FlashPure Universal Genomic DNA Kit

血液/細(xi)胞(bao)/組織(zhi)/鼠尾/細(xi)菌基(ji)因組 DNA 提(ti)qu試劑(ji)盒

（離心柱型）

血液/細(xi)胞(bao)/細(xi)菌基(ji)因組DNA快速(su)提(ti)取(qu)試劑(ji)盒 

目(mu)錄號(hao):40110

產(chan)品(pin)內(nei)容(rong)：

自備試劑(ji)：

無(wu)水(shui)乙醇，RNase A（可選），溶菌mei（用(yong)於(yu)革(ge)蘭(lan)氏(shi)陽(yang)性菌，可選）

保(bao)存(cun)條件：

室溫(wen)（15~25℃）

蛋(dan)白(bai)酶(mei) K，室溫(wen)可保(bao)存(cun) 6 個月，4℃保(bao)存(cun) 12 個月，~ 20℃保(bao)存(cun) 2 年。

具(ju)體(ti)產(chan)品(pin)的參(can)數(shu)以(yi)收(shou)到產(chan)品(pin)說(shuo)明書(shu)的參(can)數(shu)為(wei)準

產(chan)品(pin)簡(jian)介：

適用(yong)於(yu)從(cong)血(xue)液(ye)、培(pei)養細(xi)胞(bao)、動(dong)物組(zu)織(zhi)、植物組(zu)織(zhi)、鼠尾(wei)、細(xi)菌等(deng)樣(yang)本(ben)中(zhong)快(kuai)速(su)提(ti)取(qu)高質量的基(ji)因組DNA。

本(ben)試劑(ji)盒采(cai)用(yong)du特(te)的裂解液(ye)，利(li)用(yong)矽膠(jiao)膜特(te)異(yi)吸附DNA，無(wu)需(xu)酚(fen)氯(lv)仿(fang)等有(you)毒(du)試劑(ji)，也無(wu)需(xu)進(jin)行(xing)耗(hao)時(shi)的醇(chun)類(lei)沈澱，最大(da)限度的去除(chu)蛋(dan)白(bai)及其(qi)他抑制(zhi)性雜(za)質，得(de)到基因組DNA，無(wu)蛋(dan)白(bai)、核酸酶(mei)汙染(ran)，可直接(jie)進(jin)行(xing)PCR、酶(mei)切(qie)和(he)雜(za)交等相關(guan)分子(zi)生物學(xue)實(shi)驗。

產(chan)品(pin)特(te)點:

1. 簡(jian)便(bian)快(kuai)速(su)：30 min 內可獲得(de)高(gao)純度的基(ji)因組 DNA。

2. 安全無(wu)毒(du)：無(wu)需(xu)苯fen/氯仿(fang)抽提(ti)。

3. 高產(chan)：典(dian)型的產(chan)量 200µl 全血可提(ti)取(qu)出(chu) 3～6µg 基(ji)因組 DNA，

4. 高純(chun)：OD260/280=1.7～1.9，長度可達 30～50 kb，可直接(jie)進(jin)行(xing) PCR、酶(mei)切(qie)和(he)雜(za)交等分子(zi)生物學(xue)實(shi)驗。

註意(yi)事(shi)項:

1. 如果裂解液(ye)TL、結(jie)合(he)液(ye)CB、抑(yi)制(zhi)物去除(chu)液IR有(you)沈澱析出(chu)，可在37℃水(shui)浴(yu)溶(rong)解，搖勻(yun)後使用(yong)。

2. 開始實(shi)驗前(qian)將需(xu)要(yao)的水(shui)浴(yu)先(xian)預熱(re)到70℃備用(yong)。

3. 為了(le)優(you)良效(xiao)guo，最好使用(yong)新(xin)鮮血液標本(ben)或者(zhe)4℃存放(fang)少於3天的標(biao)本(ben)，不(bu)要(yao)使用(yong)反(fan)復凍(dong)融(rong)超過3次的標(biao)本(ben)，否則會嚴(yan)重(zhong)降低產(chan)量，不(bu)同(tong)樣品(pin)尤(you)其疾(ji)病樣品(pin)中(zhong)白(bai)細(xi)胞(bao)數(shu)量差異(yi)可能非常大，因此產(chan)量的個(ge)體(ti)差異也可能非常大。

操作步驟:

第壹(yi)次使(shi)用(yong)前(qian)，請(qing)先(xian)在(zai)漂洗(xi)液 WB 中(zhong)加入(ru)指(zhi)ding量無(wu)水(shui)乙醇，詳(xiang)見(jian)瓶(ping)身的標(biao)簽(qian)。提(ti)示(shi)：所有(you)離心(xin)步驟必須在室(shi)溫(wen)（15~25℃）下進(jin)行(xing)。

1. 柱平(ping)衡：向吸(xi)附柱(zhu)的膜中(zhong)央（吸附(fu)柱放入(ru)收(shou)集管中(zhong)）加入(ru) 100μl 平(ping)衡液，12,000 rpm 離心(xin) 1 min，棄(qi)濾液，將吸附柱重(zhong)新(xin)放(fang)回收(shou)集管中(zhong)。

（請使(shi)用(yong)當天處(chu)理過(guo)的柱(zhu)子(zi)）

2. 材料(liao)處(chu)理：

a. 血液(ye)

取 200 μl 新(xin)鮮、冷(leng)凍(dong)或加入(ru)各(ge)種抗凝劑(ji)的血(xue)液(ye)，放入 1.5 ml 離心(xin)管。

▲如果全血起始量小於200 μl，則用(yong)1× PBS補(bu)足到200 μl。

如果起始量介於(yu)300 μl~1 ml之間，則需(xu)要(yao)先進(jin)行(xing)紅(hong)細(xi)胞(bao)裂解操作: 在樣(yang)品(pin)中(zhong)加入(ru)3倍(bei)體(ti)積(ji)紅(hong)細(xi)胞(bao)裂解液(ye)顛(dian)倒(dao)混勻(yun)，室溫(wen)放置(zhi)10 min，期(qi)間再顛(dian)倒(dao)混勻(yun)幾次。13,000 rpm離心(xin)20 sec(對於(yu)1.5 ml離心(xin)管)或2,000 ~ 3,000 rpm離心(xin)5 min(對於15 ml離(li)心(xin)管)，吸去上(shang)清(qing)，留下白(bai)細(xi)胞(bao)沈澱（如果看到的是(shi)大(da)部(bu)分的紅(hong)色細(xi)胞(bao)團(tuan)，則再次重(zhong)復上(shang)述(shu)紅細(xi)胞(bao)裂解步(bu)驟(zhou)），加入(ru) 200 μl 1× PBS，振蕩(dang)至che底(di)懸浮(fu)。

▲如果處(chu)理血(xue)樣為(wei)禽(qin)類、鳥(niao)類、兩(liang)棲類(lei)或更低級生物的抗凝血液(ye)，其紅(hong)細(xi)胞(bao)為有(you)核細(xi)胞(bao)，因此處(chu)理量僅(jin)用(yong)5 ~ 20 μl，可加1× PBS 補(bu)足到200 μl後，進(jin)行(xing)下面的裂解步(bu)驟(zhou)。

b. 培(pei)養細(xi)胞(bao)

① 105 ~ 106 懸浮(fu)細(xi)胞(bao)到壹(yi)個1.5 ml 離心(xin)管；對於貼(tie)壁細(xi)胞(bao)，應該(gai)先用(yong)胰(yi)蛋(dan)bai酶(mei)消化後吹打下來(lai)收(shou)集。

②  13, 000 rpm 離心(xin) 10 sec，吸棄(qi)上(shang)清(qing)，留下細(xi)胞(bao)團(tuan)。

③ 加入(ru) 200 μl 1× PBS 重懸(xuan)洗(xi)滌細(xi)胞(bao)，13, 000 rpm 離心(xin) 10 sec，wan全吸棄(qi)上(shang)清(qing)。

④ 再次加入(ru) 180 μl 1× PBS，振蕩(dang)混勻(yun)，使細(xi)胞(bao)che底(di)懸浮(fu)。

c. 動(dong)物組(zu)織(zhi)、植物組(zu)織(zhi)（例如鼠(shu)肝腦(nao)或者(zhe)植物葉(ye)片(pian)）

將 20 ~ 50 mg（脾組(zu)織用(yong)量應少(shao) 10 mg）新(xin)鮮或者(zhe)解凍(dong)的組(zu)織(zhi)用(yong)

解剖(pou)dao切(qie)成(cheng)小碎塊(kuai)（切(qie)成(cheng)小塊(kuai)可以(yi)提(ti)高(gao)產(chan)量）或者(zhe)在液(ye)氮中(zhong)研磨組(zu)

織成(cheng)細(xi)粉(fen)後，轉(zhuan)入(ru)裝有(you) 180 μl 組織(zhi)裂解液(ye) TL 的 1.5 ml 離心(xin)管中(zhong)，

用(yong)大(da)口徑(jing)槍(qiang)頭吹打混勻(yun)。

d. 鼠尾(wei)

將 0.2 ~ 0.5 cm 的鼠(shu)尾(wei)巴(ba)尖(jian)(即(ji) 20 ~ 50 mg)剪(jian)碎（壹(yi)定要(yao)剪(jian) 0 ~ 2cm範(fan)圍內(nei)的尾(wei)巴(ba)尖(jian)，否則裂解效(xiao)果不(bu)好），或者(zhe)在液(ye)氮中(zhong)研磨成(cheng)細(xi)粉(fen)後，轉(zhuan)入(ru)裝(zhuang)有(you) 180 μl 裂解液(ye) TL 的 1.5 ml 離心(xin)管中(zhong)，用(yong)大(da)口徑(jing)槍(qiang)頭吹打混勻(yun)。

e. 細(xi)菌

① 取 0.5 ~ 2 ml 培(pei)養菌液(ye)（最多(duo)不(bu)超過 2×109 個細(xi)胞(bao)），10, 000 rpm，

離心(xin) 30 sec，盡(jin)可能的吸(xi)棄(qi)上(shang)清(qing)，收集菌體(ti)。

▲起始處(chu)理量可以(yi)根據細(xi)菌密(mi)度、細(xi)胞(bao)種類(lei)、預期(qi)產(chan)量進(jin)行(xing)調整(zheng)，但是(shi)離心吸(xi)附柱最大(da)吸附(fu)能力是 30 μg 基因組 DNA，如果菌體(ti)過量超過最大(da)吸附(fu)能力，反(fan)而會嚴(yan)重(zhong)降低產(chan)量。

② 加入(ru) 200 μl 1× PBS 重懸(xuan)，10, 000 rpm 離心(xin) 30 sec，吸棄(qi)上(shang)清(qing)。

將細(xi)胞(bao)振蕩(dang)或者(zhe)吹打充(chong)分重(zhong)懸於(yu) 180 μl 1× PBS 中(zhong)。

▲註意(yi)：對(dui)於較難破壁的革(ge)蘭(lan)氏(shi)陽(yang)性菌，可略過 b 步驟(zhou)，加入(ru)溶(rong)菌mei進(jin)行(xing)破壁處(chu)理，具(ju)體(ti)方(fang)法(fa)為(wei)：加入(ru) 180 μl 緩沖液(20 mM Tris, pH 8.0； 2 mM Na2-EDTA；1.2% Triton X~100；臨用(yong)前(qian)加入(ru)終濃度為 20 mg/ ml 的溶(rong)菌mei(溶(rong)菌mei必(bi)須(xu)用(yong)溶(rong)菌mei幹(gan)粉(fen)溶解在緩(huan)沖液中(zhong)進(jin)行(xing)配(pei)制(zhi)，否則會導(dao)致(zhi)溶(rong)菌mei無(wu)活性))，37℃處(chu)理 30 min 以(yi)上(shang)。

3. 加入(ru) 20 μl 蛋(dan)白(bai)酶(mei)K 溶液(ye)，充(chong)分混勻(yun)。

a. 提(ti)取(qu)血液基因組時(shi)，只(zhi)需(xu)加入(ru) Proteinase K 混勻(yun)，即(ji)可進(jin)行(xing)下壹(yi)步。

b. 提(ti)取(qu)細(xi)胞(bao)基因組時(shi)，只(zhi)需(xu)加入(ru) Proteinase K 混勻(yun)，即(ji)可進(jin)行(xing)下壹(yi)步。

c. 提(ti)取(qu)動(dong)物組(zu)織(zhi)、植物組(zu)織(zhi)的基(ji)因組時(shi)，加入(ru)Proteinase K混勻(yun)後，在 56℃放置(zhi) 1~3 小時(shi)，每(mei)小時(shi)顛(dian)倒(dao)混合(he)樣(yang)品(pin) 2~3 次，直至組織wan全消化溶(rong)解，再進(jin)行(xing)下壹(yi)步。

d. 提(ti)取(qu)鼠尾基因組時(shi)，加入(ru) Proteinase K 混勻(yun)後，在 56℃放(fang)置(zhi) 3 小時(shi)（也可以(yi)過(guo)夜(ye)消化），每(mei)小時(shi)顛(dian)倒(dao)混合(he)樣(yang)品(pin) 2~3 次，直至組織wan全消化溶(rong)解，再進(jin)行(xing)下壹(yi)步。

e. 提(ti)取(qu)細(xi)菌基(ji)因組時(shi)，只(zhi)需(xu)加入(ru) Proteinase K 混勻(yun)，即(ji)可進(jin)行(xing)下壹(yi)步。

4. （可選步(bu)驟(zhou)）加入(ru) 5 μl RNase A (100mg/ml) 溶液(ye)，振蕩(dang)混勻(yun)，室溫(wen)放置(zhi) 5 ~ 10min。

5. 加入(ru)200 μl 結(jie)合(he)液(ye)CB，充(chong)分振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，70℃水浴(yu)或金屬浴(yu)處(chu)理10 min。

6. 冷(leng)卻後加 100 μl 無(wu)水(shui)乙醇 (或異丙(bing)醇(chun))，充(chong)分振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)，此時(shi)可能會(hui)出(chu)現絮(xu)狀沈澱，短(duan)暫離心以(yi)去除(chu)管蓋(gai)內壁水珠。

7. 將所得溶液(ye)和(he)絮(xu)狀沈澱加入(ru)壹(yi)個DNA 吸附(fu)柱中(zhong)，（吸附(fu)柱放入(ru)收(shou)集管中(zhong)）13, 000 rpm 離心(xin) 1 min，DNA 被吸(xi)附在膜上(shang)，倒(dao)棄(qi)濾液。

8. 加入(ru) 500 μl 抑制(zhi)物去除(chu)液 IR，13, 000 rpm 離心(xin) 30 sec，倒(dao)棄(qi)濾液。

9. 加入(ru) 600 μl 漂洗(xi)液 WB（請檢(jian)查是(shi)否已(yi)加入(ru)無(wu)水(shui)乙醇），13, 000 rpm離心(xin) 30 sec，倒(dao)棄(qi)濾液。

10. 重復步(bu)驟(zhou) 9 壹(yi)遍。

11. 將 DNA 吸附(fu)柱放回(hui)空(kong)收(shou)集管中(zhong)，13, 000 rpm 離心(xin) 2 min，盡(jin)量除去漂(piao)洗(xi)液，以(yi)免(mian)漂(piao)洗(xi)液中(zhong)殘(can)留(liu)乙醇抑(yi)制下遊反應。

12. 取出(chu) DNA 吸附(fu)柱，放入(ru)壹(yi)個幹(gan)凈的 1.5 ml 離心(xin)管中(zhong)，向吸(xi)附膜的中(zhong)央加入(ru) 100 μl 洗(xi)脫(tuo)緩(huan)沖液 EB （洗(xi)脫(tuo)緩(huan)沖液事(shi)先(xian)在 80 ~ 100℃水浴(yu)中(zhong)預熱(re)可以(yi)提(ti)高(gao)產(chan)量），室溫(wen)放置(zhi)3 ~ 5 min，13, 000 rpm 離心(xin)1min。

▲可將第壹(yi)次洗(xi)脫(tuo)所(suo)得(de)溶液重新(xin)加入(ru)離(li)心柱(zhu)中(zhong)，室(shi)溫(wen)放置(zhi) 2 min，13, 000 rpm離心(xin)1min。可以(yi)提(ti)高(gao)濃度10%左右(you)。

13. DNA 可以(yi)存(cun)放(fang)在(zai)~ 20℃，如果要(yao)長時(shi)間存放(fang)，可以(yi)放(fang)置(zhi)在(zai)~70℃。

相關(guan)產(chan)品(pin)：

50110-500  10000x GenGreen（同(tong)GelGreen）無(wu)毒(du)核酸染(ran)料 藍光切(qie)膠(jiao)儀用(yong)

50111-500  10000x GenRed（同(tong)GelRed）無(wu)毒(du)核酸染(ran)料 凝膠(jiao)成(cheng)像儀(yi)用(yong)

71019-05 2x Taq PCR MasterMix（含染料(liao)）延伸速(su)度：2 kb/min 

71800-05 2x Lightning Taq PCR MasterMix（含染料(liao)）延(yan)伸(shen)速(su)度：6 kb/min 

71812-05 2x FastHiFi PCR MasterMix（含染料(liao)）擴(kuo)增(zeng)長度≤3kb 3 kb/min 

71814-05 2x LongHiFi PCR MasterMix（含染料(liao)）擴(kuo)增(zeng)長度≤10kb 4 kb/min 

71517-05  2x KOD PCR MasterMix（含染料(liao)）擴(kuo)增(zeng)長度≤6kb  6 kb/min

 血液/細(xi)胞(bao)/細(xi)菌基(ji)因組DNA快速(su)提(ti)取(qu)試劑(ji)盒