諾博萊德(de) 彩(cai)色(se)無(wu)內(nei)毒素質粒(li)大(da)提試劑盒 核(he)酸提取

EndoFree Plasmid Maxi Kit彩(cai)色(se)無(wu)內(nei)毒素質粒(li)大(da)提試劑盒

目(mu)錄(lu)號(hao)：31115-10

產(chan)品(pin)內(nei)容：

保(bao)存條(tiao)件：

在(zai)室(shi)溫(15~25℃)幹(gan)燥條(tiao)件下(xia)，可(ke)保(bao)存 12 個(ge)月(yue)。

RNaseA，可(ke)常溫運輸，-20℃保(bao)存。

具(ju)體產(chan)品(pin)的(de)參數(shu)以(yi)收到(dao)產(chan)品(pin)說(shuo)明書的參(can)數(shu)為(wei)準

產(chan)品(pin)簡介：

本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)用(yong)於無內毒素質粒(li) DNA 的大(da)量(liang)制備，柱(zhu)上(shang)去(qu)除內(nei)毒素，操作(zuo)簡單。菌體經(jing)改良的堿(jian)裂解處(chu)理(li)，質(zhi)粒(li)可(ke)從(cong)菌體中(zhong)釋(shi)放(fang)出(chu)來，並特(te)異(yi)、高(gao)效(xiao)地(di)被(bei)離心(xin)柱(zhu)矽(gui)膠(jiao)膜(mo)吸(xi)附。通(tong)過去(qu)蛋(dan)白(bai)液(ye)和(he)漂洗(xi)液的(de)清洗可去(qu)除蛋(dan)白(bai)及其他(ta)雜(za)質，最後得(de)到(dao)高(gao)純度的無(wu)內(nei)毒素質粒(li) DNA，所得(de)質(zhi)粒(li)可(ke)直(zhi)接(jie)用(yong)於酶切、轉化、PCR、測序、細胞(bao)轉染(ran)等分(fen)子(zi)生物(wu)學(xue)實驗(yan)。

小(xiao)質粒（<10kb），拷貝數(shu)高(gao)，100ml 菌液(ye)通常能提到(dao) 500-1500ug 質(zhi)粒(li)；大(da)質(zhi)粒（>10kb），拷貝數(shu)低(di)，200ml 菌液(ye)通常能提到(dao) 200-600ug 質(zhi)粒(li)。

產(chan)品(pin)特(te)點：

1.        獨(du)te工(gong)藝配(pei)方(fang)清除內(nei)毒素，內毒素含量極(ji)低(di)（< 1 EU/ug DNA），細(xi)胞(bao)轉染(ran)效(xiao)果(guo)極(ji)jia。

2.        得(de)率高：150–300 ml 菌液(ye)可提出多(duo)達(da) 500– 2000 ug 的(de)純凈質粒(li)；

重要提示：

壹(yi)、使(shi)用(yong)前檢查 Solution II 和(he) Solution N3 是(shi)否(fou)出(chu)現(xian)沈(chen)澱，如(ru)有(you)沈(chen)澱(dian) 37℃加熱(re)溶解(jie)後(hou)再(zai)用(yong)。

二(er)、首ci使(shi)用(yong)前，請(qing)先在 Buffer WB2 中(zhong)加入無(wu)水乙(yi)醇(chun)（詳見(jian)瓶(ping)身(shen)標(biao)簽(qian)），混勻(yun)，並做(zuo)好(hao)標(biao)記(ji)。

三、首ci使(shi)用(yong)請(qing)先將(jiang) RNase A 全(quan)部(bu)加到(dao) Solution I 中(zhong)，混勻(yun)，每次使用(yong)後置於 2 ~ 8℃保(bao)存。

操(cao)作(zuo)步驟：

1. 柱(zhu)平(ping)衡(heng)：向吸(xi)附柱(zhu)中(zhong)（吸(xi)附柱(zhu)放(fang)入收(shou)集管(guan)中(zhong)）加入 2.5 ml 的(de)Buffer BL，10,000 rpm 離心(xin) 2 min，棄(qi)收(shou)集管(guan)中(zhong)濾(lv)液，將(jiang)吸附柱(zhu)重新放(fang)回(hui)收集管(guan)中(zhong)。

2.取(qu) 100 ~ 150 ml（最多(duo) 200 ml）過夜(ye)培養(yang)的(de)菌液(ye)，室溫 10,000 rpm 離心(xin) 2 min，棄(qi)上(shang)清，收集菌體。

（註意： 如(ru)果(guo)菌液(ye)濃(nong)度高，收(shou)集 100ml 的(de)菌體即(ji)可(ke),菌液(ye)濃(nong)度低(di)，收(shou)集 150-200ml 菌液(ye)。）

3.加入 10 ml Solution I，重懸菌體沈(chen)澱(dian)，渦(wo)旋(xuan)震(zhen)蕩(dang)至(zhi)徹(che)di懸浮(fu)，呈現(xian)出(chu)均勻(yun)渾濁(zhuo)的棕(zong)紅(hong)色(se)。

（註意：如(ru)有(you)未徹(che)di懸浮(fu)的菌塊(kuai)會(hui)影(ying)響(xiang)裂解，導(dao)致(zhi)提取的質粒(li)濃(nong)度及純度降低(di)）

4.加入 10 ml Solution II，顛(dian)倒混勻(yun)使(shi)菌體完(wan)quan裂解，直(zhi)到(dao)溶液(ye)變(bian)清亮、粘稠的(de)紫(zi)紅(hong)色(se)。

（註意：不可(ke) Votex 劇(ju)烈震(zhen)蕩(dang)，以(yi)免(mian)造成基因(yin)組(zu) DNA 片段的汙(wu)染(ran)，所用(yong)時間不要超(chao)過 5 min，以(yi)免(mian)質(zhi)粒(li)受到(dao)破(po)壞，如(ru)未完(wan)quan變(bian)得清亮，可能是(shi)菌體太(tai)多(duo)，可(ke)增(zeng)加 Solution II 的(de)用(yong)量，在後續(xu)的操(cao)作(zuo)中(zhong) Solution N3 的(de)用(yong)量也(ye)要相應(ying)增(zeng)加）

5.加入 10 ml Solution N3，立(li)即(ji)溫和(he)顛(dian)倒混勻(yun)，可(ke)見(jian)紅(hong)黃相間的絮狀(zhuang)物產(chan)生(sheng)，繼(ji)續(xu)混勻(yun)直(zhi)

到(dao)完(wan)quan變(bian)為(wei)黃色(se)，靜置 2 min，然後(hou)室溫 10,000 rpm 離心(xin) 10 min，小(xiao)心取上(shang)清至(zhi)新(xin)管(guan)。

（註意：離心(xin)後(hou)在最上層(ceng)可能(neng)會(hui)出(chu)現(xian)壹(yi)層(ceng)漂浮(fu)膜(mo)，註意不要倒入吸(xi)附柱(zhu)）

6.   加入 0.3 倍(bei)濾(lv)液體積(ji)的(de)異(yi)丙(bing)醇(chun)，上下(xia)顛(dian)倒混勻(yun)。分(fen)兩(liang)次（每次不超(chao)過 10 ml）轉入吸(xi)附柱(zhu)中(zhong)（吸(xi)附柱(zhu)放(fang)入收(shou)集管(guan)中(zhong)），10,000 rpm 離心(xin) 1 min，質(zhi)粒(li)被(bei)吸(xi)附在(zai)膜(mo)上(shang)，棄(qi)濾(lv)液，直(zhi)到(dao)所有(you)混合溶液(ye)通(tong)過此(ci)吸(xi)附柱(zhu)。

7.   向(xiang)吸(xi)附柱(zhu)中(zhong)加入 5 ml ToxinOut Buffer，室(shi)溫 10,000 rpm 離心(xin) 1 min，棄(qi)濾(lv)液。

8.加入 10 ml Buffer WB2，室(shi)溫 10,000 rpm 離心(xin) 1 min，棄(qi)濾(lv)液。

（註意：Buffer WB2 為(wei)濃(nong)縮液，按(an)要求加入無(wu)水乙(yi)醇(chun)，用(yong)後應(ying)立(li)即(ji)蓋緊(jin)瓶(ping)蓋(gai)，以防酒(jiu)精(jing)揮(hui)發）

9.加入 5 ml Buffer WB2，室(shi)溫 10,000 rpm 離心(xin) 1 min，棄(qi)濾(lv)液。

10.  將(jiang)吸附柱(zhu)放(fang)進(jin)收(shou)集管(guan)，室(shi)溫 10,000 rpm 離心(xin) 5 min，甩(shuai)幹(gan)膜(mo)上(shang)殘(can)留(liu)乙(yi)醇(chun)。

11.將(jiang)吸附柱(zhu)置於壹(yi)個新(xin)的 50 ml 離心(xin)管(guan)（自(zi)備）中(zhong)，打(da)開(kai)管(guan)蓋(gai)，室溫晾(liang)幹(gan) 5 min，以(yi)免(mian)殘(can)留(liu)乙(yi)醇(chun)影(ying)響(xiang)下(xia)遊(you)應(ying)用(yong)。

12. 加入 1 ~ 2 ml 的(de)洗(xi)脫液Buffer EB，室(shi)溫放(fang)置 2 min，12,000 rpm 離心(xin) 2 min，離心(xin)管(guan)底(di)溶液(ye)即(ji)質(zhi)粒(li) DNA。

（註意：事(shi)先在 65~70℃水浴(yu)中(zhong)預熱(re)洗(xi)脫緩沖液(ye) EB，可(ke)增(zeng)加洗脫效(xiao)率；

如(ru)果(guo)需(xu)要較(jiao)多(duo)量(liang)質(zhi)粒，可將(jiang)得到(dao)的(de)質粒溶液(ye)重新加入吸(xi)附柱(zhu)中(zhong)，重復收(shou)集 3 次(ci)，可(ke)獲(huo)得(de)最大(da)洗(xi)脫率；如(ru)需(xu)使(shi)用(yong)去(qu)離子(zi)水洗脫，可用(yong) NaOH 調(tiao)整(zheng)其 pH 值(zhi)在 7.0 - 8.5 之(zhi)間。）

彩(cai)色(se)無(wu)內(nei)毒素質粒(li)大(da)提試劑盒 核(he)酸提取