單(dan)寧酶(mei)全稱(cheng)是(shi)單(dan)寧酯(zhi)酰(xian)水(shui)解(jie)酶(Tannase，EC 3.1.1.20)，它可以水解(jie)沒(mei)食(shi)子(zi)酸單(dan)寧中(zhong)的(de)酯鍵和(he)縮酚(fen)羧(suo)鍵，生成(cheng)沒(mei)食(shi)子(zi)酸和葡(pu)萄糖
單(dan)寧酶(mei)試(shi)劑(ji)盒 氧化

單(dan)寧酶(mei)（Tannase，TAN）試劑(ji)盒說明書(shu)

微量法(fa) 100 管/48 樣(yang)

單(dan)寧酶(mei)試(shi)劑(ji)盒 氧化

正式測(ce)定(ding)前(qian)務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個預期(qi)差(cha)異(yi)較大的樣(yang)本做(zuo)預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義(yi)：

單(dan)寧酶(mei)全稱(cheng)是(shi)單(dan)寧酯(zhi)酰(xian)水(shui)解(jie)酶(Tannase，EC 3.1.1.20)，它可以水(shui)解(jie)沒(mei)食(shi)子(zi)酸單(dan)寧中(zhong)的(de)酯鍵和(he)縮酚(fen)羧(suo)鍵，生成(cheng)沒(mei)食(shi)子(zi)酸和葡(pu)萄糖

測(ce)定(ding)原(yuan)理：

使用抗氧化劑(ji)沒(mei)食(shi)子(zi)酸丙酯(zhi)（PG）作(zuo)為(wei)單(dan)寧酶(mei)酶(mei)促(cu)反應(ying)的底(di)物(wu)，在 270nn 下測(ce)定(ding)底(di)物(wu)PG 反(fan)應前(qian)後的光(guang)密度(du)變(bian)化，計算(suan)單(dan)寧酶(mei)酶(mei)活力(li)。

試劑(ji)的(de)組成(cheng)和配(pei)制(zhi)：

試劑(ji)二(er)：粉(fen)劑(ji)×1 支，4℃保(bao)存；臨用前(qian)每支加入 6ml 試劑(ji)壹(yi)，充分溶解(jie)後備用；用不(bu)完(wan)的(de)試劑(ji) 4℃保(bao)存。

需自備(bei)的的儀(yi)器(qi)和(he)用品：

紫外分光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶標儀(yi)、水浴鍋、臺(tai)式(shi)離心機(ji)、可調(tiao)式(shi)移(yi)液(ye)器(qi)、微(wei)量石英(ying)比(bi)色(se)皿(min)/96 孔(kong)UV 板(ban)、研缽(bo)、冰(bing)、蒸餾水(shui)

粗酶(mei)液(ye)提(ti)取(qu)：

按照組織(zhi)質(zhi)量（g）：試劑(ji)壹(yi)體積(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例(li)（建議稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組織(zhi)，加入 1ml 試(shi)劑(ji)壹(yi)），進行冰(bing)浴勻(yun)漿(jiang)。10000g 4℃離心 10min，取(qu)上清，置(zhi)冰(bing)上待測(ce)。

液體樣(yang)本：直接(jie)取(qu)上清測(ce)定(ding)。

測(ce)定(ding)步(bu)驟：

1、分光光度(du)計(ji)預熱(re) 30min 以上，調(tiao)節(jie)波(bo)長(chang)至 270nm，蒸餾水(shui)調(tiao)零(ling)。

2、加樣(yang)表：

混勻(yun)，40℃準確(que)保(bao)溫(wen) 10 min 後，置 95℃水浴中 10 min（蓋(gai)緊(jin)，防(fang)止(zhi)水分散失），冷卻，

混勻(yun)，取(qu) 200uL 至微量石英(ying)比(bi)色(se)皿(min)或(huo) 96 孔(kong)UV 板(ban)中(zhong)，270nm 處(chu)讀(du)取(qu)各管吸(xi)光(guang)值。計(ji)算(suan)ΔA=A 對(dui)照-A測(ce)定(ding)。每個測(ce)定(ding)管需設個(ge)壹個對(dui)照管。

註意(yi)事(shi)項(xiang)：

1、可以在不(bu)同(tong)對(dui)照管中(zhong)加入不(bu)同(tong)樣(yang)品的(de)粗酶(mei)液(ye)，然後集中(zhong)進(jin)行 5min 95℃沸水浴處(chu)理。

2、務(wu)必(bi)使用 96 孔(kong)UV 板(ban)（非(fei)普通(tong)酶標板(ban)，普通(tong)酶標板(ban)只(zhi)能(neng)透過可(ke)見光，不(bu)能(neng)透過紫(zi)外光，檢測(ce)波(bo)長(chang)小(xiao)於(yu) 340nm 務(wu)必(bi)使用UV 板(ban)）。

TAN 活力(li)單(dan)位的(de)計(ji)算(suan)：

用微(wei)量石英(ying)比(bi)色(se)皿(min)測(ce)定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式如(ru)下

標準條件下測(ce)定(ding)回(hui)歸(gui)方程為(wei) y = 0.0058x + 0.0044，R2 = 0.9994；x 為(wei)PG 含量（µmol/L），y 為(wei)吸(xi)光(guang)值。

1、按樣(yang)本體(ti)積計算(suan)

單(dan)位的(de)定(ding)義：40℃下每毫升粗酶(mei)液(ye)每分鐘(zhong)水解(jie)減少(shao) 0.01µmol 底物PG 所需要的酶量定義(yi)為(wei)壹(yi)個酶(mei)活單(dan)位。

TAN 活性(xing)(µmol/min/ml)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V 反(fan)總(zong)÷0.01÷V 樣(yang)÷T

=34.48×( ΔA-0.0044）

2、按照蛋(dan)白(bai)濃度(du)計(ji)算(suan)

單(dan)位的(de)定(ding)義：40℃下每毫克蛋白(bai)每分鐘(zhong)水解(jie)減少(shao) 0.01µmol 底物PG 所需要的酶量定義(yi)為(wei)壹(yi)個酶(mei)活單(dan)位(U)。

TAN 活性(xing)((µmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V 反(fan)總(zong)÷0.01÷(V 樣(yang)×Cpr)÷T

=34.48×(ΔA-0.0044）÷Cpr

3、按照樣(yang)本鮮(xian)重(zhong)計(ji)算(suan)

單(dan)位的(de)定(ding)義：40℃下每克樣(yang)品每分鐘(zhong)水解(jie)減少(shao) 0.01µmol 底物PG 所需要的酶量定義(yi)為(wei)壹(yi)個酶(mei)活單(dan)位(U)。

TAN 活性(xing)(µmol/min/g 鮮(xian)重(zhong))=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V 反(fan)總(zong)÷0.01÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)×W)÷T

=34.48×(ΔA-0.0044）÷W

V 反總(zong)：反應體系(xi)總(zong)體積，1ml； V 樣(yang)：加入樣(yang)本體(ti)積，0.05ml；V 樣(yang)總(zong)：加入提(ti)取(qu)液體積，1 ml；T：反應時間(jian)，10min；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本質(zhi)量，g。

用 96 孔(kong)板(ban)測(ce)定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式如(ru)下

標準條件下測(ce)定(ding)回(hui)歸(gui)方程為(wei) y = 0.0029x + 0.0044，R2 = 0.9994；x 為(wei)PG 含量（µmol/L），y 為(wei)吸(xi)光(guang)值。

1、按樣(yang)本體(ti)積計算(suan)

單(dan)位的(de)定(ding)義：40℃下每毫升粗酶(mei)液(ye)每分鐘(zhong)水解(jie)減少(shao) 0.01µmol 底物PG 所需要的酶量定義(yi)為(wei)壹(yi)個酶(mei)活單(dan)位(U)。

TAN 活性(xing)(µmol/min/ml)=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V 反(fan)總(zong)÷0.01÷V 樣(yang)÷T

=68.97×( ΔA-0.0044）

2、按照蛋(dan)白(bai)濃度(du)計(ji)算(suan)

單(dan)位的(de)定(ding)義：40℃下每毫克蛋白(bai)每分鐘(zhong)水解(jie)減少(shao)1µmol 底物PG 所需要的酶量定義(yi)為(wei)壹(yi)個酶(mei)活單(dan)位(U)。

TAN 活性(xing)(µmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V 反(fan)總(zong)÷0.01÷(V 樣(yang)×Cpr)÷T

=68.97×( ΔA-0.0044）÷Cpr

3、按照樣(yang)本鮮(xian)重(zhong)計(ji)算(suan)

單(dan)位的(de)定(ding)義：40℃下每克樣(yang)品每分鐘(zhong)水解(jie)減少(shao) 0.01µmol 底物PG 所需要的酶量定義(yi)為(wei)壹(yi)個酶(mei)活單(dan)位

(U)。

TAN 活性(xing)(µmol/min/g 鮮(xian)重(zhong))=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V 反(fan)總(zong)÷0.01÷(V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)×W)÷T

=68.97×( ΔA-0.0044）÷W

V 反總(zong)：反應體系(xi)總(zong)體積，1ml； V 樣(yang)：加入樣(yang)本體(ti)積，0.05ml；V 樣(yang)總(zong)：加入提(ti)取(qu)液體積，1 ml；T：反應時間(jian)，10min；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本質(zhi)量，g。

單(dan)寧酶(mei)試(shi)劑(ji)盒 氧化