諾(nuo)博(bo)萊德(de) 大(da)量全(quan)血(xue)基因組(zu)DNA提(ti)qu試(shi)劑(ji)盒 核(he)酸提(ti)取(qu)

Blood Genomic DNA Maxi Kit大(da)量血(xue)液(ye)基因組(zu) DNA 提(ti)qu試(shi)劑(ji)盒（溶液(ye)型）

目錄(lu)號:40014

產(chan)品內容(rong)：

自(zi)備(bei)試(shi)劑(ji)：

異丙(bing)醇、70％乙醇

保存(cun)條件：

室溫(wen)（15~25℃）

產(chan)品簡介(jie)：

適用(yong)於(yu)從新(xin)鮮(xian)、冷(leng)凍(dong)或(huo)加入各(ge)種抗(kang)凝劑(ji)的血(xue)液(ye)樣本(ben)中(zhong)快速提(ti)取(qu)高質(zhi)量的(de)基因組(zu)DNA，也(ye)可以提取(qu)白(bai)膜層(ceng)和血(xue)凝塊(kuai)。

首先紅細(xi)胞裂解液(ye)裂解去除(chu)不(bu)含DNA的(de)紅細(xi)胞，細(xi)胞核(he)裂解液(ye)裂解白(bai)細(xi)胞釋(shi)放出(chu)基因組(zu)DNA， 然(ran)後(hou)蛋白(bai)沈澱液(ye)選擇(ze)性(xing)沈澱去(qu)除(chu)蛋白(bai)，最後(hou)純凈(jing)的(de)基因組(zu)DNA通過異(yi)丙醇沈澱並(bing)重(zhong)溶解於(yu)DNA溶解液(ye)。

產(chan)品特點：

1.  簡便(bian)快速：30 min 內可(ke)獲得(de)高純(chun)度的(de)基因組(zu) DNA。

2.  安全(quan)無(wu)毒(du)：無(wu)需ben酚/氯(lv)仿(fang)抽提。

3.  高產(chan)：典(dian)型的(de)產(chan)量10ml 全(quan)血(xue)可提(ti)取(qu)出(chu)150～500µg 基因組(zu)DNA。

4.   高純(chun)：OD260/280=1.7～1.9，長度可(ke)達50～150kb，可直接進(jin)行(xing)可直接用(yong)於(yu)構建(jian)文庫(ku)、PCR、酶(mei)切、Southern-blot等(deng)分(fen)子生(sheng)物學實(shi)驗(yan)。

註(zhu)意事項：

1.  本(ben)試(shi)劑(ji)盒可(ke)運用(yong)於(yu)多種抗(kang)凝劑(ji)的全(quan)血(xue)，如 EDTA、檸檬酸、肝(gan)素(su)抗(kang)凝血(xue)。其中(zhong)由(you)於(yu)肝(gan)素(su)抗(kang)凝血(xue)的白(bai)細(xi)胞沈(chen)澱團(tuan)很難打散重(zhong)懸(xuan)，影響(xiang)裂解效果(guo)，建(jian)議(yi)選用(yong)非肝(gan)素(su)的(de)抗(kang)凝劑(ji)收集(ji)血(xue)液(ye)標本(ben)。

2.   為(wei)了(le)優良效guo，最(zui)好使用(yong)新(xin)鮮(xian)血(xue)液(ye)標本(ben)或(huo)者(zhe)4℃存放(fang)少於(yu)3天(tian)的(de)標本(ben)，不(bu)要(yao)使用(yong)反(fan)復凍(dong)融(rong)超(chao)過3次的(de)標本(ben)，否(fou)則會(hui)嚴(yan)重降(jiang)低產(chan)量。

3.  不(bu)同樣品尤其(qi)疾(ji)病樣品中白(bai)細(xi)胞數(shu)量差(cha)異(yi)可能非常大(da)，血(xue)液(ye)DNA產(chan)量的(de)個(ge)體差異(yi)也(ye)可能非常大(da)。

4. 如果(guo)結合(he)液(ye)CB、抑制物去除(chu)液(ye)IR有(you)沈(chen)澱析(xi)出(chu)，可在37℃水浴(yu)溶解，搖勻後使用(yong)。

5.   本(ben)試(shi)劑(ji)盒為(wei)溶液(ye)型，可(ke)以很容(rong)易的按照(zhao)比例擴大(da)或(huo)者(zhe)縮(suo)小每次處理的(de)全(quan)血(xue)量（20µl-10ml），請(qing)聯系我們(men)索取(qu)其它(ta)處理量的(de)操(cao)作手(shou)冊。

6.  DNA溶解液(ye)是TE緩(huan)沖液(ye)洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH8.0），長期(qi)保(bao)存DNA，但是EDTA可(ke)能下遊(you)酶(mei)切反(fan)應，使用(yong)時(shi)可(ke)以適當稀釋。也(ye)可以使用(yong)水洗脫，但(dan)應該(gai)確保(bao)批pH大(da)於(yu)7.5，pH過低影響(xiang)洗脫效率。用(yong)水洗脫DNA應該(gai)保(bao)存在－20℃。

操(cao)作步驟：

使用(yong)前(qian)，請(qing)先用(yong)去(qu)離子水將 10x 紅細(xi)胞裂解液(ye)稀釋 10 倍(bei)到(dao) 1x

1.  吸取(qu)30ml1x紅細(xi)胞裂解液(ye)到壹(yi)個(ge)50ml離心管。

2.  將抗(kang)凝全(quan)血(xue)（使用(yong)前(qian)恢(hui)復至(zhi)室(shi)溫(wen)）顛倒(dao)混勻後，吸(xi)取(qu)3ml加到上(shang)壹步裝有(you)紅(hong)細(xi)胞裂解液(ye)的離心管中(zhong)，顛(dian)倒6-8次，並(bing)倒置(zhi)輕(qing)彈管壁，確保(bao)充分混勻。

3.  室溫(wen)放置(zhi)10min（期(qi)間應該(gai)顛(dian)倒輕(qing)彈，混勻數次幫(bang)助裂解紅細(xi)胞）。

 4.2,500xg離心2min，倒棄(qi)紅色(se)上(shang)清，並小心的盡(jin)可(ke)能多的(de)吸(xi)棄(qi)上(shang)清，留下(xia)完(wan)整的(de)管底(di)白(bai)細(xi)胞團(tuan)和大(da)約100μl的殘(can)留上(shang)清。

註(zhu)意：離心後在管(guan)底(di)應該(gai)見(jian)到白(bai)色的(de)白(bai)細(xi)胞團(tuan)，也(ye)可能有(you)壹(yi)些(xie)紅細(xi)胞殘(can)片和白(bai)細(xi)胞團(tuan)在壹(yi)起，但是(shi)如果(guo)看到的是大(da)部(bu)分(fen)的紅色細(xi)胞團(tuan)，說明(ming)紅細(xi)胞裂解很不(bu)充分，應該(gai)再(zai)加入適量紅(hong)細(xi)胞裂解液(ye)重懸(xuan)細(xi)胞團(tuan)後，重(zhong)復步驟3，4。

5. 渦(wo)旋振(zhen)蕩(dang)直到白(bai)細(xi)胞團(tuan)充分重懸(xuan)、分散(san)。

註(zhu)意：白(bai)細(xi)胞的(de)重懸(xuan)分散(san)對(dui)下壹步裂解非常重(zhong)要(yao)，白(bai)細(xi)胞未(wei)打散就加入細(xi)胞核(he)裂解液(ye)，會(hui)導致(zhi)白(bai)細(xi)胞不(bu)能充分裂解，形成(cheng)肉眼(yan)可見(jian)團(tuan)塊(kuai)。
6. 加入10ml細(xi)胞核(he)裂解液(ye)到重(zhong)懸(xuan)的白(bai)細(xi)胞，上(shang)下吹打裂解白(bai)細(xi)胞，或(huo)者(zhe)劇烈渦(wo)旋10sec幫(bang)助裂解白(bai)細(xi)胞。
7. (可選步驟，壹(yi)般(ban)不(bu)需要(yao))在裂解物中加入RNaseA（10 mg/ml）至(zhi)終(zhong)濃(nong)度30μg/ml，顛倒(dao)25次混(hun)勻，37℃溫育15min去除(chu)殘(can)留RNA，然後(hou)冷(leng)卻回(hui)室溫(wen)。
8.  加入3.33 ml蛋白(bai)沈澱液(ye)後，渦(wo)旋振(zhen)蕩(dang)25 sec,充分混勻，可能見到(dao)壹(yi)些小的蛋白(bai)團(tuan)塊(kuai)。
9. 2,500xg 離心5min。這時(shi)候應該(gai)可(ke)以見到管(guan)底(di)暗褐(he)色的(de)蛋白(bai)沈澱，也(ye)可能見到(dao)壹(yi)些蛋白(bai)沈澱漂(piao)浮(fu)在液(ye)體表(biao)面(mian)。

10.  小心吸取(qu)上(shang)清（大(da)約10ml）到壹(yi)個新(xin)的(de)50ml離心管中(zhong)。

註(zhu)意：吸取(qu)上(shang)清時，註(zhu)意不(bu)要(yao)吸(xi)到管底(di)和漂浮(fu)在液(ye)體表(biao)面(mian)的(de)蛋白(bai)沈澱。如果(guo)不(bu)小心將蛋白(bai)沈澱轉(zhuan)入新(xin)的(de)離心管中(zhong)，可(ke)再次離心2min後取(qu)上(shang)清。

11.  加入等(deng)體積的(de)室溫異丙(bing)醇（10ml），輕(qing)柔(rou)顛(dian)倒(dao)30次混(hun)勻或(huo)者(zhe)直到出(chu)現棉絮狀（絲狀）白(bai)色DNA沈(chen)澱。

12.2,000xg離心3min，在管(guan)底(di)可以見到白(bai)色DNA沈澱塊(kuai)，倒棄(qi)上(shang)清。

13. 加入10ml70％乙醇，顛倒幾(ji)次漂(piao)洗DNA沈澱，2,000xg離心1min，倒去(qu)上(shang)清（註(zhu)意不(bu)要(yao)把(ba)DNA沈澱倒(dao)掉(diao)了(le)），倒置(zhi)後(hou)在吸(xi)水紙上(shang)輕(qing)敲幾(ji)下(xia)以控幹殘(can)留乙醇，還(hai)可以用(yong)槍(qiang)頭小心吸掉(diao)管底(di)沈澱周(zhou)圍(wei)和管壁的殘(can)留乙醇，空(kong)氣(qi)晾(liang)幹沈(chen)澱幾(ji)分(fen)鐘。

註(zhu)意：不(bu)要(yao)幹(gan)燥(zao)過(guo)頭，否(fou)則DNA極其難溶；也(ye)不(bu)能殘(can)留太(tai)多乙醇，否(fou)則乙醇可能抑制下(xia)遊(you)如酶(mei)切反(fan)應。

14.   加入600μlDNA溶解液(ye)重新(xin)溶解DNA沈澱，輕(qing)彈管壁混勻，可以放置(zhi)在65℃溫育30-60min（不(bu)要(yao)超(chao)過壹小時），期(qi)間不(bu)時的(de)輕(qing)彈管壁幫助重新(xin)水化DNA。也(ye)可以在室(shi)溫或(huo)者(zhe)4℃放置(zhi)過(guo)夜來重(zhong)新(xin)水化DNA。

15.   DNA可以存放在2-8℃，如果(guo)要(yao)長(chang)時間存放(fang)，可(ke)以放置(zhi)在－20℃。

相(xiang)關(guan)產(chan)品：

50111-500 10000x GenRed（同GelRed）  無(wu)毒核(he)酸染(ran)料 凝(ning)膠(jiao)成(cheng)像(xiang)儀(yi)用(yong)

71800-05 2x Lightning Taq PCR MasterMix（含染(ran)料） 延(yan)伸(shen)速度：6 kb/min

71517-05  2x KOD PCR MasterMix（含染(ran)料）  擴增長(chang)度≤6kb  6 kb/min

大(da)量全(quan)血(xue)基因組(zu)DNA提(ti)qu試(shi)劑(ji)盒 核(he)酸提(ti)取(qu)