GDH（EC 1.4.1.2）廣(guang)泛分布(bu)於植(zhi)物中(zhong)，和谷(gu)an酸合成(cheng)酶(mei)（GOGAT）共(gong)同參與谷an酸的合成(cheng)，在氨(an)同化和轉化成(cheng)有(you)機氮化合物(wu)的(de)代(dai)謝(xie)中(zhong)起重要作用(yong)。
谷an酸脫(tuo)氫(qing)酶(mei)試劑盒(he) 氮(dan)代(dai)謝(xie)

谷an酸脫(tuo)氫(qing)酶(mei)（Glutamate dehydrogenase，GDH）試劑盒(he)說明書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法 50 管/48 樣

谷(gu)an酸脫(tuo)氫(qing)酶(mei)試劑盒(he) 氮(dan)代(dai)謝(xie)

正(zheng)式測(ce)定(ding)前(qian)務必取 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差異(yi)較(jiao)大的樣(yang)本(ben)做(zuo)預(yu)測定測(ce)定意(yi)義(yi)：

GDH（EC 1.4.1.2）廣(guang)泛(fan)分布(bu)於植(zhi)物中(zhong)，和谷(gu)an酸合成(cheng)酶(mei)（GOGAT）共(gong)同參與谷an酸的合成(cheng)，在氨(an)同化和轉化成(cheng)有(you)機氮化合物(wu)的(de)代(dai)謝(xie)中(zhong)起重要作用(yong)。

測定原理：

GDH 催(cui)化 NH4⁺ 、α-酮戊二(er)酸和 NADH，生(sheng)成(cheng)谷an酸和 NAD⁺，引(yin)起 340nm 吸光(guang)度(du)下(xia)降。通過(guo)測定 340nm 吸光(guang)度(du)的(de)下(xia)降速(su)率，計算(suan) GDH 活性(xing)。

組(zu)成(cheng)：

自(zi)備(bei)儀(yi)器和用(yong)品(pin)：

紫外(wai)分光(guang)光(guang)度(du)計、臺(tai)式離心機、水浴(yu)鍋、移液(ye)器(qi)、1ml 石(shi)英(ying)比色皿、研缽(bo)、冰(bing)和蒸(zheng)餾水(shui)。

粗酶(mei)液(ye)提(ti)取：

細(xi)菌(jun)或培養(yang)細胞(bao)：先(xian)收集細菌或細(xi)胞(bao)到離心管內，離心後棄(qi)上清(qing)；按照(zhao)細菌(jun)或細胞數量(liang)（104 個(ge)）：提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比(bi)例(li)（建議 500 萬(wan)細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)加入(ru) 1ml 提(ti)取液(ye)），超(chao)聲(sheng)波(bo)破碎細菌(jun)或細(xi)胞(bao)（冰(bing)浴，功(gong)率 20％或 200W，超(chao)聲 3s，間隔(ge) 10s，重復(fu) 30 次(ci)）；8000g 4℃離心 10min，取上清(qing)，置冰(bing)上待測。

組織：按(an)照(zhao)組織質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比(bi)例(li)（建議稱(cheng)取約(yue) 0.1g 組(zu)織，加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取液(ye)），進(jin)行(xing)冰(bing)浴勻(yun)漿。8000g 4℃離心 10min，取上清(qing)，置冰(bing)上待測。

血清(qing)（漿）樣品(pin)：直(zhi)接(jie)檢測(ce)。

測(ce)定步(bu)驟：

1、分光(guang)光(guang)度(du)計預(yu)熱 30min 以上，調(tiao)節波(bo)長至 340nm，蒸(zheng)餾水(shui)調(tiao)零。

2、樣(yang)本(ben)測(ce)定

在(zai)試劑二(er)中(zhong)加入 25ml 試(shi)劑壹充分溶(rong)解混(hun)勻(yun)，置(zhi)於 37℃（哺(bu)乳動(dong)物）或(huo) 25℃（其它物(wu)種）水浴(yu) 5min；

現配(pei)現用(yong)（配好(hao)後 12h 內用(yong)完）；

取 0.05ml 樣(yang)本(ben)和 0.95ml 工作液(ye)於 1ml 比(bi)色皿中(zhong)，混勻(yun)，加(jia)工作液(ye)的(de)同時開(kai)始(shi)計時(shi)，在 340 nm 波(bo)長下(xia)記(ji)錄 20 秒時的(de)初(chu)始(shi)吸光(guang)度(du)A1 和 5 分(fen) 20 秒時的(de)吸光(guang)度(du)A2，計算(suan)ΔA=A1-A2。

GDH 活性(xing)計算(suan)：

1、血(xue)清(qing)（漿）中(zhong) GDH 活力的(de)計算(suan):

單位(wei)的定(ding)義(yi)：每(mei)毫(hao)升血清(qing)（漿）每分鐘(zhong)消耗 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力單位(wei)。

GDH（nmol/min/ml）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=643×ΔA 2、組(zu)織、細(xi)菌(jun)或細(xi)胞中(zhong) GDH 活力的(de)計算(suan):

按(an)樣(yang)本(ben)蛋(dan)白濃(nong)度(du)計算(suan)：

單位(wei)的定(ding)義(yi)：每(mei)mg 組(zu)織蛋(dan)白(bai)每分(fen)鐘(zhong)消耗 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力單位(wei)。

GDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

按(an)樣(yang)本(ben)鮮(xian)重計算(suan)：

單位(wei)的定(ding)義(yi)：每(mei)g 組(zu)織每(mei)分(fen)鐘(zhong)消耗 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力單位(wei)。

GDH（nmol/min /g 鮮(xian)重）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=643×ΔA÷W

按細(xi)菌(jun)或(huo)細胞密(mi)度(du)計算(suan)：

單位(wei)的定(ding)義(yi)：每(mei) 1 萬(wan)個(ge)細菌或細胞每分鐘(zhong)消耗 1 nmol NADH 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力單位(wei)。

GDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣÷V 樣(yang)總(zong)×500) ÷T=1.286×ΔA

V 反總(zong)：反應體(ti)系總(zong)體(ti)積(ji)，1×10-3 L；ε：NADH 摩(mo)爾(er)消光(guang)系數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光(guang)徑，1cm； V 樣(yang)：加入(ru)樣(yang)本(ben)體(ti)積(ji)，0.05 ml；V 樣(yang)總(zong)：加入(ru)提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)，1 ml；T：反(fan)應時間，5 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)，g；500：細菌(jun)或細(xi)胞(bao)總(zong)數，500 萬(wan)。

谷(gu)an酸脫(tuo)氫(qing)酶(mei)試劑盒(he) 氮(dan)代(dai)謝(xie)