多(duo)胺氧(yang)化(hua)酶是(shi)催(cui)化(hua)生物體(ti)內(nei)多(duo)胺氧(yang)化(hua)的(de)關(guan)鍵酶，通(tong)過調節體內(nei)多(duo)胺水(shui)平(ping)和生成物的(de)濃(nong)度，參與各(ge)種植(zhi)物體(ti)對(dui)逆境脅迫的(de)反應和生長發育過程(cheng)。
多(duo)胺氧(yang)化(hua)酶試劑(ji)盒(he) 抗(kang)氧(yang)

多(duo)胺氧(yang)化(hua)酶（Polyamine oxidase，PAO）試劑(ji)盒(he)說明書

微量(liang)法 100T/96S

多(duo)胺氧(yang)化(hua)酶試劑(ji)盒(he) 抗(kang)氧(yang)

正式(shi)測(ce)定(ding)前(qian)務必(bi)取 2-3 個(ge)預期(qi)差(cha)異(yi)較(jiao)大的(de)樣(yang)本(ben)做(zuo)預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義：

多(duo)胺氧(yang)化(hua)酶是(shi)催(cui)化(hua)生物體(ti)內(nei)多(duo)胺氧(yang)化(hua)的(de)關(guan)鍵酶，通(tong)過調節體內(nei)多(duo)胺水(shui)平(ping)和生成物的(de)濃(nong)度，參與各(ge)種植(zhi)物體(ti)對(dui)逆境脅迫的(de)反應和生長發育過程(cheng)。

測(ce)定(ding)原理：

PAO 催化(hua)多(duo)胺氧(yang)化(hua)產(chan)生過氧(yang)化(hua)氫(qing)，在(zai)過氧(yang)化(hua)物酶存(cun)在(zai)的(de)條(tiao)件(jian)下(xia)與底(di)物顯色，在(zai) 550nm 下(xia)有特(te)征吸(xi)收峰(feng)，通(tong)過測(ce)定(ding)吸(xi)光值增(zeng)加(jia)速(su)率來(lai)反映(ying) PAO 活(huo)性(xing)。

組成(cheng)：

自備(bei)儀(yi)器和用品(pin)：

酶標儀(yi)、臺(tai)式(shi)離心機(ji)、可調式(shi)移(yi)液(ye)器、96 孔板(ban)、研缽(bo)、冰(bing)和(he)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

粗酶液(ye)提取：

組織(zhi)：按照組織(zhi)質量(liang)（g）：試劑(ji)壹(yi)體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例（建(jian)議稱(cheng)取約 0.1g 組織(zhi)，加(jia)入(ru) 1ml 試劑(ji)壹(yi)）進(jin)行(xing)冰(bing)浴勻漿，然(ran)後 10000g，4℃離心 20min，取上清，置冰(bing)上待測(ce)。

細菌、真(zhen)菌：按照細胞(bao)數量(liang)（104 個(ge)）：試劑(ji)壹(yi)體(ti)積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比例（建(jian)議 500 萬(wan)細胞(bao)加(jia)入(ru) 1ml 試劑(ji)壹(yi)），冰(bing)浴超(chao)聲(sheng)波破碎(sui)細胞(bao)（功率 300w，超(chao)聲(sheng) 3 秒(miao)，間(jian)隔(ge) 7 秒，總時間(jian) 3min）；然(ran)後 10000g， 4℃，離心 10min，取上清置於(yu)冰(bing)上待測(ce)。

血(xue)清等液(ye)體：直(zhi)接測(ce)定(ding)。

測(ce)定(ding)步驟(zhou)：

1、酶標儀(yi)預(yu)熱(re) 30min 以(yi)上，調節波長至 550nm。

2、樣本(ben)測(ce)定(ding)

PAO 活(huo)性(xing)計算(suan)：

按樣本(ben)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度計算(suan)：

單(dan)位定(ding)義：每mg 組織(zhi)蛋白(bai)在(zai)每ml 反應體系(xi)中每(mei)分鐘(zhong)A550 變(bian)化(hua) 0.001 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。

PAO（U/mg prot）＝ΔA×V 反總(zong)÷（V 樣×Cpr）÷0.001÷T =333.33×ΔA÷Cpr

按樣本(ben)鮮重計算(suan)：

單(dan)位定(ding)義：每g 組織(zhi)在(zai)每ml 反應體系(xi)中每(mei)分鐘(zhong) A550 變(bian)化(hua) 0.001 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。

PAO（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總(zong)÷(W× V 樣÷V 樣(yang)總)÷0.001÷T =333.33×ΔA÷W

按細菌或細胞(bao)密度計算(suan)：

單(dan)位定(ding)義：每 1 萬(wan)個(ge)細菌或細胞(bao)在(zai)每 ml 反應體系(xi)中每(mei)分鐘(zhong)A550 變(bian)化(hua) 0.001 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。

PAO（U/104 cell）＝ΔA×V 反總(zong)÷(500×V 樣÷V 樣(yang)總)÷0.001÷T =0.667×ΔA

按液(ye)體體(ti)積計算(suan)

單(dan)位的(de)定(ding)義：每ml 液(ye)體樣(yang)本(ben)在(zai)每ml 反應體系(xi)中每(mei)分鐘(zhong)A550 變(bian)化(hua) 0.001 為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)力單(dan)位。

PAO（U/ml）=ΔA×V 反總(zong)÷V 樣÷0.001÷T =333.33×ΔA

V 反總(zong)：反應體系(xi)總體(ti)積，0.2ml；V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣本(ben)體(ti)積(ji)，0.02 ml；V 樣(yang)總：加(jia)入(ru)提取液(ye)體積(ji)，1 ml；T：反應時間(jian)，30 min；Cpr：樣本(ben)蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃(nong)度，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量(liang)，g；500：細菌或細胞(bao)總數，500 萬。

多(duo)胺氧(yang)化(hua)酶試劑(ji)盒(he) 抗(kang)氧(yang)