LPO 在(zai)酸性條(tiao)件下加(jia)熱(re)，產(chan)生(sheng)小(xiao)分子終(zhong)產(chan)物MDA，MDA 與硫代(dai)巴(ba)bi妥酸(thiobarbituric acid，TBA)縮(suo)合(he)，生成(cheng)紅(hong)色(se)產(chan)物，在 535nm 有(you)最大吸(xi)收峰(feng)。
脂質(zhi)過氧化物含量(liang)試(shi)劑盒 抗氧(yang)

脂質(zhi)過氧化物（lipid peroxidation，LPO）含量(liang)試(shi)劑盒說(shuo)明書(shu)

微量法 100T/96S

脂質(zhi)過氧化物含量(liang)試(shi)劑盒 抗氧(yang)

正(zheng)式(shi)測(ce)定前務(wu)必取 2-3 個(ge)預期(qi)差異較(jiao)大的樣(yang)本(ben)做預測定測定意義(yi)：

脂質(zhi)過氧化是動植(zhi)物體(ti)內活(huo)性氧(yang)(ROS)氧(yang)化生(sheng)物膜(mo)的過程(cheng)，脂質(zhi)過氧化物（LPO）是脂質(zhi)過氧化過程(cheng)的(de)產(chan)物，即ROS 與(yu)生物膜(mo)的磷(lin)脂、酶和膜(mo)受體(ti)相(xiang)關(guan)的多(duo)不(bu)飽和脂肪酸的側鏈(lian)及(ji)核(he)酸等大分子物質(zhi)起脂質(zhi)過氧化反(fan)應(ying)形(xing)成(cheng)LPO，使細胞膜(mo)的流(liu)動性(xing)和通透(tou)性(xing)發生改(gai)變,最終(zhong)導(dao)致細(xi)胞結(jie)構(gou)和功能(neng)的改(gai)變。因此(ci)，LPO常被作為機體(ti)氧(yang)化應(ying)激(ji)的壹種(zhong)指(zhi)標，與某(mou)些(xie)疾病的病理過程(cheng)，如腫(zhong)瘤、化學(xue)中毒(du)、感(gan)染、炎(yan) 癥、自(zi)身(shen)免疫(yi)疾病、動脈(mai)粥樣(yang)硬化（AS）及(ji)心腦(nao)血管疾病，以及衰(shuai)老等(deng)生理(li)過程(cheng)密切(qie)相(xiang)關(guan)。

測(ce)定原理：

LPO 在(zai)酸性條(tiao)件下加(jia)熱(re)，產(chan)生(sheng)小(xiao)分子終(zhong)產(chan)物MDA，MDA 與(yu)硫代(dai)巴(ba)bi妥酸(thiobarbituric acid，TBA)縮(suo)合(he)，生成(cheng)紅(hong)色(se)產(chan)物，在 535nm 有(you)最大吸(xi)收峰(feng)。

組(zu)成(cheng)：

臨(lin)用(yong)前(qian)註(zhu)意(yi)試劑(ji)二(er)是否wan全(quan)溶(rong)解，如未(wei)溶解(jie)，可(ke)以 70℃-90℃加(jia)熱(re)，並振(zhen)蕩以促(cu)進溶(rong)解。

自(zi)備儀器和用(yong)品(pin)：

酶標(biao)儀(yi)、水(shui)浴(yu)鍋、臺式(shi)離(li)心(xin)機(ji)、可調(tiao)式(shi)移液(ye)器、96 孔(kong)板、研(yan)缽(bo)、冰和蒸(zheng)餾水(shui)。

LPO 提(ti)取：

1、細(xi)菌、細胞(bao)或(huo)組(zu)織(zhi)樣(yang)品(pin)的制(zhi)備：

細(xi)菌或(huo)培養(yang)細(xi)胞：先(xian)收集細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)到離(li)心(xin)管內，離(li)心後(hou)棄(qi)上(shang)清；按(an)照細菌(jun)或(huo)細(xi)胞(bao)數量（104 個(ge)）：提取(qu)液體(ti)積（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比(bi)例(li)（建議 500 萬細菌或(huo)細(xi)胞(bao)加(jia)入 1ml 提取(qu)液(ye)），超聲波破碎(sui)細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞(bao)（冰浴，功率 20％或(huo) 200W，超(chao)聲 3s，間(jian)隔 10s，重(zhong)復(fu) 30 次）；8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上(shang)清，置冰上(shang)待測(ce)。

組(zu)織：按照組織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取液體(ti)積(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比(bi)例(li)（建議稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組織，加(jia)入 1ml 提取(qu)液(ye)），進行(xing)冰浴勻漿。8000g 4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清，置冰上(shang)待測(ce)。

2、血(xue)清（漿(jiang)）樣(yang)品(pin)：直接檢(jian)測。

測(ce)定步驟(zhou)：

1、酶標(biao)儀(yi)預熱(re) 30min 以上(shang)，調(tiao)節波長到(dao) 535 nm。

2、在(zai)EP 管中依(yi)次加(jia)入如下(xia)試(shi)劑

立(li)即混(hun)勻，95℃水(shui)浴(yu) 40min 後，流(liu)水(shui)冷(leng)卻。3000g 離心(xin) 10min，吸(xi)取 200µl 上(shang)清加(jia)入 96 孔板，測定 535nm

下(xia)各(ge)管(guan)吸(xi)光(guang)值，記(ji)作A 測定和A 空白。ΔA=A 測定-A 空白。

LPO 含(han)量計算(suan)：

用(yong) 96 孔(kong)板測定的計算(suan)公式(shi)如(ru)下(xia)

y = 0.5723x - 0.0076，R2 = 0.9997，x 為(wei)標準品濃(nong)度μmol/ml，y 為吸(xi)光(guang)度。

1、血(xue)清（漿(jiang)）中 LPO 含(han)量的計算(suan)：

LPO 含(han)量(nmol/ ml)=（ΔA+0.0076）÷0.5723×V 標÷V 樣(yang)×1000

=1747.3×（ΔA+0.0076）

2、細(xi)菌、細胞(bao)或(huo)動(dong)物組織(zhi)中(zhong) LPO 含量計(ji)算(suan)

按(an)照蛋(dan)白濃度計算(suan)

LPO 含(han)量(nmol/ mg prot)=（ΔA+0.0076）÷0.5723×V 標÷(Cpr×V 樣(yang))×1000

=1747.3×（ΔA+0.0076）÷Cpr

需(xu)要另(ling)外(wai)測(ce)定，建議使用(yong)本(ben)公司(si)BCA 蛋(dan)白質(zhi)含(han)量(liang)測定試劑盒。

按(an)照樣(yang)品(pin)質(zhi)量(liang)計(ji)算(suan)

LPO 含(han)量(nmol/g 鮮重(zhong))=（ΔA+0.0076）÷0.5723×V 標÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)×1000

=1747.3×（ΔA+0.0076）÷W

(3 ) 按(an)照細菌(jun)或(huo)細(xi)胞(bao)密度計算(suan)：

LPO 含(han)量(nmol/104)=（ΔA+0.0076）÷0.5723×V 標÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)×1000

=3.495×（ΔA+0.0076）

V 標(biao)：標準曲(qu)線中加(jia)入標品(pin)體(ti)積，0.03ml；V 樣(yang)：加(jia)入樣(yang)本(ben)體(ti)積，0.03 ml；V 樣(yang)總：加(jia)入提取(qu)液(ye)體(ti)積，1 ml； Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)，g；500：細(xi)胞或(huo)細(xi)菌(jun)總數，500 萬；1000，μmol 到(dao)nmol 換(huan)算(suan)系數。

脂質(zhi)過氧化物含量(liang)試(shi)劑盒 抗氧(yang)