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Products分(fen)子生(sheng)物學(xue)試(shi)劑(ji)
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| 品(pin)牌(pai) | NobleRyder/諾(nuo)博(bo)萊(lai)德(de) | 貨號(hao) | 71517 |
|---|---|---|---|
| 規格(ge) | 5x 1ml/100x 1ml | 供(gong)貨周期 | 現(xian)貨 |
| 主要用(yong)途(tu) | 用於基(ji)因(yin)克隆(long)、表(biao)達(da)及(ji)突變(bian)分(fen)析等(deng)分(fen)子生(sheng)物學(xue)實(shi)驗 | 應(ying)用領(ling)域 | 環(huan)保(bao),化工,生(sheng)物產業,農(nong)林(lin)牧漁,制藥/生(sheng)物制藥 |
諾(nuo)博(bo)萊(lai)德(de) 2× KOD PCR Master Mix(含染(ran)料)
2× KOD PCR Master Mix (含染(ran)料)
目(mu)錄(lu)號(hao):71517
產品(pin)內容
產品(pin)成份 | 71517-05 | 71517-0100 |
2× KOD PCR Master Mix | 5× 1 ml | 100× 1 ml |
保(bao)存條件(jian)
-20℃保(bao)存,有效(xiao)期(qi) 2 年(nian)。經常(chang)使用,可置於 4 °C 保(bao)存,有效(xiao)期(qi) 3 個月。
具(ju)體產品(pin)的參數(shu)以(yi)收到產(chan)品說(shuo)明(ming)書的(de)參(can)數(shu)為(wei)準(zhun)
產品(pin)簡(jian)介
本產(chan)品包含(han)KOD DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反(fan)應(ying)緩沖(chong)液,濃度為2×。該(gai)酶(mei)所具(ju)有(you)的超qiang3’→ 5’外切(qie)酶活性使得其(qi)保(bao)真(zhen)性比Pfu DNA Polymerase 更高,保(bao)真(zhen)性是Taq DNA Polymerase的80倍,同時具(ju)有(you)合成速度快(kuai)的(de)特(te)點(dian),聚合速度約(yue)為普(pu)通Pfu DNA Polymerase的(de)5倍,Taq DNAPolymerase的2倍(bei),達(da)到(dao)100-138bp/秒(miao),可以在(zai)短(duan)時間內獲得高產量的擴(kuo)增(zeng)產物,特別(bie)適(shi)合於高保(bao)真(zhen)地擴(kuo)增(zeng)6kb以內的(de)PCR 產(chan)物,擴增(zeng)所得的DNA為平(ping)末(mo)端(duan),可用於基(ji)因(yin)克隆(long)、表(biao)達(da)及(ji)突變(bian)分(fen)析等(deng)分(fen)子生(sheng)物學(xue)實(shi)驗。
KOD擴增(zeng)的PCR產物為平末(mo)端(duan)(Blunt),可直(zhi)接用於Blunt載(zai)體克隆(long)(Cat#V116、V117)
本產(chan)品含紅(hong)色示(shi)蹤染(ran)料,不(bu)需(xu)添加上(shang)樣緩沖(chong)液即(ji)可直(zhi)接上樣進(jin)行電(dian)泳(yong);也(ye)可經過純(chun)化處理(li),以用(yong)於酶(mei)切(qie)、連接、測(ce)序等(deng)後續(xu)操(cao)作(zuo)。
產品(pin)特點(dian)
1. 高產:產量是普通 Taq 酶的(de) 2 倍(bei)!
2. 高效:延(yan)伸(shen)速度 100-138bp/sec!
3. 高成功率:對(dui)於高 GC 模板(ban)和(he)特(te)殊(shu)結構的(de)復(fu)雜(za)模(mo)板(ban)有(you)良(liang)好(hao)效果!
2 × KOD PCR Master Mix 使用說(shuo)明(ming):
壹、配制 PCR 反應(ying)體系(xi):(於冰(bing)上(shang)配制(zhi))
Component | 20 μl Reaction | 50 μl Reaction | 終濃度 |
2× KOD PCR Master Mix | 10 μl | 25 μl | 1 × |
Forward Primer(10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer(10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | <0.2 μg | <0.5 μg | as required |
ddH2O | up to 20 μl | up to 50 μl |
參考(kao)模板(ban)用(yong)量(liang):(以 50 μl 反(fan)應(ying)體系(xi)為(wei)例)
質(zhi)粒(li):0.1-10 ng;
細菌基(ji)因(yin)組:10-100 ng;
人(ren)類基(ji)因(yin)組:50-150 ng;
cDNA:1-5 μl from RT。
註意(yi):用 ddH2O 補(bu)足反(fan)應(ying)體系(xi)(體積(ji))至(zhi) 50 μl。實(shi)際(ji)操(cao)作(zuo)中,首(shou)先(xian)要計(ji)算(suan)好需(xu)要補(bu)加 ddH2O 的(de)量以(yi)後,建議(yi)先(xian)加水(shui),然(ran)後按(an)上(shang)述順序添加其(qi)它成(cheng)分(fen),最後添加 KOD DNA Polymerase。充分(fen)混勻(yun)後,離(li)心(xin)數(shu)秒(miao)使反應(ying)混合物沈(chen)到(dao)管底(di),然(ran)後將反應(ying)管置(zhi)於 PCR 儀(yi)中進(jin)行擴(kuo)增(zeng)。
二(er)、設(she)置 PCR 循環條件(jian):(請(qing)根據實(shi)際(ji)情(qing)況(kuang)適(shi)當調(tiao)整)
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initialdenaturation | 94℃ | 3 minutes | |
Denaturation | 94℃ | 20-30 seconds | 30-35 cycles |
Annealing | 50-60℃ | 20-30 seconds | |
Extension | 72℃ | 1-4kb / minute | |
Final Extension | 72℃ | 5 minutes | |
4-8℃ | Hold |
註意(yi):壹般(ban)情(qing)況(kuang)下,Annealing Temperature = Tm - 5°C
如(ru)果擴增(zeng)片段(duan)小於 4 kb,建議(yi) KOD 酶的延(yan)伸(shen)速度為 1kb / 15 sec;
如(ru)果擴增(zeng)片段(duan)大(da)於 4 kb,建議(yi)延(yan)伸(shen)速度為 1kb / 20-30 sec。
三(san)、結(jie)果檢測(ce):反應(ying)結束(shu)後取 5 µl 反(fan)應(ying)產物,瓊脂糖凝膠(jiao)電(dian)泳(yong)檢測(ce)。
2× KOD PCR Master Mix(含染(ran)料)