諾博萊(lai)德 通用型彩(cai)色(se)DNA純(chun)化(hua)回收試劑盒(he) 核(he)酸(suan)提取

Universal Color DNA Purification Kit通(tong)用型彩(cai)色(se) DNA 純(chun)化(hua)回收試劑盒(he)

目(mu)錄號:43018

產品內容(rong)：

自(zi)備試劑：

無(wu)水(shui)乙(yi)醇(chun)

保(bao)存條(tiao)件：

室(shi)溫（15 ~ 25℃）

具體(ti)產品的參數(shu)以收到(dao)產品說(shuo)明(ming)書的參(can)數(shu)為準(zhun)

產品簡(jian)介(jie)：

本(ben)試劑盒(he)既能(neng)從(cong)TAE 或(huo)TBE 瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)凝膠(jiao)中(zhong)回收 DNA 片(pian)段，又能用(yong)於直接純(chun)化(hua) PCR 產物，滿足多(duo)種(zhong)實驗需(xu)要。Buffer GS 溶液中(zhong)含有(you) pH 指示劑，可根(gen)據(ju)顏色來(lai)判斷溶膠(jiao)或(huo) PCR 產物回收是(shi)否達(da)到(dao)優(you)良狀態(tai)。使(shi)用(yong)本(ben)產品可回收 100bp~8kb 大(da)小的DNA 片(pian)段，回收率(lv)可達(da) 80%，該試劑盒(he)操作(zuo)簡(jian)便，得到(dao)的(de) DNA 片(pian)段可用(yong)於酶切、連接(jie)、測(ce)序等(deng)實驗。

產品特點：

1.         快(kuai)速(su)：步驟(zhou)少，操作(zuo)簡(jian)便，整(zheng)個(ge)操(cao)作(zuo)僅(jin)需(xu) 15 分(fen)鐘(zhong)。

2.          高(gao)效(xiao)：每個(ge)離(li)心吸(xi)附(fu)柱(zhu)可吸附(fu) 10 ug 以上(shang)的(de) DNA 片(pian)段，回收效(xiao)率在 85%以上(shang)。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：

1.   Buffer BL 的(de)加入能(neng)夠改(gai)善吸(xi)附(fu)柱的(de)吸附能力並提高吸附(fu)柱(zhu)的(de)均壹(yi)性和(he)穩(wen)定(ding)性，消(xiao)除(chu)高(gao)溫(wen)潮(chao)濕或(huo)其他不良(liang)環境因(yin)素對(dui)吸(xi)附(fu)柱(zhu)造(zao)成的(de)影(ying)響。

2.  使(shi)用(yong)前(qian)請先(xian)檢(jian)查(zha)Buffer BL、Buffer GS 是(shi)否出現渾濁，如(ru)有(you)混濁(zhuo)現象(xiang)，可在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)加熱(re)幾分鐘(zhong)，即(ji)可恢復(fu)澄(cheng)清(qing)。
       3.  溶液Buffer GS 含有(you) pH 指示劑，為(wei)黃(huang)色，指示 pH≤7.5。

4.  切膠(jiao)時，紫(zi)外照射(she)時間(jian)應(ying)盡(jin)量(liang)短(duan)，以免(mian)對(dui) DNA 造(zao)成損(sun)傷(shang)。

5.    回收率(lv)與(yu)初(chu)始(shi) DNA 量(liang)和洗脫(tuo)體(ti)積(ji)有(you)關，初始(shi)量(liang)越少、洗脫(tuo)體(ti)積(ji)越小(xiao)，回收率(lv)越低。

操(cao)作(zuo)步驟(zhou)：

第(di)壹次(ci)使(shi)用(yong)前(qian)，請先(xian)在 Buffer WB2 中(zhong)加入無(wu)水(shui)乙(yi)醇(chun)，並打(da)對勾標記，加入體(ti)積(ji)請參(can)照(zhao)瓶上(shang)的(de)標(biao)簽(qian)。

壹(yi)、從瓊脂(zhi)糖(tang)凝膠(jiao)中(zhong)回收DNA 片(pian)段

1.   柱(zhu)平衡：向(xiang)吸附(fu)柱(zhu)中(zhong)（吸附(fu)柱放(fang)入收集管中(zhong)）加入 400 ul Buffer BL，12,000 rpm 離(li)心 1 min，棄(qi)濾(lv)液，將(jiang)吸附柱重(zhong)新放(fang)回收集管中(zhong)。（請使(shi)用(yong)當天(tian)處(chu)理過的(de)柱(zhu)子）

2.   切膠(jiao)：在長波(bo)紫(zi)外燈下(xia)，用幹(gan)凈刀(dao)片(pian)將目(mu)的 DNA 條(tiao)帶(dai)切下(xia)，盡量(liang)切除不含 DNA 的(de)凝膠(jiao)。

3.   稱(cheng)重(zhong)：將切下(xia)的含有(you)目(mu)的 DNA 條(tiao)帶(dai)的(de)凝膠(jiao)，放(fang)入(ru) 1.5 ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，稱取(qu)凝膠(jiao)重(zhong)量(liang)（去除空(kong)管重(zhong)量(liang)）。如(ru)果(guo)凝膠(jiao)重(zhong)量(liang)為 100mg，其體(ti)積(ji)可視為(wei) 100ul。

4.    溶膠(jiao)：加入等(deng)體(ti)積(ji) Buffer GS，60℃水(shui)浴(yu)，每(mei)隔 2 ~ 3 min 上(shang)下(xia)振(zhen)蕩(dang)，直(zhi)到(dao)凝膠(jiao)完quan溶解(jie)。

（如(ru)果(guo)凝膠(jiao)濃(nong)度(du)大(da)於(yu) 2%，應(ying)加入 2 倍(bei)體(ti)積(ji) Buffer GS。對(dui)於回收<300 bp 的(de)小片(pian)段，可在凝膠(jiao)完quan溶解(jie)後(hou)，再(zai)加入 0.5 倍(bei)膠(jiao)塊(kuai)體(ti)積(ji)的(de)異丙醇(chun)以提高回收率(lv)。）

5.   吸(xi)附：待(dai)溶液冷(leng)卻至(zhi)室(shi)溫(wen)後(hou)加入吸(xi)附(fu)柱中(zhong)，室溫(wen)靜(jing)置 2 min，然(ran)後(hou) 12,000 rpm 離(li)心 1 min，棄(qi)濾液。

（如(ru)果(guo)總(zong)體(ti)積(ji)超(chao)過 750 ul，可分 2 次(ci)將(jiang)溶液加入同(tong)壹(yi)離(li)心吸(xi)附(fu)柱(zhu)中(zhong)）

6.   漂(piao)洗：加入 500 ul 漂(piao)洗液Buffer WB2，12,000 rpm 離(li)心 1 min，棄(qi)濾液。

7.    二(er)次(ci)漂(piao)洗(xi)：重(zhong)復操(cao)作(zuo)步驟(zhou) 6。

8.   幹(gan)燥(zao)：將(jiang)吸附(fu)柱放(fang)回收集管中(zhong)， 12,000 rpm 離(li)心 2 min，甩幹膜上(shang)殘留(liu)的(de)乙醇(chun)，防止(zhi)其抑(yi)制下(xia)遊反(fan)應(ying)。

9.   回收：將(jiang)離(li)心吸(xi)附(fu)柱(zhu)置於(yu)壹個(ge)新(xin)的(de) 1.5 ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，在吸附(fu)柱(zhu)中(zhong)央(yang)加入 30 ~ 50 ul 洗(xi)脫液 Buffer EB，室(shi)溫放置 2 min，12,000 rpm 離(li)心 1 min 收(shou)集 DNA 片(pian)段。

（註(zhu)意(yi)：為(wei)增(zeng)加回收效(xiao)率，可將洗(xi)脫(tuo)液在 65℃預熱(re)，也可將得到(dao)的(de)溶液重(zhong)新加入到(dao)離(li)心管(guan)中(zhong)，室(shi)溫放置 2 min，再(zai)次(ci)離(li)心收(shou)集。）

二(er)、 從 PCR 反(fan)應(ying)液或(huo)酶切反(fan)應(ying)液中(zhong)回收 DNA 片(pian)段

1.  柱(zhu)平衡：向(xiang)吸附(fu)柱(zhu)中(zhong)（吸附(fu)柱放(fang)入收集管中(zhong)）加入 400 ul 平(ping)衡液Buffer BL，12,000 rpm 離(li)心 1 min，棄(qi)濾液，將吸(xi)附柱(zhu)重(zhong)新放(fang)回收集管中(zhong)。（請使(shi)用(yong)當天(tian)處(chu)理過的(de)柱(zhu)子）

2. 加結合液：估(gu)計(ji)PCR 反(fan)應(ying)液或(huo)酶切反(fan)應(ying)液的體(ti)積(ji)，向(xiang)其中(zhong)加入等(deng)體(ti)積(ji)溶液Buffer GS，充(chong)分混勻。

（註(zhu)意(yi)：對(dui)於回收小(xiao)於(yu) 150bp 的(de)小片(pian)段可將溶液 Buffer GS 的(de)體(ti)積(ji)增(zeng)加到(dao) 3 倍(bei)以提高回收率(lv)）

3.   吸(xi)附：將上(shang)壹(yi)步(bu)所(suo)得溶液加入壹(yi)套(tao)吸附(fu)柱(zhu)中(zhong)，室溫(wen)放置 2 min，12,000 rpm 離(li)心 1 min，棄(qi)濾液。

（ 註(zhu)意(yi)：吸(xi)附柱(zhu)容(rong)積(ji)為(wei) 750ul，若樣品體(ti)積(ji)大(da)於 750ul，可分批加入）

4.    漂(piao)洗：加入 500ul Buffer WB2，12,000 rpm 離(li)心 1 min，棄(qi)濾液。

5.   二(er)次(ci)漂(piao)洗(xi)：重(zhong)復操(cao)作(zuo)步驟(zhou) 4。

6.   幹(gan)燥(zao)：將(jiang)吸附(fu)柱放(fang)回收集管中(zhong)， 12,000 rpm 離(li)心 2 min，甩幹膜上(shang)殘留(liu)的(de)乙醇(chun)，防止(zhi)其抑(yi)制下(xia)遊反(fan)應(ying)。

7.   洗(xi)脫：將離(li)心吸(xi)附(fu)柱(zhu)置於(yu)壹個(ge)新(xin)的(de) 1.5 ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，在吸附(fu)柱(zhu)中(zhong)央(yang)加入 30 ~ 50 ul 洗(xi)脫液Buffer EB，室(shi)溫放置 2 min。12,000 rpm 離(li)心 1 min，收(shou)集 DNA 片(pian)段。（註(zhu)意(yi)：為(wei)增(zeng)加回收效(xiao)率，可將洗(xi)脫(tuo)液在 60℃預熱(re)，也可將得到(dao)的(de)溶液重(zhong)新加入到(dao)離(li)心管(guan)中(zhong)，室(shi)溫放置 2 min，再(zai)次(ci)離(li)心收(shou)集。）

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