(shi)用(yong)。

5. 本試劑盒為溶液型(xing)，可(ke)以很容易(yi)的(de)按照(zhao)比(bi)例(li)擴大(da)或(huo)者縮小每次(ci)處(chu)理的全血量（20µl-10ml），請聯(lian)系我(wo)們(men)索(suo)取其(qi)它處(chu)理量的操作(zuo)手冊(ce)。

6. DNA溶解(jie)液(ye)是TE緩沖液洗脫(tuo)（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)DNA，但是EDTA可(ke)能(neng)下(xia)遊酶(mei)切反應(ying)，使(shi)用(yong)時可(ke)以適當(dang)稀(xi)釋(shi)。也可(ke)以使(shi)用(yong)水(shui)洗脫(tuo)，但應(ying)該(gai)確(que)保(bao)批(pi)pH大(da)於(yu)7.5， pH過(guo)低(di)影(ying)響(xiang)洗脫(tuo)效(xiao)率(lv)。用水洗脫(tuo)DNA應(ying)該保(bao)存(cun)在(zai)－20℃。

操作步(bu)驟(zhou)：

使(shi)用(yong)前(qian)，請先用去離(li)子水(shui)將 10x 紅細胞裂解(jie)液(ye)稀釋(shi) 10 倍(bei)到(dao) 1x。

1. 吸取 15 ml 1x 紅細胞裂解(jie)液(ye)到(dao)壹個 15 ml 離(li)心(xin)管(guan)。

2. 將抗(kang)凝全血（使(shi)用(yong)前(qian)恢復至室(shi)溫(wen)）顛倒混勻後(hou)，吸取 3 ml 加到(dao)上(shang)壹步(bu)裝有紅細胞裂解(jie)液(ye)的離(li)心(xin)管(guan)中，顛倒 6-8 次，並倒(dao)置輕(qing)彈管(guan)壁(bi)，確(que)保(bao)充(chong)分(fen)混勻。

3. 室(shi)溫(wen)放置 10 min（期(qi)間應該(gai)顛倒輕(qing)彈，混勻數(shu)次(ci)幫助裂解(jie)紅細胞）。

4. 2,500 xg 離(li)心(xin) 2 min，倒棄紅色(se)上(shang)清(qing)，並小(xiao)心(xin)的盡可(ke)能(neng)多(duo)的吸棄上(shang)清(qing)，留(liu)下(xia)完整(zheng)的管(guan)底白(bai)細胞團和大(da)約 50 μl 的殘留(liu)上(shang)清(qing)。

註(zhu)意：離(li)心(xin)後在(zai)管(guan)底應該見到(dao)白(bai)色(se)的(de)白(bai)細胞團，也可(ke)能(neng)有(you)壹(yi)些紅細胞殘片和白(bai)細胞團在壹(yi)起，但是如果看到(dao)的是大(da)部(bu)分(fen)的(de)紅色(se)細胞團，說(shuo)明(ming)紅細胞裂解(jie)很不充(chong)分(fen)，應(ying)該(gai)再(zai)加入(ru)適量(liang)紅細胞裂解(jie)液(ye)重懸細胞團後，重(zhong)復步(bu)驟(zhou) 3，4。

5. 渦旋(xuan)振(zhen)蕩直(zhi)到(dao)白(bai)細胞團充分(fen)重(zhong)懸、分(fen)散(san)。

註(zhu)意：白(bai)細胞的重懸分(fen)散(san)對下(xia)壹步(bu)裂解(jie)非(fei)常重(zhong)要(yao)，白(bai)細胞未打(da)散(san)就加(jia)入(ru)細胞核裂解(jie)液(ye)，會導(dao)致白(bai)細胞不能(neng)充(chong)分(fen)裂解(jie)，形成肉眼(yan)可(ke)見團(tuan)塊(kuai)。

6. 加入(ru)3ml 細胞核裂解(jie)液(ye)到(dao)重懸的白(bai)細胞，上(shang)下(xia)吹打(da)裂解(jie)白(bai)細胞，或者劇烈渦旋(xuan) 10 sec 幫助裂解(jie)白(bai)細胞。

7. (可(ke)選步(bu)驟(zhou)，壹(yi)般不需要(yao)) 在裂解(jie)物中加(jia)入(ru) RNase A（10 mg/ml）至終濃度 30 μg/ml，顛倒 25 次混勻，37℃溫(wen)育(yu) 15 min 去除殘留(liu) RNA，然(ran)後(hou)冷卻(que)回(hui)室(shi)溫(wen)。

8. 加入(ru)1ml 蛋白(bai)沈(chen)澱(dian)液(ye)後(hou)，渦旋(xuan)振(zhen)蕩 25 sec, 充分(fen)混勻，可(ke)能(neng)見(jian)到(dao)壹些(xie)小的(de)蛋白(bai)團(tuan)塊(kuai)。

9. 2,500 xg 離(li)心(xin) 5 min。這(zhe)時候(hou)應該可(ke)以見到(dao)管(guan)底暗褐色(se)的(de)蛋白(bai)沈(chen)澱(dian)，也可(ke)能(neng)見(jian)到(dao)壹些(xie)蛋白(bai)沈(chen)澱(dian)漂(piao)浮在(zai)液(ye)體(ti)表(biao)面(mian)。

10. 小心(xin)吸取上(shang)清(qing)（大(da)約 3 ml）到(dao)壹個新的 1.5 ml 離(li)心(xin)管(guan)中。

註(zhu)意：吸取上(shang)清(qing)時，註(zhu)意不(bu)要(yao)吸到(dao)管(guan)底和漂(piao)浮在(zai)液(ye)體(ti)表(biao)面(mian)的蛋白(bai)沈(chen)澱(dian)。如果不小(xiao)心(xin)將蛋白(bai)沈(chen)澱(dian)轉入(ru)新的(de)離(li)心(xin)管(guan)中，可(ke)再(zai)次離(li)心(xin) 2 min 後取上(shang)清(qing)。

11. 加入(ru)等體(ti)積的室(shi)溫(wen)異丙醇（3 ml），輕(qing)柔顛倒 30 次(ci)混勻或(huo)者直(zhi)到(dao)出(chu)現棉(mian)絮狀（絲(si)狀）白(bai)色(se) DNA 沈(chen)澱(dian)。

12. 2,000 xg 離(li)心(xin) 3 min，在管(guan)底可(ke)以見到(dao)白(bai)色(se) DNA 沈(chen)澱(dian)塊(kuai)，倒(dao)棄上(shang)清(qing)。

13. 加入(ru) 3ml 70％乙(yi)醇(chun)，顛倒幾(ji)次(ci)漂洗 DNA 沈(chen)澱(dian)，2,000 xg 離(li)心(xin) 1 min，倒去上(shang)清(qing)（註(zhu)意不(bu)要(yao)把 DNA 沈(chen)澱(dian)倒(dao)掉了），倒置後在(zai)吸水紙上(shang)輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)以控(kong)幹殘留(liu)乙(yi)醇(chun)，還(hai)可(ke)以用槍(qiang)頭小心(xin)吸掉管(guan)底沈(chen)澱(dian)周(zhou)圍(wei)和管(guan)壁(bi)的殘留(liu)乙(yi)醇(chun)，空氣晾幹沈(chen)澱(dian)幾(ji)分(fen)鐘。

註(zhu)意：不(bu)要(yao)幹燥過頭，否則(ze) DNA 極其(qi)難(nan)溶；也不(bu)能(neng)殘留(liu)太多(duo)乙(yi)醇(chun)，否則(ze)乙(yi)醇(chun)可(ke)能(neng)抑(yi)制(zhi)下(xia)遊如酶(mei)切反應(ying)。

14. 加入(ru) 250 μl DNA 溶解(jie)液(ye)重新(xin)溶解(jie) DNA 沈(chen)澱(dian)，輕(qing)彈管(guan)壁(bi)混勻，可(ke)以放置在 65℃溫(wen)育(yu) 30-60 min（不要(yao)超(chao)過壹小時），期(qi)間不時的(de)輕(qing)彈管(guan)壁(bi)幫助重新水化(hua)DNA。也可(ke)以在室(shi)溫(wen)或者 4℃放置過夜(ye)來重新水化(hua) DNA。

15. DNA 可(ke)以存放(fang)在(zai) 2-8℃，如果要(yao)長(chang)時間存放(fang)，可(ke)以放置在－20℃。

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