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| 品牌(pai) | NobleRyder/諾(nuo)博萊德 | 貨號 | 71812 |
|---|---|---|---|
| 規(gui)格 | 5x 1ml/100x 1ml | 供貨(huo)周(zhou)期(qi) | 現(xian)貨(huo) |
| 主(zhu)要用(yong)途 | 用(yong)於(yu)酶(mei)切、連接、熒(ying)光(guang)測(ce)序等(deng)後續(xu)操作(zuo) | 應(ying)用(yong)領(ling)域(yu) | 環保(bao),化工,生物產業(ye),農(nong)林牧漁(yu),制藥(yao)/生(sheng)物制藥(yao) |
諾博(bo)萊德 Fast HiFi PCR Master Mix(含染(ran)料(liao))
2× FastHiFi PCR Master Mix (含染(ran)料(liao))
目(mu)錄(lu)號:71812
產品(pin)內容
產品(pin)成份 | 71812-05 | 71812-0100 |
2× FastHiFi PCR Master Mix | 5× 1 ml | 100× 1 ml |
保存(cun)條(tiao)件(jian)
-20℃保存(cun),有(you)效(xiao)期(qi) 2 年。
經常使用(yong),可(ke)置(zhi)於(yu) 4 °C 保存(cun),有(you)效(xiao)期(qi) 3 個月。
具體(ti)產品(pin)的參數以(yi)收到產(chan)品說明(ming)書(shu)的參數為(wei)準
產品(pin)簡介
2× FastHiFi PCR Mix為多(duo)種(zhong)采(cai)用(yong)最(zui)xian進(jin)基(ji)因工程(cheng)改(gai)造而來(lai)的超(chao)保(bao)真酶(mei)添加(jia)延伸(shen)因子混合(he)而成,極大(da)的提高了擴(kuo)增長(chang)度(du)、擴(kuo)增速(su)度(du)、保(bao)真(zhen)性和(he)產(chan)量(liang)。2× FastHiFi PCR Mix是(shi)長片段(duan)、超(chao)保(bao)真、快速擴(kuo)增的shou選產(chan)品。
PCR產物(wu)為平末端(duan),不(bu)需要加(jia)A頭,可(ke)直接用(yong)平末端(duan)系(xi)列(lie)載(zai)體(ti)(Cat#V116、V117)克隆。
本(ben)產(chan)品(pin)包(bao)含FastHiFi DNA Polymerase、dNTPs和優化的反(fan)應緩(huan)沖(chong)液,濃度(du)為(wei)2×。使(shi)用時(shi),只(zhi)需加入(ru)模(mo)板、引物,並(bing)補(bu)足水(shui)至Mix終(zhong)濃(nong)度(du)為(wei)1×即(ji)可。
本(ben)制品含紅色示蹤染(ran)料(liao),不(bu)需添加(jia)上(shang)樣(yang)緩(huan)沖液即可直接上(shang)樣(yang)進(jin)行(xing)電泳(yong);也可(ke)經過純化處理(li),以(yi)用(yong)於(yu)酶(mei)切、連接、熒(ying)光(guang)測(ce)序等(deng)後續(xu)操作(zuo)。
產品(pin)特(te)點
1. 高產(chan):壹(yi)般 PCR 產物(wu)量(liang)比傳統(tong)產量(liang)高(gao) 50%-100%!
2. 高效(xiao):延伸(shen)速度(du)可(ke)以(yi)達(da)到 3-4kb/min,是 pfu 的 6-8 倍!
3. 高成(cheng)功率:對於(yu)高 GC 模(mo)板和(he)特(te)殊結構(gou)的復(fu)雜模(mo)板有(you)良好效(xiao)果(guo)!
4. 超(chao)高(gao)保真:保真(zhen)度(du)是(shi) taq 的 81 倍!
5. 擴(kuo)增長(chang)度(du)長(chang):以(yi)復(fu)雜基(ji)因組 DNA 為模(mo)板擴(kuo)增可(ke)達(da) 3kb,以簡單基(ji)因組、質粒(li)和噬(shi)菌體(ti) DNA 為模(mo)板擴(kuo)增可(ke)達(da) 6kb。
2 × FastHiFi PCR Master Mix 使用(yong)說明(ming):
壹(yi)、配制 PCR 反(fan)應體(ti)系:(於(yu)冰上(shang)配制)
Component | 20 μl Reaction | 50 μl Reaction | 終(zhong)濃(nong)度(du) |
2× FastHiFi PCR Mix | 10 μl | 25 μl | 1 × |
Forward Primer (10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.4 μl | 1 μl | 0.2 μM |
Template DNA | as required | as required | |
ddH2O | up to 20 μ | up to 50 μl |
參考模(mo)板用(yong)量(liang):(以 50 μl 反(fan)應體(ti)系為(wei)例)
質粒(li):0.1-10 ng;
細菌(jun)基(ji)因組:10-100 ng;
人類基(ji)因組:50-150 ng;
cDNA:1-5 μl from RT。
註意(yi):實際(ji)操作(zuo)中,首先要計(ji)算好(hao)需要補(bu)加 ddH2O 的量(liang)以(yi)後,建議先加水(shui),然後按(an)上(shang)述順(shun)序添(tian)加其(qi)它(ta)成分,最(zui)後加(jia) FastHiFi PCR Mix,瞬(shun)離,上(shang)機(ji)。
二(er)、設置(zhi) PCR 循環條(tiao)件(jian):(請根(gen)據實(shi)際(ji)情況(kuang)適(shi)當調整)
Step | Temperature | Time | Cycle Number |
Initial denaturation | 94℃ | 3 minutes | |
Denaturation | 94℃ | 10 seconds | 30-35 cycles |
Annealing | 50-60℃ | 10-15 seconds | |
Extension | 72℃ | 15-20 seconds /kb | |
Final Extension | 72℃ | 5 minutes | |
4-8℃ | Hold |
註意(yi):壹(yi)般情況(kuang)下(xia),Annealing Temperature = Tm - 5°C
1. 質粒(li)和簡單基(ji)因組等(deng)簡單模(mo)板,可(ke)以(yi)采(cai)用(yong) 10-15 sec/kb;復(fu)雜模(mo)板 ( 如(ru)人類 基(ji)因組 DNA ),可以(yi)采(cai)用(yong) 20-25 sec/kb。
2. 對於(yu)高 GC 含量(liang)的模(mo)板,預(yu)變(bian)性和(he)變(bian)性溫度(du)可(ke)以(yi)提高到(dao) 98℃。
3. 如(ru)果(guo)電(dian)泳(yong)發現(xian)主(zhu)帶上(shang)下(xia)拖尾模(mo)糊(hu)現(xian)象,或者(zhe)泳(yong)道出現(xian)從(cong)上(shang)樣(yang)孔拖(tuo)下(xia)來(lai)的塗抹(mo)帶現(xian)象,壹(yi)般提示延伸(shen)時間(jian)過長,梯度(du)縮(suo)短延伸(shen)時間(jian)(建議 10-15sec/kb 為梯度(du)減(jian)少(shao)延伸(shen)時間(jian))直到獲(huo)得滿意(yi)結果(guo)。
三、結(jie)果(guo)檢(jian)測(ce):反(fan)應結(jie)束後取(qu) 5 µl 反(fan)應產(chan)物(wu),瓊(qiong)脂糖凝膠(jiao)電(dian)泳(yong)檢(jian)測(ce)。
Fast HiFi PCR Master Mix(含染(ran)料(liao))