諾博萊(lai)德(de) 通(tong)用(yong)型DNA純(chun)化(hua)回(hui)收試(shi)劑(ji)盒 核(he)酸(suan)提取(qu)

Universal DNA Purification Kit通用(yong)型 DNA 純(chun)化(hua)回(hui)收試(shi)劑(ji)盒

目錄號(hao):43013

產品(pin)內容(rong)：

自(zi)備(bei)試(shi)劑(ji)：

無水(shui)乙醇

保存(cun)條(tiao)件：

室(shi)溫(wen)（15 ~ 25℃）

產品(pin)簡介：

本試劑盒(he)既能(neng)從TAE 或TBE 瓊脂(zhi)糖凝膠(jiao)中回(hui)收 DNA 片段(duan)，又能用(yong)於(yu)直接純(chun)化(hua) PCR 產物(wu)，還適(shi)用(yong)於(yu)酶切產物 DNA 片段(duan)的(de)純(chun)化(hua)回(hui)收、探(tan)針(zhen)標(biao)記(ji)後(hou)的(de)純(chun)化(hua)回(hui)收、DNA 樣(yang)本濃縮。使(shi)用(yong)本產品可(ke)回收 100bp-10kb 大小的(de)DNA 片段(duan)，回(hui)收率(lv)可(ke)達 85%-95%。該試劑盒操(cao)作(zuo)簡便(bian)，得到的(de) DNA 片段(duan)可(ke)用(yong)於(yu)酶切、連接、測(ce)序等(deng)實驗(yan)。

具體(ti)產品(pin)的(de)參(can)數(shu)以(yi)收到(dao)產(chan)品說明書的(de)參(can)數(shu)為(wei)準(zhun)

註(zhu)意(yi)事(shi)項：

1.  Buffer BL 的(de)加(jia)入能(neng)夠(gou)改善吸(xi)附(fu)柱的(de)吸(xi)附(fu)能(neng)力並(bing)提高(gao)吸(xi)附(fu)柱的(de)均(jun)壹(yi)性(xing)和穩定(ding)性，消除高(gao)溫(wen)潮濕或其他不(bu)良環(huan)境(jing)因素(su)對吸(xi)附(fu)柱造成(cheng)的(de)影響(xiang)。收到(dao)貨(huo)後(hou) 2 個月(yue)內，不(bu)用(yong)做(zuo)柱平(ping)衡。

2.   使(shi)用(yong)前(qian)請(qing)先檢查Buffer BL、Buffer DB 是(shi)否(fou)出(chu)現渾(hun)濁(zhuo)，如有(you)混(hun)濁(zhuo)現象，可(ke)在 37℃水(shui)浴(yu)中加(jia)熱幾(ji)分(fen)鐘(zhong)，即可(ke)恢復澄(cheng)清。

3.    切膠(jiao)時(shi)，紫(zi)外(wai)照(zhao)射(she)時(shi)間應(ying)盡量(liang)短，以免(mian)對 DNA 造成(cheng)損傷。

4.    回收率(lv)與初始 DNA 量(liang)和(he)洗脫(tuo)體(ti)積有(you)關，初始量(liang)越(yue)少、洗脫(tuo)體(ti)積越(yue)小，回收率(lv)越低(di)。

操作(zuo)步(bu)驟(zhou)：

第壹(yi)次使(shi)用(yong)前(qian)，請(qing)先在 Buffer WB 中加(jia)入無水(shui)乙醇，並(bing)打(da)對(dui)勾(gou)標(biao)記(ji)，加(jia)入體(ti)積請(qing)參(can)照(zhao)瓶(ping)上的(de)標簽。

壹、從(cong)瓊(qiong)脂糖凝膠(jiao)中回(hui)收DNA 片段(duan)

1.   柱平(ping)衡：向(xiang)吸(xi)附(fu)柱中（吸(xi)附(fu)柱放(fang)入收集管中）加(jia)入 100 ul Buffer BL，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾(lv)液，將吸(xi)附(fu)柱重新(xin)放(fang)回(hui)收集管中。（請(qing)使(shi)用(yong)當(dang)天處理過(guo)的(de)柱子(zi)）

2.    切膠(jiao)：在長(chang)波紫(zi)外(wai)燈下(xia)，用(yong)幹(gan)凈(jing)刀(dao)片將(jiang)目的(de) DNA 條帶(dai)切下(xia)，盡(jin)量(liang)切除不(bu)含(han) DNA 的(de)凝膠(jiao)。

3.    稱重：將(jiang)切下(xia)的(de)含(han)有(you)目的(de) DNA 條帶(dai)的(de)凝膠(jiao)，放入 1.5 ml 離心管中，稱(cheng)取凝膠(jiao)重量(liang)（去(qu)除空(kong)管重量(liang)）。如果(guo)凝膠(jiao)重量(liang)為(wei) 100mg，其體(ti)積可(ke)視為 100ul。

4.   溶膠(jiao)：加(jia)入 3 倍(bei)體(ti)積 Buffer DB，56℃水浴(yu)，直(zhi)到凝膠(jiao)完(wan)quan溶解(jie)，期間顛倒混(hun)勻(yun) 2 次加(jia)速溶(rong)膠(jiao)。

（如果(guo)凝膠(jiao)濃度大(da)於 2%，應加(jia)入 6 倍(bei)體(ti)積 Buffer DB。對於(yu)回(hui)收<100 bp 的(de)小片段，可(ke)在凝膠(jiao)完(wan)quan溶解(jie)後(hou)，再加(jia)入 1.5 倍(bei)膠(jiao)塊(kuai)體(ti)積的(de)異丙(bing)醇以(yi)提高(gao)回(hui)收率(lv)。）

5.  吸(xi)附(fu)：待(dai)溶(rong)液冷(leng)卻(que)至(zhi)室(shi)溫(wen)後(hou)加(jia)入吸(xi)附(fu)柱中，室(shi)溫(wen)靜置 1 min，然(ran)後(hou) 12,000 rpm 離心 1 min，棄濾(lv)液。

（如果(guo)總體(ti)積超過(guo) 750 ul，可(ke)分(fen) 2 次將溶(rong)液加(jia)入同(tong)壹離(li)心吸(xi)附(fu)柱中）

6.   漂洗：加(jia)入 600 ul 漂洗液Buffer WB，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾(lv)液。

7.   二(er)次漂洗：重復操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou) 6。

8.    幹燥(zao)：將(jiang)吸(xi)附(fu)柱放(fang)回收集管中， 12,000 rpm 離心 2 min，甩幹膜(mo)上殘(can)留(liu)的(de)乙醇，防(fang)止其抑制下(xia)遊反(fan)應。

9.   回收：將(jiang)離(li)心吸(xi)附(fu)柱置(zhi)於壹(yi)個(ge)新的(de) 1.5 ml 離心管中，在(zai)吸(xi)附(fu)柱中央(yang)加(jia)入 30 ~ 50 ul 洗脫(tuo)液 Buffer EB，室(shi)溫(wen)放置 2 min，12,000 rpm 離心 1 min 收集 DNA 片(pian)段(duan)。

（註(zhu)意(yi)：為(wei)增(zeng)加(jia)回收效率(lv)，可(ke)將洗脫(tuo)液在(zai) 65℃預熱，也可(ke)將得(de)到(dao)的(de)溶液重新(xin)加(jia)入到(dao)離心管中，室(shi)溫(wen)放置 2 min，再次離心收集。）

二(er)、 從 PCR 反應(ying)液或(huo)酶切反應液中回(hui)收 DNA 片段(duan)

1. 柱平(ping)衡：向(xiang)吸(xi)附(fu)柱中（吸(xi)附(fu)柱放(fang)入收集管中）加(jia)入 100 ul 平衡(heng)液Buffer BL，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾(lv)液，將(jiang)吸(xi)附(fu)柱重新(xin)放(fang)回(hui)收集管中。（請(qing)使(shi)用(yong)當(dang)天處理過(guo)的(de)柱子(zi)）

2.   加(jia)結合液：估(gu)計PCR 反應(ying)液或(huo)酶切反應液的(de)體(ti)積，向(xiang)其中加(jia)入 5 倍(bei)體(ti)積溶(rong)液 Buffer DB，充分(fen)混(hun)勻(yun)。

（如果(guo)樣(yang)本體(ti)積小於 100ul,用(yong)滅(mie)菌(jun)水補齊 100ul,以提高(gao)回(hui)收效率(lv)。）

3.   吸(xi)附(fu)：將(jiang)上壹(yi)步(bu)所得(de)溶(rong)液加(jia)入壹(yi)套(tao)吸(xi)附(fu)柱中，室(shi)溫(wen)放置 1 min，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾(lv)液。

（ 註(zhu)意(yi)：吸(xi)附(fu)柱容(rong)積為(wei) 750ul，若樣(yang)品體(ti)積大(da)於(yu) 750ul 可(ke)分(fen)批(pi)加(jia)入）

4.漂洗：加(jia)入 600ul Buffer WB，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾(lv)液。

5.   二(er)次漂洗：重復操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou) 4。

6. 幹燥(zao)：將(jiang)吸(xi)附(fu)柱放(fang)回收集管中， 12,000 rpm 離心 2 min，甩幹膜(mo)上殘(can)留(liu)的(de)乙醇，防(fang)止其抑制下(xia)遊反(fan)應。

7.   洗脫(tuo)：將離(li)心吸(xi)附(fu)柱置(zhi)於壹(yi)個(ge)新的(de) 1.5 ml 離心管中，在(zai)吸(xi)附(fu)柱中央(yang)加(jia)入 30 ~ 50 ul 洗脫(tuo)液Buffer EB，室(shi)溫(wen)放置 2 min。12,000 rpm 離心 1 min 收集 DNA 片(pian)段(duan)。

（註(zhu)意(yi)：為(wei)增(zeng)加(jia)回收效率(lv)，可(ke)將洗脫(tuo)液在(zai) 60℃預熱，也可(ke)將得(de)到(dao)的(de)溶液重新(xin)加(jia)入到(dao)離心管中，室(shi)溫(wen)放置 2 min，再次離心收集。）

 通用(yong)型DNA純(chun)化(hua)回(hui)收試(shi)劑(ji)盒 核(he)酸(suan)提取(qu)