生(sheng)物(wu)體(ti)內超氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)等(deng)活性(xing)氧(yang)具有(you)免疫(yi)和信號傳導的作用，但積(ji)累過(guo)多(duo)時會(hui)對細胞(bao)膜(mo)及生(sheng)物(wu)大(da)分子(zi)產(chan)生(sheng)破(po)壞(huai)作用，導致(zhi)機(ji)體細(xi)胞(bao)和組織(zhi)代(dai)謝(xie)異(yi)常(chang)，從(cong)而(er)引起多(duo)種疾病(bing)。
超氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)試劑(ji)盒(he) 氧(yang)化(hua)

超(chao)氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)(Oxygen free radical, OFR)試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明書(shu)

分光(guang)光(guang)度(du)法 50 管(guan)/48 樣

超(chao)氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)試劑(ji)盒(he) 氧(yang)化(hua)

正(zheng)式(shi)測定(ding)前(qian)務必取 2-3 個(ge)預期差(cha)異(yi)較大(da)的(de)樣(yang)本做(zuo)預測定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義：

生(sheng)物(wu)體(ti)內超氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)等(deng)活性(xing)氧(yang)具有(you)免疫(yi)和信號傳導的作用，但積(ji)累過(guo)多(duo)時會(hui)對細胞(bao)膜(mo)及生(sheng)物(wu)大(da)分子(zi)產(chan)生(sheng)破(po)壞(huai)作用，導致(zhi)機(ji)體細(xi)胞(bao)和組織(zhi)代(dai)謝(xie)異(yi)常(chang)，從(cong)而(er)引起多(duo)種疾病(bing)。

測(ce)定(ding)原理(li)：

超(chao)氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)與鹽(yan)酸羥(qiang)胺(an)反(fan)應(ying)生成NO2 ^-，NO2^-在(zai)對氨ji苯(ben)磺酸(suan)和α－萘胺(an)的作用下(xia)，生(sheng)成(cheng)紅(hong)色(se)的偶(ou)氮化(hua)合(he)物(wu)，在(zai) 530nm 處有(you)特征(zheng)吸(xi)收峰(feng)，根據ΔA 值可以(yi)計算樣(yang)品(pin)中 O2 ^-含量，反(fan)應(ying)式為 NH2OH + 2O2 ^-＋H ⁺→ NO2 ^- ＋ H2O2 ＋ H2O。

試(shi)劑(ji)組(zu)成(cheng)和配(pei)制：

自(zi)備儀(yi)器和用品(pin)：

天(tian)平(ping)、水浴(yu)鍋(guo)、離(li)心(xin)機(ji)、可見(jian)分光(guang)光(guang)度(du)計、1 ml 玻璃比色(se)皿、氯仿(fang)和蒸餾(liu)水。

超(chao)氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)提取：

1、植(zhi)物(wu)、動(dong)物(wu)組(zu)織(zhi)：按(an)照(zhao)組織(zhi)質量（g）：提取液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比(bi)例（建(jian)議(yi)稱(cheng)取約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加入(ru) 1ml 提取液(ye)）進(jin)行(xing)冰(bing)浴(yu)勻漿(jiang)，然(ran)後(hou) 10000g，4℃，離(li)心(xin) 20min，取上(shang)清置(zhi)於冰(bing)上(shang)待測(ce)。。

2、細(xi)菌(jun)、真菌(jun)：按(an)照(zhao)細胞(bao)數量(liang)（104 個(ge)）：提取液(ye)體(ti)積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比(bi)例（建(jian)議(yi) 500 萬(wan)細胞(bao)加入(ru) 1ml 提取液(ye)），冰(bing)浴(yu)超(chao)聲(sheng)波(bo)破(po)碎(sui)細胞(bao)（功率(lv) 300w，超聲(sheng) 3 秒，間(jian)隔(ge) 7 秒，總(zong)時間(jian) 3min）；然(ran)後(hou) 10000g， 4℃，離(li)心(xin) 20min，取上(shang)清置(zhi)於冰(bing)上(shang)待測(ce)。

3、血(xue)清或培(pei)養(yang)液：直接(jie)測(ce)定(ding)。

測(ce)定(ding)步(bu)驟：

混(hun)勻，37℃水浴(yu) 20min：

混(hun)勻，37℃水浴(yu) 20min

混(hun)勻，8000g，25℃，離(li)心(xin) 5min，小(xiao)心(xin)吸(xi)取上(shang)層水相 1ml， 1ml 玻璃(li)比色(se)皿，蒸餾(liu)水調零(ling)，測定(ding) A530。 ΔA=A 測(ce)定(ding)-A 空(kong)白，空白管(guan)只(zhi)要做(zuo)壹(yi)管(guan)。

超(chao)氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)含量計算公(gong)式(shi)：

標(biao)準(zhun)曲線：y = 0.0242x - 0.0027，R2=0.9980

組(zu)織(zhi)：

按(an)照(zhao)樣本質量計算

超(chao)氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)含量（nmol/g 鮮(xian)重）= (ΔA +0.0027)÷0.0242×V 反(fan)總(zong)÷(V 樣÷V 樣(yang)總(zong)×W)×2

=148.76×(ΔA +0.0027)÷W

超(chao)氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)產(chan)生(sheng)速率(lv)（nmol/ g·min）=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T

=7.44× (ΔA +0.0027)÷W

按(an)照(zhao)蛋(dan)白(bai)質濃(nong)度(du)計算

超(chao)氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)含量（nmol/mg prot）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V 反(fan)總(zong)÷(V 樣×Cpr)×2

=148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr

超(chao)氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)產(chan)生(sheng)速率(lv)（nmol/ mg prot·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T

=7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr

細(xi)菌(jun)，真菌(jun)：

超(chao)氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)含量（nmol/104 cell）= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V 反(fan)總(zong)÷(V 樣÷V 樣(yang)總(zong)×細胞(bao)數量(liang))×2

= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細(xi)胞(bao)數量(liang)

超(chao)氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)產(chan)生(sheng)速率(lv)（nmol/104 cell·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細胞(bao)數量(liang)÷T

=7.44× (ΔA+0.0027)÷細(xi)胞(bao)數量(liang)

血(xue)清或培(pei)養(yang)液

超(chao)氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi) 含量（nmol/ml）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V 反(fan)總(zong)÷V 樣×2

=148.76× (ΔA+0.0027)

超(chao)氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)產(chan)生(sheng)速率(lv)（nmol/ml·min）= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T

= 7.44× (ΔA+0.0027)

V 樣(yang)總(zong)：加入(ru)提取液(ye)體(ti)積(ji)，1 ml； V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)總(zong)體積(ji)，0.9ml；V 樣(yang)：反(fan)應(ying)中樣(yang)品(pin)體積(ji)，0.5ml；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣品(pin)質量，g；T：反(fan)應(ying)時間，20min；2： 2 分子(zi)O2－參與(yu)反(fan)應(ying)生成 1 分子(zi) NO2－。

註意(yi)事(shi)項：

1、吸(xi)光(guang)值大(da)於(yu) 2，樣(yang)品適當(dang)稀釋再(zai)測(ce)定(ding)，註意(yi)計算公(gong)式(shi)裏(li)乘(cheng)以(yi)稀釋倍(bei)數。

2、樣(yang)品制備(bei)好(hao)之後(hou)，立刻進(jin)行(xing)測(ce)定(ding)，請(qing)勿將(jiang)樣(yang)品進(jin)行(xing)長時間(jian)的(de)低溫(wen)保(bao)存(cun)，以(yi)免影(ying)響(xiang)測定(ding)結(jie)果(guo)。

3、試(shi)劑(ji)四(si)有壹定(ding)的(de)毒性(xing)，請(qing)操作時做(zuo)好(hao)防護(hu)措施(shi)。

超(chao)氧(yang)陰(yin)離(li)子(zi)試劑(ji)盒(he) 氧(yang)化(hua)