GOGAT 分(fen)布於植物(wu)中(zhong)，和谷an酰(xian)胺(an)合成(cheng)酶共同構(gou)成(cheng) GS/GOGAT 循環(huan)，參與(yu)氨同化的調控(kong)。
谷an酸(suan)合成酶(mei)試(shi)劑盒 氮(dan)代(dai)謝(xie)

谷an酸(suan)合成酶(mei)（Glutamate synthase，GOGAT）試(shi)劑盒說(shuo)明書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度法(fa) 50 管(guan)/48 樣(yang)

谷an酸(suan)合成酶(mei)試(shi)劑盒 氮(dan)代(dai)謝(xie)

正式測定前(qian)務必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預期(qi)差異較大(da)的樣(yang)本(ben)做(zuo)預(yu)測定測定意(yi)義：

GOGAT 分(fen)布於植物(wu)中(zhong)，和谷an酰(xian)胺(an)合成(cheng)酶共同構(gou)成(cheng) GS/GOGAT 循環(huan)，參與(yu)氨同化的調控(kong)。

測定原理(li)：

GOGAT 催化谷an酰(xian)胺(an)的氨基(ji)轉移(yi)到(dao)α-酮(tong)戊二酸(suan)，形成兩分(fen)子(zi)的谷an酸(suan)；同時 NADH 氧(yang)化生(sheng)成NAD⁺， 340nm 吸(xi)光(guang)度的下降(jiang)速(su)率可(ke)以(yi)反映 GOGAT 活(huo)性(xing)大(da)小(xiao)。

組(zu)成(cheng)：

自備儀(yi)器(qi)和用(yong)品(pin)：

紫外(wai)分(fen)光(guang)光(guang)度計、臺式(shi)離(li)心機(ji)、水(shui)浴(yu)鍋、可(ke)調式移(yi)液器(qi)、1ml 石(shi)英比(bi)色(se)皿、研(yan)缽、冰和蒸餾(liu)水。

粗(cu)酶(mei)液提(ti)取(qu)：

細菌(jun)或培(pei)養細胞(bao)：先(xian)收(shou)集(ji)細菌(jun)或細胞(bao)到(dao)離(li)心管(guan)內，離(li)心後棄上清(qing)；按(an)照(zhao)細菌(jun)或細胞(bao)數量（104 個(ge)）：提(ti)取(qu)液體積（ml）為 500~1000：1 的比(bi)例（建議 500 萬(wan)細菌(jun)或細胞(bao)加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液），超(chao)聲波破(po)碎細菌(jun)或細胞(bao)（冰(bing)浴(yu)，功率 20％或 200W，超(chao)聲 3s，間隔(ge) 10s，重(zhong)復 30 次）；8000g 4℃離(li)心 10min，取上清(qing)，置(zhi)冰上待(dai)測。

組織(zhi)：按(an)照(zhao)組(zu)織(zhi)質量（g）：提(ti)取(qu)液體積(ml)為 1：5~10 的比(bi)例（建議稱取(qu)約 0.1g 組織(zhi)，加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取(qu)液），進行(xing)冰浴(yu)勻(yun)漿。8000g 4℃離(li)心 10min，取上清(qing)，置(zhi)冰上待(dai)測。

測定步(bu)驟：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計預熱 30min 以(yi)上，調節波長(chang)至(zhi) 340nm，蒸餾(liu)水調零(ling)。

2、樣(yang)本(ben)測定

工(gong)作液的配(pei)制：在試(shi)劑二中(zhong)加(jia)入(ru) 25ml 試(shi)劑壹充分(fen)溶(rong)解(jie)混(hun)勻(yun)，置(zhi)於 37℃（哺乳動(dong)物(wu)）或 25℃（其它(ta)物(wu)種）水(shui)浴(yu) 5min；現配(pei)現用(yong)（配(pei)好後 3h 內用(yong)完(wan)）；

取(qu) 0.1ml 樣(yang)本(ben)和 0.9ml 工作液於 1ml 比(bi)色(se)皿中(zhong)，混勻(yun)，加(jia)工作液的同時開(kai)始(shi)計時，在 340 nm 波長(chang)下記錄 20 秒(miao)時的初始吸(xi)光(guang)度 A1 和 5 分(fen) 20 秒(miao)時的吸(xi)光(guang)度A2，計算ΔA=A1-A2。

GOGAT 活(huo)性(xing)計算：

按(an)樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度計算：

單(dan)位(wei)的定義：每(mei)mg 組(zu)織(zhi)蛋(dan)白(bai)每(mei)分(fen)鐘消(xiao)耗(hao) 1 nmol 的NADH 定義為壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。

GOGAT（nmol /min/mg prot）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V×樣(yang)Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr

按(an)樣(yang)本(ben)鮮重(zhong)計算：

單(dan)位(wei)的定義：每(mei)g 組(zu)織(zhi)每(mei)分(fen)鐘消(xiao)耗(hao) 1 nmol NADH 定義為壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。

GOGAT（nmol /min /g 鮮重(zhong)）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=321×ΔA÷W

按(an)細菌(jun)或細胞(bao)密(mi)度(du)計算：

單(dan)位(wei)的定義：每(mei) 1 萬(wan)個(ge)細菌(jun)或細胞(bao)每(mei)分(fen)鐘消(xiao)耗(hao) 1 nmol NADH 定義為壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。

GOGAT（nmol /min /104 cell）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=0.642×ΔA

V 反總(zong)：反應(ying)體系總(zong)體積，1×10-3 L；ε：NADH 摩(mo)爾消(xiao)光(guang)系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比(bi)色(se)皿光(guang)徑，1cm； V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣(yang)本(ben)體積，0.1 ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液體積，1 ml；T：反應時間，5 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)質濃(nong)度，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量，g；500：細菌(jun)或細胞(bao)總(zong)數，500 萬(wan)。

谷an酸(suan)合成酶(mei)試(shi)劑盒 氮(dan)代(dai)謝(xie)