類(lei)黃(huang)酮(tong)是植物(wu)次(ci)生(sheng)代(dai)謝(xie)產物(wu)，糖(tang)基化是類黃(huang)酮(tong)基本結(jie)構(gou)形成的(de)最(zui)主要(yao)的修(xiu)飾反應(ying)之(zhi)壹(yi)，提高了類(lei)黃(huang)酮(tong)苷(gan)元的化學(xue)穩(wen)定性，這壹過程(cheng)主要(yao)由類黃酮(tong)糖(tang)基轉移酶催化(hua)的，使(shi)類(lei)黃酮-OH 與(yu)UDPG 反(fan)應(ying)，是(shi)黃(huang)酮合(he)成(cheng)途(tu)徑(jing)中的(de)關鍵酶。
類黃(huang)酮糖(tang)基轉移酶試(shi)劑盒(he) 抗氧(yang)

類黃(huang)酮(tong)糖(tang)基轉移酶（UFGT）試(shi)劑盒(he)說(shuo)明書

HPLC 法(fa) 50T/48S

類黃(huang)酮(tong)糖(tang)基轉移酶試(shi)劑盒(he) 抗氧(yang)

正式測定前(qian)務必(bi)取 2-3 個預期差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的(de)樣(yang)本做預測定測(ce)定意(yi)義(yi)：

類黃(huang)酮(tong)是(shi)植(zhi)物次(ci)生(sheng)代(dai)謝(xie)產物(wu)，糖(tang)基化是類黃(huang)酮(tong)基本結(jie)構(gou)形成的(de)最(zui)主要(yao)的修(xiu)飾反應(ying)之(zhi)壹(yi)，提高了類(lei)黃(huang)酮(tong)苷(gan)元的化學(xue)穩(wen)定性，這壹過程(cheng)主要(yao)由類黃酮(tong)糖(tang)基轉移酶催化(hua)的，使(shi)類(lei)黃酮-OH 與UDPG 反應(ying)，是(shi)黃(huang)酮合(he)成(cheng)途(tu)徑(jing)中的(de)關鍵酶。

測定原理(li)：

類黃(huang)酮(tong)糖(tang)基轉移酶催化(hua)花(hua)青(qing)素(su)與(yu)尿(niao)苷(gan)二(er)磷酸(suan)葡萄(tao)糖(tang)反(fan)應(ying)產生(sheng)花(hua)青(qing)苷，主要(yao)以矢(shi)車(che)菊(ju)素(su) 3-葡萄(tao)糖(tang)苷(gan)（C3G）形式存(cun)在(zai)，用 HPLC 檢(jian)測產物(wu)可(ke)反映(ying)類(lei)黃(huang)酮(tong)糖(tang)基轉移酶的酶活性。

組(zu)成(cheng)：

試(shi)劑壹(yi)：粉(fen)劑×1 瓶(ping)，4℃避光(guang)保存(cun)。臨(lin)用前加(jia)全(quan)部(bu)試(shi)劑三(san)溶(rong)解(jie)。

自備儀器(qi)和(he)用(yong)品：

天平(ping)、研(yan)砵、離(li)心機(ji)、恒(heng)溫水(shui)浴(yu)鍋、100 目(mu)篩(shai)、高(gao)校(xiao)液相(xiang)色譜(pu)、針頭(tou)過濾(lv)器(qi)（水系、0.22μm）、濾(lv)膜（水(shui)系、0.45μm）、耐(nai)水C18 柱(zhu)（4.6×250mm）、樣(yang)品瓶、甲(jia)酸(suan)、甲(jia)醇(chun)（色譜(pu)級）、超純水

酶液提取:

組(zu)織(zhi)：按照(zhao)組(zu)織(zhi)質量（g）：提取液體積(ml)為 1：2~5 的比(bi)例(li)（建(jian)議稱取約(yue) 0.5g 組(zu)織(zhi)，加入(ru) 1ml 提取液），進(jin)行冰(bing)浴(yu)勻漿。10000g ，4℃離(li)心 10min，取上清，置冰(bing)上待(dai)測。

實(shi)驗(yan)前的準備(bei)工(gong)作：

1、檢(jian)測產物(wu)制(zhi)備

2、將 500 ml 超純水和(he) 500 ml 甲(jia)醇(chun)用 0.45 μm 的(de)濾(lv)膜抽(chou)濾(lv)，以除(chu)去(qu)溶(rong)劑中(zhong)的(de)雜質，防止堵(du)塞色(se)譜(pu)柱(zhu)。（註：蒸餾水(shui)用水系濾(lv)膜抽(chou)濾(lv)，甲(jia)醇(chun)用有機(ji)系濾(lv)膜抽(chou)濾(lv)）。

3、流動(dong)相(xiang)的(de)配制(zhi)：流(liu)動相(xiang) A 為 1.6%甲(jia)酸(suan)水溶(rong)液； 流(liu)動相(xiang)B 為 1.6%甲(jia)酸(suan)甲(jia)醇(chun)溶(rong)液。

4、將配好的流(liu)動(dong)相超聲(sheng) 30 分鐘，以(yi)脫去(qu)溶(rong)劑中(zhong)的(de)氣(qi)泡(pao)，防止堵(du)塞色(se)譜(pu)柱(zhu)。

5、標準品(pin)的(de)配制(zhi)：

在(zai)標準品(pin)中(zhong)加(jia)入(ru) 1ml 甲(jia)醇(chun)，配成(cheng) 5μmol /ml 母液，將母液用(yong)甲(jia)醇(chun)分別稀(xi)釋成 2μmol/ml ，1μmol/ml 、0.5μmol/ml 、0.25μmol/ml、0.125μmol/ml 的(de)標(biao)準品(pin)溶(rong)液。針頭(tou)式過濾(lv)器(qi)過濾(lv)後待(dai)測。

測定操(cao)作表：

開啟電腦、檢(jian)測器(qi)和(he)泵(beng)，安(an)裝上色(se)譜(pu)柱(zhu)，打開(kai)軟件(jian)，在(zai)方法(fa)組(zu)中(zhong)設(she)置進(jin)樣(yang)量 10 μl，梯(ti)度(du)洗(xi)脫為 0~5min，85%A+15%B; 5~10min，85%A+15%B; 10~30min，80%A+20%B; 30~30.1min， 60%A+40%B; 30.1~40min，0%A+100%B。流速 1ml/min，柱(zhu)溫 30℃，走(zou)樣(yang)時間(jian)為 50min，檢(jian)測波(bo)長(chang) 530nm，設(she)置完(wan)畢保(bao)存(cun)方法(fa)組(zu)。

初(chu)始設(she)置流(liu)動(dong)相(xiang) A=85%，流動相B=15%，流速 1 ml/min，待(dai)基線穩(wen)定後(hou)開(kai)始(shi)加樣(yang)。

加入(ru)標準品(pin) 10 μl，在(zai) 50min 內(nei)可(ke)分離(li)C3G，C3G 的保(bao)留時間(jian)在(zai) 25min 左右(you)，（柱(zhu)子不同，保(bao)留時間(jian)有差(cha)異(yi)），計(ji)算(suan)不同濃(nong)度(du)的(de)C3G 標(biao)準品(pin)的(de)峰(feng)面(mian)積。

加入(ru)樣(yang)品 10 μl，在(zai)相應(ying)保(bao)留(liu)時間(jian)處(chu)檢(jian)測C3G 的(de)峰面(mian)積。

酶活計(ji)算(suan)：

以標(biao)準品(pin)濃(nong)度(du)（μmol/ml）為橫坐(zuo)標，峰(feng)面(mian)積為縱坐(zuo)標計(ji)算(suan) C3G 標準曲線。將樣(yang)品峰面(mian)積代(dai)入(ru)標準曲線，計(ji)算(suan)樣(yang)品C3G 含量。

酶活單位(wei)定義(yi)：

每毫(hao)克(ke)組(zu)織(zhi)蛋白(bai)每分鐘催(cui)化(hua)反應(ying)產生(sheng) 1μmolC3G 定義(yi)為壹個酶活單位(wei)。

UFGT 活性（μmol/min/mg prot）= C×V 反(fan)總(zong)÷（V 樣(yang)×Cpr）÷ T=0.117×C÷Cpr

每克(ke)組(zu)織(zhi)每分鐘催(cui)化(hua)反應(ying)產生(sheng) 1μmolC3G 定義(yi)為壹個酶活單位(wei)。

UFGT 活性（μmol/min/g 鮮(xian)重(zhong)）= C×V 反總÷（V 樣(yang)×W÷V 樣(yang)總）÷ T=0.117×C÷W

C：C3G 濃度(du)，μmol/ml ；V 反(fan)總(zong)：反應(ying)總(zong)體積，0.35ml；V 樣(yang)：加入(ru)樣(yang)本量，0.1ml，V 樣(yang)總：加入(ru)提取液體積，1ml，Cpr：蛋(dan)白(bai)含量，mg/ml；W：樣(yang)本質量，g，T：反應(ying)時間(jian)，min

註意(yi)事項：

1、流速由小到大(da)調節(jie)，避免(mian)柱(zhu)壓過大(da)。

2、使(shi)用(yong)完畢時，先用(yong) 50%的(de)甲(jia)醇(chun)水溶(rong)液洗(xi)色譜(pu)柱(zhu) 45min，再(zai)用(yong)純(chun)甲(jia)醇(chun)沖洗(xi)色譜(pu)柱(zhu) 30min。

3、標準品(pin)的(de)稀(xi)釋倍(bei)數要(yao)根據(ju)樣(yang)品中C3G 濃(nong)度(du)確定，樣(yang)品中C3G 的(de)峰(feng)面(mian)積必(bi)須(xu)落在(zai)不同濃度(du)的(de)C3G 標(biao)準品(pin)的(de)峰(feng)面(mian)積之(zhi)內(nei)，該標(biao)準品(pin)稀(xi)釋倍(bei)數只(zhi)是(shi)壹(yi)個參(can)考(kao)。

類黃(huang)酮(tong)糖(tang)基轉移酶試(shi)劑盒(he) 抗氧(yang)