酸(suan)性條件下，ACP 催(cui)化(hua)酪蛋白(bai)水解(jie)產(chan)生(sheng)酪an酸(suan)；在堿(jian)性條件下，酪an酸(suan)還原磷(lin)鉬(mu)酸(suan)化(hua)合(he)物(wu)生(sheng)成鎢(wu)藍(lan)；鎢藍(lan)在 680nm 有(you)特(te)征(zheng)吸收峰，通過(guo)測(ce)定(ding)其吸光度增加(jia)，來計(ji)算(suan) ACP 活性(xing)。
酸(suan)性蛋白酶(mei)試(shi)劑(ji)盒 蛋(dan)bai酶(mei)系(xi)列

酸(suan)性蛋白酶(mei)（Acid protease, ACP）試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)

分(fen)光光度法(fa) 50 管(guan)/24 樣

酸(suan)性蛋白酶(mei)試(shi)劑(ji)盒 蛋(dan)bai酶(mei)系(xi)列

正(zheng)式測(ce)定(ding)前(qian)務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差(cha)異較大(da)的(de)樣本做(zuo)預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義：

ACP 是(shi)壹種(zhong)在(zai)酸(suan)性環境下催(cui)化(hua)蛋白質水解(jie)的(de)酶(mei)。該(gai)酶(mei)主要(yao)用於酒(jiu)精發酵、啤(pi)酒(jiu)釀(niang)造、毛皮(pi)軟(ruan)化(hua)、果酒澄(cheng)清、醬油(you)釀(niang)造、飼料(liao)等(deng)。

測(ce)定(ding)原(yuan)理(li)：

酸(suan)性條件下，ACP 催(cui)化(hua)酪蛋白(bai)水解(jie)產(chan)生(sheng)酪an酸(suan)；在堿(jian)性條件下，酪an酸(suan)還原磷(lin)鉬(mu)酸(suan)化(hua)合(he)物(wu)生(sheng)成鎢(wu)藍(lan)；鎢藍(lan)在 680nm 有(you)特(te)征(zheng)吸收峰，通過(guo)測(ce)定(ding)其吸光度增加(jia)，來計(ji)算(suan) ACP 活性(xing)。

組成：

試(shi)劑(ji)壹的(de)配制(zhi)：臨(lin)用前(qian)按(an)液(ye)體(ti)壹：液(ye)體(ti)二：蒸餾水=76（μl）：17（μl）：18（ml）的(de)比例(li)配(pei)制，現配(pei)現(xian)用，如(ru)出現(xian)白色絮狀沈(chen)澱則不(bu)能用。

試(shi)劑(ji)二：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，4℃保(bao)存(cun)。臨(lin)用前(qian)加(jia) 10 ml 蒸餾水溶(rong)解(jie)。

試(shi)劑(ji)三：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，4℃避光保(bao)存(cun)。臨(lin)用前(qian)加(jia)入 20 ml 試(shi)劑(ji)壹，沸(fei)水浴(yu)中(zhong)磁(ci)力(li)攪拌溶解(jie)。（可(ke)在(zai)燒杯上(shang)蓋壹層(ceng)保(bao)鮮(xian)膜(mo)，註(zhu)意觀(guan)察，避免水分(fen)全部(bu)蒸(zheng)發，壹般(ban)加(jia)熱 15-30 分(fen)鐘，該試(shi)劑(ji)為過(guo)飽(bao)和(he)試(shi)劑(ji)，充分混勻(yun)後仍出現(xian)顆(ke)粒(li)物(wu)不(bu)溶物(wu)不(bu)影(ying)響(xiang)使用）。

試(shi)劑(ji)四：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，4℃保(bao)存(cun)。臨(lin)用前(qian)加(jia)入 50 ml 蒸(zheng)餾水溶(rong)解(jie)。

標準(zhun)品(pin)：液(ye)體(ti) 1ml×1 支，0.25 μ mol/ml 標準(zhun)酪an酸(suan)溶液(ye)，4℃保(bao)存(cun)。

自(zi)備(bei)儀器和用品(pin)：

可(ke)見分(fen)光光度計(ji)、水浴(yu)鍋(guo)、磁(ci)力(li)攪拌器、可調式移液(ye)槍(qiang)、1ml 玻璃比色皿、1.5 ml EP 管(guan)和(he)蒸餾水。

粗(cu)酶(mei)液(ye)提取(qu)：

試(shi)劑(ji)壹的(de)配制(zhi)：見試(shi)劑(ji)的(de)組成和(he)配(pei)制。

組織(zhi)：按(an)照(zhao)組織(zhi)質量(liang)（g）：試(shi)劑(ji)壹體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例(li)（建議(yi)稱(cheng)取(qu)約(yue) 0.1g 組織(zhi)，加(jia)入 1ml試(shi)劑(ji)壹）冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿(jiang)，8000g，4℃離心 10min，取(qu)上(shang)清，即粗(cu)酶(mei)液(ye)。

血清或培養(yang)液(ye)：直(zhi)接(jie)測(ce)定(ding)。

細菌(jun)、真(zhen)菌(jun)：按(an)照(zhao)細胞數(shu)量(liang)（104 個）：試(shi)劑(ji)壹體(ti)積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比例(li)（建議(yi) 500 萬(wan)細胞加(jia)入 1ml 試(shi)劑(ji)壹），冰(bing)浴(yu)超(chao)聲(sheng)波(bo)破碎(sui)細胞（功(gong)率 300w，超(chao)聲(sheng) 3 秒(miao)，間(jian)隔(ge) 7 秒，總(zong)時間(jian) 3min）；然(ran)後 8000g， 4℃，離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清置(zhi)於冰(bing)上(shang)待(dai)測(ce)。

測(ce)定(ding)操(cao)作(zuo)：

分光光度計(ji)預(yu)熱 30min，調節波長到 680 nm，蒸(zheng)餾水調零。

試(shi)劑(ji)二、試(shi)劑(ji)三和(he)試(shi)劑(ji)四置(zhi)於 30℃水浴(yu)保(bao)溫(wen) 30min。

對(dui)照(zhao)管(guan)：取(qu)壹支(zhi)EP 管(guan)，加(jia)入 100μl 粗(cu)酶(mei)液(ye)，200μl 試(shi)劑(ji)二，混勻(yun)後置(zhi)於 30℃水浴(yu)保(bao)溫(wen) 10min；加(jia)入200μl 試(shi)劑(ji)三，混勻(yun)後 8000g， 4℃離心(xin) 10min；取(qu) 200μl 上(shang)清液(ye)，加(jia)入新(xin)的(de) EP 管(guan)，再加(jia)入 1000μl 試(shi)劑(ji)四，200μl 試(shi)劑(ji)五(wu)，混勻(yun)後置(zhi)於 30℃水浴(yu)保(bao)溫(wen) 20min，於 680nm 測(ce)定(ding)光吸(xi)收，記為 A 對照(zhao)管(guan)。

測(ce)定(ding)管(guan)：取(qu)壹支(zhi)EP 管(guan)，加(jia)入 100μl 粗(cu)酶(mei)液(ye)，200μl 試(shi)劑(ji)三，混勻(yun)後置(zhi)於 30℃水浴(yu)保(bao)溫(wen) 10min；加(jia)入200μl 試(shi)劑(ji)二，混勻(yun)後 8000g， 4℃離心(xin) 10min；取(qu) 200μl 上(shang)清液(ye)，加(jia)入新(xin)的(de) EP 管(guan)，再加(jia)入 1000μl 試(shi)劑(ji)四，200μl 試(shi)劑(ji)五(wu)，混勻(yun)後置(zhi)於 30℃水浴(yu)保(bao)溫(wen) 20min，於 680nm 測(ce)定(ding)光吸(xi)收，記為A 測(ce)定(ding)管(guan)。（註(zhu)意與(yu)空(kong)白管(guan)不(bu)同(tong)，先加(jia)試(shi)劑(ji)三，後加(jia)試(shi)劑(ji)二）

空(kong)白(bai)管(guan)：取(qu) EP 管(guan)，加(jia)入 200μl 蒸(zheng)餾水，1000μl 試(shi)劑(ji)四，200μl 試(shi)劑(ji)五(wu)，混勻(yun)後置(zhi)於 30℃水浴(yu)保(bao)溫(wen) 20min，於 680nm 測(ce)定(ding)光吸(xi)收，記為A 空白(bai)管(guan)。

標準(zhun)管(guan)：取(qu) EP 管(guan)，加(jia)入 200μl 標準(zhun)品(pin)，1000μl 試(shi)劑(ji)四，200μl 試(shi)劑(ji)五(wu)，混勻(yun)後置(zhi)於 30℃水浴(yu)保(bao)溫(wen) 20min，於 680nm 測(ce)定(ding)光吸(xi)收，記為A 標準(zhun)管(guan)。

註(zhu)意：空白(bai)管(guan)和(he)標準(zhun)管(guan)只(zhi)需要(yao)測(ce)定(ding)壹次(ci)。

ACP 活性(xing)計(ji)算(suan)公式(shi)：

1. 按(an)照(zhao)樣本蛋白(bai)濃度計(ji)算(suan)

ACP 活性(xing)單(dan)位定(ding)義(yi)：30℃每(mei)毫(hao)克(ke)蛋(dan)白每(mei)分鐘水解(jie)產(chan)生(sheng) 1nmol 酪an酸(suan)為 1 個酶(mei)活單(dan)位。

ACP 活性(xing)（nmol/min /mg prot）= C 標準(zhun)品(pin)×（A 測(ce)定(ding)管(guan)－A 對(dui)照管(guan)）÷（A 標準(zhun)管(guan)－A 空(kong)白管(guan)）×V 反(fan)總÷(Cpr×V1)÷T= 125×（A 測(ce)定(ding)管(guan)－A 對(dui)照管(guan)）÷（A 標準(zhun)管(guan)－A 空(kong)白管(guan)）÷Cpr 2．按(an)照(zhao)樣本質量(liang)計(ji)算(suan)

ACP 活性(xing)單(dan)位定(ding)義(yi)：30℃每(mei)克樣品(pin)每(mei)分鐘催(cui)化(hua)水解(jie)產(chan)生(sheng) 1 nmol 酪an酸(suan)為 1 個酶(mei)活單(dan)位。

ACP 活性(xing)（nmol/min /g 鮮(xian)重）=C 標準(zhun)品(pin)×（A 測(ce)定(ding)管(guan)－A 對(dui)照管(guan)）÷（A 標準(zhun)管(guan)－A 空(kong)白管(guan)）×V 反(fan)總÷

（W×V1÷V2）÷T= 125×（A 測(ce)定(ding)管(guan)－A 對(dui)照管(guan)）÷（A 標準(zhun)管(guan)－A 空(kong)白管(guan)）÷W

3. 按(an)照(zhao)液(ye)體(ti)體積(ji)計(ji)算(suan)

ACP 活性(xing)單(dan)位定(ding)義(yi)：30℃每(mei)毫(hao)升樣品(pin)每(mei)分鐘催(cui)化(hua)水解(jie)產(chan)生(sheng) 1nmol 酪an酸(suan)為 1 個酶(mei)活單(dan)位。

ACP 活性(xing)（nmol/min/ml）=C 標準(zhun)品(pin)×（A 測(ce)定(ding)管(guan)－A 對(dui)照管(guan)）÷（A 標準(zhun)管(guan)－A 空(kong)白管(guan)）×V 反(fan)總÷V1÷T= 125×（A 測(ce)定(ding)管(guan)－A 對(dui)照管(guan)）÷（A 標準(zhun)管(guan)－A 空(kong)白管(guan)）

按(an)照(zhao)細胞數(shu)量(liang)計(ji)算(suan)

ACP 活性(xing)單(dan)位定(ding)義(yi)：30℃每(mei) 104 個細胞每(mei)分鐘催(cui)化(hua)水解(jie)產(chan)生(sheng) 1nmol 酪an酸(suan)為 1 個酶(mei)活單(dan)位。

ACP 活性(xing)（nmol/min /104 cell）=C 標準(zhun)品(pin)×（A 測(ce)定(ding)管(guan)－A 對(dui)照管(guan)）÷（A 標準(zhun)管(guan)－A 空(kong)白管(guan)）×V 反(fan)總÷

（細胞數(shu)量(liang)×V1÷V2）÷T= 125×（A 測(ce)定(ding)管(guan)－A 對(dui)照管(guan)）÷（A 標準(zhun)管(guan)－A 空(kong)白管(guan)）÷細胞數(shu)量(liang)

C 標準(zhun)品(pin)：0.25 μ mol/ml 標準(zhun)酪an酸(suan)溶液(ye)；V 反(fan)總：酶(mei)促(cu)反(fan)應總(zong)體積(ji)，0.5ml；Cpr：粗(cu)酶(mei)液(ye)蛋(dan)白質濃度（mg/ml）； V1：加(jia)入反(fan)應體(ti)系(xi)中粗(cu)酶(mei)液(ye)體(ti)積(ji)（ml），0.1 ml；V2：提取(qu)液(ye)總(zong)體積(ji)（ml），1ml；T：催(cui)化(hua)反(fan)應時(shi)間(jian)（min）， 10min；W：樣品(pin)質(zhi)量(liang)（g）。

註(zhu)意事(shi)項：

試(shi)劑(ji)壹按(an)操(cao)作(zuo)指(zhi)示配制(zhi)，用多(duo)少配(pei)多(duo)少，出現(xian)白色絮狀沈(chen)澱則不(bu)能用。

臨(lin)用前(qian)配(pei)制的(de)試(shi)劑(ji)配置(zhi)好後 3 天內使用完畢(bi)。

酸(suan)性蛋白酶(mei)試(shi)劑(ji)盒 蛋(dan)bai酶(mei)系(xi)列