GOD（EC 1.1.3.4）廣(guang)泛存在(zai)於動(dong)物(wu)、和(he)植(zhi)物(wu)中(zhong)，催(cui)化(hua)葡(pu)萄糖氧(yang)化(hua)生成(cheng)葡(pu)萄糖酸，並(bing)產生 H2O2，是生物(wu)體中(zhong)產(chan)生活性氧(yang)的代(dai)謝途(tu)徑之(zhi)壹
葡(pu)萄糖氧(yang)化(hua)酶(mei)試劑盒(he)

葡(pu)萄糖氧(yang)化(hua)酶(mei)（glucose oxidase，GOD）試劑盒(he)說明書(shu)

分(fen)光光度(du)法(fa) 50 管(guan)/24 樣

葡(pu)萄糖氧(yang)化(hua)酶(mei)試劑盒(he)

正(zheng)式(shi)測定(ding)前(qian)務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預期差(cha)異(yi)較(jiao)大的樣本(ben)做(zuo)預測定(ding)測(ce)定意義(yi)：

GOD（EC 1.1.3.4）廣(guang)泛存在(zai)於動(dong)物(wu)、和(he)植(zhi)物(wu)中(zhong)，催(cui)化(hua)葡(pu)萄糖氧(yang)化(hua)生成(cheng)葡(pu)萄糖酸，並(bing)產生 H2O2，是生物(wu)體中(zhong)產(chan)生活性氧(yang)的代(dai)謝途(tu)徑之(zhi)壹

測(ce)定原理(li)：

GOD 催(cui)化(hua)產生H2O2，過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)催(cui)化(hua) H2O2 氧(yang)化(hua) 4-氨(an)基(ji)安替bi林偶聯酚，生成(cheng)有(you)色化(hua)合(he)物(wu)，在(zai) 500 nm有(you)特征吸(xi)收峰，顏色深(shen)淺與(yu) GOD 活性成(cheng)線(xian)性關(guan)系(xi)。

試劑的(de)組(zu)成(cheng)和(he)配(pei)制(zhi)：

試劑壹(yi)：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，-20℃保(bao)存；臨用前(qian)加(jia)入(ru) 20ml 緩(huan)沖液(ye)充分(fen)溶解(jie)待用；用不完的(de)試劑 4℃保(bao)存(cun)壹個(ge)月；

試劑二(er)：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，-20℃保(bao)存；臨用前(qian)加(jia)入(ru) 20ml 緩(huan)沖液(ye)充分(fen)溶解(jie)待用；用不完的(de)試劑 4℃保(bao)存(cun)壹個(ge)月。

自(zi)備儀(yi)器(qi)和(he)用品(pin)：

可(ke)見(jian)分光(guang)光度(du)計(ji)、水(shui)浴鍋(guo)、臺式(shi)離(li)心(xin)機、可(ke)調(tiao)式(shi)移液(ye)器、1 ml 玻(bo)璃比色皿、研(yan)缽、冰(bing)、蒸餾(liu)水。

樣品(pin)測定的(de)準備：

1、細(xi)菌、細胞(bao)或組(zu)織(zhi)樣品(pin)的制(zhi)備(bei)：

細(xi)菌或培(pei)養(yang)細胞(bao)：先收(shou)集細菌(jun)或(huo)細胞(bao)到離(li)心(xin)管(guan)內(nei)，離(li)心(xin)後棄上(shang)清(qing)；按照(zhao)細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)數量(liang)（104 個(ge)）：提(ti)取(qu)液(ye)體積（ml）為 500~1000：1 的(de)比例（建(jian)議(yi) 500 萬(wan)細(xi)菌(jun)或細胞(bao)加入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），超聲波破(po)碎(sui)細(xi)菌或細胞(bao)（冰浴(yu)，功率(lv) 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重(zhong)復 30 次(ci)）；8000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)，置(zhi)冰上(shang)待測(ce)。

組(zu)織(zhi)：按(an)照(zhao)組(zu)織(zhi)質(zhi)量（g）：提(ti)取(qu)液(ye)體積(ml)為 1：5~10 的(de)比例（建(jian)議(yi)稱(cheng)取(qu)約(yue) 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），進行(xing)冰(bing)浴勻(yun)漿。8000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)，置(zhi)冰上(shang)待測(ce)。

2、血(xue)清(qing)（漿）樣品(pin)：直(zhi)接檢測(ce)。

測(ce)定步(bu)驟(zhou)：

1、 分(fen)光光度(du)計(ji)或(huo)酶(mei)標(biao)儀(yi)預熱 30min 以上(shang)，調節波(bo)長至(zhi) 500nm，蒸餾水(shui)調零(ling)。

2、 試劑壹(yi)和(he)試劑二(er)的配(pei)制(zhi)：參(can)見(jian)試劑的(de)組(zu)成(cheng)和(he)配(pei)制(zhi)。

3、煮(zhu)沸樣本(ben)的(de)準備(bei)：取 500μl 樣本(ben)至(zhi)新(xin)的(de)EP 管(guan)中(zhong)，95℃水(shui)浴 10min，冷卻至(zhi)室溫後，8000g 4℃離(li)心(xin)10min，取上(shang)清(qing)作(zuo)為對照(zhao)管(guan)的(de)煮沸(fei)樣本(ben)待測(ce)。

4、測(ce)定操(cao)作(zuo)表(biao)

混(hun)勻(yun)，35'C 保(bao)溫 15min 後，於 500nm 波(bo)長處讀取(qu)吸(xi)光度(du)。ΔA=A 測定管(guan)-A 對照(zhao)管(guan)。每個(ge)測定(ding)管(guan)需(xu)設(she)壹個(ge)對照(zhao)管(guan)。

GOD 活力單(dan)位的(de)計(ji)算(suan)：

1、標(biao)準條(tiao)件(jian)下(xia)測(ce)定回歸(gui)方程(cheng)為y = 2.8348x - 0.0169；x 為H2O2 標(biao)準(zhun)品(pin)濃度(du)（μmol/ml），y 為ΔA。

1、血(xue)清(qing)（漿）GOD 活力的(de)計(ji)算(suan)

單(dan)位定義：每ml 血清(qing)（漿）每分鐘(zhong)催(cui)化(hua)產生 1nmol H2O2 為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

GOD（nmol/min/ml）= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反總÷V 樣÷T×1000=58.8×(ΔA+0.0169)

2、細(xi)菌、細胞(bao)或組(zu)織(zhi) GOD 活力的(de)計(ji)算(suan)

按(an)蛋白濃度(du)計(ji)算(suan)

單(dan)位定義：每mg 組(zu)織(zhi)蛋白每分鐘(zhong)催(cui)化(hua)產生 1nmol H2O2 為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反總÷(V 樣×Cpr) ×1000÷T

=58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr

按(an)樣本(ben)鮮(xian)重(zhong)計(ji)算(suan)

單(dan)位定義：每 g 組(zu)織(zhi)每分鐘(zhong)催(cui)化(hua)產生 1nmol H2O2 為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

GOD（nmol/min/g 鮮(xian)重(zhong)）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總) ×1000÷T

=58.8×(ΔA+0.0169)÷W

按(an)細菌或細(xi)胞(bao)密度(du)計(ji)算(suan)

單(dan)位定義：每壹萬(wan)個(ge)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)每分鐘(zhong)催(cui)化(hua)產生 1nmol H2O2 為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單(dan)位。

GOD（nmol/min/104 cell）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總) ×1000÷T

=0.118×(ΔA+0.0169)

V 反總：反應體系總體積，0.625ml； V 樣：加(jia)入(ru)樣本(ben)體積，0.25ml；V 樣總：加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液(ye)體積，1 ml； T：反應時間，15 min； Cpr：樣本(ben)蛋白質(zhi)濃度(du)，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量，g；500：細菌(jun)或細(xi)胞(bao)總數(shu)，500 萬(wan)。 

(3)按(an)細菌或細(xi)胞(bao)密度(du)計(ji)算(suan)

NADPH (nmol/104 cell）=[(△A -0.0259）÷1.2396×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.003× (△A -0.0259）

V1：加(jia)入反應體系中(zhong)樣本(ben)體積，0.05ml；V2：加入提(ti)取(qu)液(ye)體積，2ml；V3：加入血(xue)清(qing)（漿）體積：0.1ml； Cpr：樣本(ben)蛋白質(zhi)濃度(du)，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量，g；500：細胞(bao)或細(xi)菌總數(shu)，500 萬(wan)。

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