高(gao)效(xiao)感受態(tai)細(xi)胞(bao)制(zhi)備試(shi)劑盒是(shi)在(zai)傳(chuan)統(tong)高(gao)效(xiao)感受態(tai)細(xi)胞(bao)制(zhi)備方(fang)法(fa)的基礎(chu)上(shang)進(jin)行適當(dang)改(gai)良(liang)而(er)成(cheng)，操(cao)作便捷，轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)高(gao)。
使(shi)用(yong)本(ben)試(shi)劑盒可以使(shi)感受態(tai)效(xiao)率(lv)達(da)到108 cfu/μg質粒。對(dui)於(yu)小的(de)質粒效(xiao)率(lv)略(lve)高(gao)，而(er)對(dui)於(yu)大的質粒則(ze)效(xiao)率(lv)略(lve)低壹(yi)些(xie)。用(yong)本(ben)試(shi)劑盒制備(bei)的(de)高(gao)效(xiao)感受態(tai)細(xi)胞(bao)不(bu)僅可以轉(zhuan)化質粒，而(er)且非(fei)常(chang)適合於(yu)轉(zhuan)化普通的(de)連(lian)接產(chan)物，特別(bie)適合於(yu)轉(zhuan)化平(ping)端(duan)連接等(deng)需(xu)要高(gao)轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)的(de)情(qing)況。

高(gao)效(xiao)感受態(tai)細(xi)胞(bao)制(zhi)備試(shi)劑盒

目(mu)錄號：30018

試(shi)劑盒組(zu)成(cheng)、儲存(cun)、穩定(ding)性：

短(duan)期使(shi)用(yong)4℃，避免汙(wu)染(ran)。長期保存－20℃壹(yi)年有效。

具(ju)體產(chan)品的參數以收到產(chan)品說明書(shu)的參數為(wei)準(zhun)

產(chan)品介(jie)紹：

1.   高(gao)效(xiao)感受態(tai)細(xi)胞(bao)制(zhi)備試(shi)劑盒是(shi)在(zai)傳(chuan)統(tong)高(gao)效(xiao)感受態(tai)細(xi)胞(bao)制(zhi)備方(fang)法(fa)的基礎(chu)上(shang)進(jin)行適當(dang)改(gai)良(liang)而(er)成(cheng)，操(cao)作便捷，轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)高(gao)。

2.   使(shi)用(yong)本(ben)試(shi)劑盒可以使(shi)感受態(tai)效(xiao)率(lv)達(da)到10⁸ cfu/μg質粒。對(dui)於(yu)小的(de)質粒效(xiao)率(lv)略(lve)高(gao)，而(er)對(dui)於(yu)大的質粒則(ze)效(xiao)率(lv)略(lve)低壹(yi)些(xie)。用(yong)本(ben)試(shi)劑盒制備(bei)的(de)高(gao)效(xiao)感受態(tai)細(xi)胞(bao)不(bu)僅可以轉(zhuan)化質粒，而(er)且非(fei)常(chang)適合於(yu)轉(zhuan)化普通的(de)連(lian)接產(chan)物，特別(bie)適合於(yu)轉(zhuan)化平(ping)端(duan)連接等(deng)需(xu)要高(gao)轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)的(de)情(qing)況。

3.   使(shi)用(yong)本(ben)試(shi)劑盒操作(zuo)簡(jian)單(dan)，細菌培(pei)養(yang)好後僅需(xu)60分鐘左右(you)即可完成高(gao)效(xiao)感受態(tai)細(xi)胞(bao)的(de)制備。

4.   本(ben)試(shi)劑盒適用(yong)於(yu)絕大部(bu)分常(chang)見(jian)的(de)大腸桿(gan)菌，包(bao)括(kuo)Top 10、DH5α、BL21（DE3）、JM109、TG1、HB101和(he)XL-1等(deng)。但是(shi)不同的菌種(zhong)，轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)可(ke)能(neng)有(you)很大差別(bie)。

5.   本(ben)試(shi)劑盒可以分多(duo)次(ci)使(shi)用(yong)，共可(ke)以制備100支(zhi)100μl的感受態(tai)細(xi)胞(bao)。

v  註(zhu)意事項(xiang)：

1.          所(suo)有試(shi)劑、耗(hao)材、儀(yi)器、設(she)備務(wu)必(bi)經(jing)過滅(mie)菌處(chu)理(li)。

2.          在(zai)制備(bei)感受態(tai)細(xi)胞(bao)的(de)過程(cheng)中(zhong)均(jun)使(shi)用(yong)不(bu)含(han)抗生素的LB。在(zai)使(shi)用(yong)感受態(tai)菌(jun)的(de)過程(cheng)中(zhong)熱(re)休克(ke)後(hou)的37℃培(pei)養(yang)時(shi)也必(bi)須使(shi)用(yong)無(wu)抗(kang)生素的LB，即便轉(zhuan)入的質粒是(shi)有抗(kang)性(xing)的(de)。

3.          感受態(tai)細(xi)胞(bao)制(zhi)備完畢(bi)請(qing)快(kuai)速(su)轉(zhuan)入-70℃。

操(cao)作步(bu)驟：(實(shi)驗(yan)前請(qing)先(xian)閱讀(du)註意事項(xiang))

1.   塗(tu)平板(ban)： 

為(wei)取得最(zui)佳(jia)的感受態(tai)效(xiao)率(lv)，必(bi)須先(xian)把(ba)甘油菌(jun)或其(qi)它形式(shi)保存的(de)菌(jun)種塗LB平(ping)板(ban)，並(bing)培(pei)養(yang)過夜。 

2.   接種：

取壹有(you)新(xin)鮮(xian)培(pei)養(yang)的(de)菌種的LB平(ping)板(ban)，後(hou)續(xu)操(cao)作(zuo)均在(zai)超凈(jing)臺內進(jin)行。把(ba)鑷子(zi)的(de)頂(ding)端(duan)在(zai)70%酒精(jing)中(zhong)蘸(zhan)壹下，並(bing)在(zai)酒精(jing)燈上(shang)略(lve)略(lve)燒壹(yi)下，使(shi)鑷(nie)子(zi)的(de)頂(ding)端(duan)處(chu)於(yu)無菌(jun)狀態(tai)。用(yong)鑷(nie)子(zi)夾(jia)取壹個(ge)無(wu)菌的塑(su)料槍(qiang)頭(tou)或(huo)牙簽，從(cong)平板(ban)上(shang)挑(tiao)取壹個(ge)單(dan)克隆，然後把(ba)蘸有(you)菌(jun)種(zhong)的塑料(liao)槍頭(tou)或(huo)牙簽放(fang)到裝(zhuang)有3毫(hao)升SOB或(huo)者LB（客戶應該(gai)根據菌種(zhong)不同選擇適合的(de)培(pei)養(yang)基(ji)）的細菌培(pei)養(yang)試(shi)管內。上(shang)述(shu)操作也可(ke)以使(shi)用(yong)接種環等(deng)進(jin)行操作(zuo)。 

3.   培(pei)養(yang)：

37℃約250rpm培(pei)養(yang)過夜，通常(chang)培(pei)養(yang)時(shi)間控制在(zai)16小時(shi)左右(you)為宜。絕對(dui)不(bu)宜(yi)超(chao)過18小(xiao)時。 

4.   再(zai)接種培(pei)養(yang)：

根(gen)據需(xu)要制(zhi)備(bei)的(de)高(gao)效(xiao)感受態(tai)細(xi)胞(bao)的(de)量，按照(zhao)1:500的比例(li)用(yong)新鮮(xian)培(pei)養(yang)的(de)過夜菌接種培(pei)養(yang)。例(li)如取100微升的(de)新鮮(xian)過夜菌到50毫升SOB或(huo)者LB中(zhong)，37℃約250rpm培(pei)養(yang)。

5.   制(zhi)備感受態(tai)細(xi)胞(bao)： 

ð  註(zhu)意：離心機(ji)轉(zhuan)速(su)和離(li)心時(shi)間(jian)對(dui)於(yu)感受態(tai)細(xi)胞(bao)制(zhi)作非常(chang)重(zhong)要(yao)，不(bu)同種類的(de)細(xi)菌(jun)最(zui)佳(jia)的轉(zhuan)速(su)和離(li)心時(shi)間(jian)不同，應該(gai)根據具體情(qing)況優化。最(zui)佳(jia)狀況(kuang)是(shi)適當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)和離(li)心時(shi)間(jian)讓細菌剛(gang)好離心沈澱下來(lai)，又(you)不(bu)能(neng)太(tai)緊密，否則(ze)重(zhong)懸(xuan)困難(nan)，只能(neng)用力(li)吹(chui)打才(cai)能(neng)重(zhong)懸，會對(dui)細(xi)胞(bao)造(zao)成(cheng)損(sun)害(hai)，影(ying)響轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)。

1)  在(zai)培(pei)養(yang)的(de)細菌OD600達到0.5左右(you)時，把(ba)培(pei)養(yang)的(de)菌液(ye)置於(yu)冰浴(yu)中(zhong)，冷(leng)卻(que)15分鐘。註(zhu)意：後續(xu)所(suo)有(you)操作(zuo)均須(xu)在(zai)4度或(huo)冰浴(yu)進(jin)行。

2)   4℃（離(li)心機(ji)必(bi)須預先冷(leng)卻(que)）3000-3500g離心5分鐘收集細(xi)菌(jun)，棄(qi)上(shang)清(qing)（盡(jin)量去除(chu)幹凈(jing)上(shang)清(qing)，殘留(liu)越(yue)少(shao)越(yue)好）。

3)  如果(guo)離(li)心沈澱前的(de)菌(jun)量為50毫(hao)升，按(an)後續(xu)操(cao)作(zuo)進(jin)行，如果(guo)是(shi)其它(ta)體積則(ze)按(an)比(bi)例(li)換(huan)算(suan)後進(jin)行後續(xu)操(cao)作(zuo)。 

4)   用(yong)10毫升預冷(leng)的(de)高(gao)效(xiao)感受態(tai)制(zhi)備(bei)溶(rong)液(ye)A輕輕(qing)重懸(xuan)細菌沈澱（為方(fang)便重懸，可先加(jia)少(shao)量(liang)溶液(ye)A，重懸(xuan)後再(zai)加入剩(sheng)余(yu)的(de)溶(rong)液(ye)A），吹打(da)重懸(xuan)時壹定要(yao)很(hen)輕柔(rou)，否(fou)則(ze)會影(ying)響效果(guo)。

5)  冰(bing)浴(yu)15分鐘。 

6)   4℃（離(li)心機(ji)必(bi)須預先冷(leng)卻(que)） 3000-3500g離心5－7分鐘收集細(xi)菌(jun)，棄(qi)上(shang)清(qing)。

7)   用(yong)2毫升預冷(leng)的(de)高(gao)效(xiao)感受態(tai)制(zhi)備(bei)溶(rong)液(ye)B輕輕(qing)重懸(xuan)細菌沈澱。吹打重懸時時(shi)壹定(ding)要很輕(qing)柔，否(fou)則會影(ying)響效果(guo)。 

8)   冰(bing)浴(yu)15分鐘。 

9) 冰(bing)浴(yu)上(shang)進(jin)行分裝(zhuang)，可以根據需(xu)要適當(dang)分裝(zhuang)成50-200微(wei)升/管(guan)。 

10) 立(li)即使(shi)用(yong)或(huo)用(yong)液(ye)氮或乙(yi)醇幹冰浴(yu)速(su)凍(dong)後-70℃保存。