查爾(er)酮異構酶(Chalcone isomerase, CHI)是第(di)壹(yi)個被(bei)認(ren)識的(de)黃酮類(lei)化合(he)物合(he)成相(xiang)關酶，也(ye)是黃(huang)酮代謝途徑中(zhong)的(de)關鍵酶之(zhi)壹(yi)。查爾(er)酮異構酶和(he)查爾(er)酮合(he)酶壹(yi)起構成了(le)黃(huang)酮類(lei)化合(he)物生物合(he)成的(de)限(xian)速(su)酶。
查爾(er)酮異構酶試(shi)劑(ji)盒(he) 抗氧

查爾(er)酮異構酶(Chalcone isomerase, CHI)試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書

微(wei)量(liang)法 100T/96S

查爾(er)酮異構酶試(shi)劑(ji)盒(he) 抗氧

正式測(ce)定(ding)前務(wu)必(bi)取 2-3 個預(yu)期(qi)差異(yi)較大(da)的(de)樣(yang)本做預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義：

查爾(er)酮異構酶(Chalcone isomerase, CHI)是第(di)壹(yi)個被(bei)認(ren)識的(de)黃酮類(lei)化合(he)物合(he)成相(xiang)關酶，也(ye)是黃(huang)酮代謝途徑中(zhong)的(de)關鍵酶之(zhi)壹(yi)。查爾(er)酮異構酶和(he)查爾(er)酮合(he)酶壹(yi)起構成了(le)黃(huang)酮類(lei)化合(he)物生物合(he)成的(de)限(xian)速(su)酶。

測(ce)定(ding)原理：

查爾(er)酮異構酶（CHI）催(cui)化(hua)查爾(er)酮環化形成 4,5,7-三羥基黃烷(wan)酮，通過(guo)測(ce)定(ding) 381nm 下的(de)吸光(guang)度(du)變化表(biao)示CHI 的(de)活性(xing)。

組(zu)成：

試(shi)劑(ji)三：臨(lin)用(yong)前(qian)加 2ml 蒸餾水(shui)溶(rong)解(jie)；用(yong)不(bu)完的(de)試劑(ji)分裝(zhuang)後(hou)-20℃保存，禁止反復凍(dong)融。

自(zi)備儀器(qi)和(he)用(yong)品(pin)：

可(ke)見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶標(biao)儀(yi)、臺式離心(xin)機(ji)、水(shui)浴鍋、可(ke)調式移液(ye)器(qi)、微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比色(se)皿(min)/96 孔(kong)板、研(yan)缽(bo)、冰和(he)蒸餾(liu)水(shui)

粗(cu)酶液(ye)提(ti)取：

按照組織質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取液(ye)體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例(li)（建議稱(cheng)取(qu)約(yue) 0.1g 組織，加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取液(ye)），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上清，置冰上待(dai)測(ce)。

測(ce)定(ding)步(bu)驟(zhou)：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)或(huo)酶標(biao)儀(yi)預熱 30min 以(yi)上，調節波長至 381nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調零。

2、樣(yang)本測(ce)定(ding)表(biao)

在微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比色(se)皿(min)或(huo) 96 孔板中(zhong)加入 10µl 上清液(ye)和(he) 190µl 試劑(ji)二(er)，立(li)即混(hun)勻並(bing)記(ji)錄 381nm 下(xia)初(chu)始(shi)吸光(guang)值(zhi)

A1 和(he) 37℃保溫 30min 後(hou)的(de)吸光(guang)值(zhi)A2。計(ji)算(suan)ΔA＝A2-A1。

CHI 活(huo)性(xing)計(ji)算(suan)：

用(yong)微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比色(se)皿(min)測(ce)定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式如(ru)下(xia)

(1) 按樣(yang)本蛋白濃度(du)計(ji)算(suan)

單(dan)位定(ding)義：每(mei)mg 組(zu)織(zhi)蛋白在每(mei)ml 反(fan)應(ying)體系中每(mei)小(xiao)時(shi)A381 變化 0.1 為壹(yi)個酶活(huo)力單位。

CHI（U/mg prot）＝ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（V 樣(yang)×Cpr）÷0.1÷T =400×ΔA÷Cpr

（2）按樣(yang)本鮮重計(ji)算(suan)

單(dan)位定(ding)義：每(mei)g 組(zu)織(zhi)在每(mei)ml 反(fan)應(ying)體系中每(mei)小(xiao)時(shi) A381 變化 0.1 為壹(yi)個酶活(huo)力單位。

CHI（U/g 鮮(xian)重）＝ΔA×V 反總(zong)÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷0.1÷T =400×ΔA÷W

V 反(fan)總(zong)：反應(ying)體(ti)系(xi)總(zong)體積(ji)，0.2ml； V 樣(yang)：加入樣(yang)本體積(ji)，0.01ml；V 樣(yang)總(zong)：加入(ru)提(ti)取液(ye)體積(ji)，1 ml；T：反(fan)應時間，0.5h；Cpr：樣(yang)本蛋白質(zhi)濃度，mg/ml；W：樣(yang)本質(zhi)量(liang)。

用(yong) 96 孔(kong)板測(ce)定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式如(ru)下(xia)

(1) 按樣(yang)本蛋白濃度(du)計(ji)算(suan)

單(dan)位定(ding)義：每(mei)mg 組(zu)織(zhi)蛋白在每(mei)ml 反(fan)應(ying)體系中每(mei)小(xiao)時(shi)A381 變化 0.05 為壹(yi)個酶活(huo)力單位。

CHI（U/mg prot）＝ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（V 樣(yang)×Cpr）÷0.05÷T =800×ΔA÷Cpr

（2）按樣(yang)本鮮重計(ji)算(suan)

單(dan)位定(ding)義：每(mei)g 組(zu)織(zhi)在每(mei)ml 反(fan)應(ying)體系中每(mei)小(xiao)時(shi) A381 變化 0.05 為壹(yi)個酶活(huo)力單位。

CHI（U/g 鮮(xian)重）＝ΔA×V 反總(zong)÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong))÷0.05÷T =800×ΔA÷W

V 反(fan)總(zong)：反應(ying)體(ti)系(xi)總(zong)體積(ji)，0.2ml； V 樣(yang)：加入樣(yang)本體積(ji)，0.01ml；V 樣(yang)總(zong)：加入(ru)提(ti)取液(ye)體積(ji)，1 ml；T：反(fan)應時間，0.5h；Cpr：樣(yang)本蛋白質(zhi)濃度，mg/ml；W：樣(yang)本質(zhi)量(liang)。

查爾(er)酮異構酶試(shi)劑(ji)盒(he) 抗氧