GLS（EC 3.5.1.1）是酰(xian)胺基水(shui)解(jie)酶(mei)，催化(hua)天dong酰胺水(shui)解(jie)成谷an酸氨(an)，在(zai)氮(dan)素(su)代(dai)謝(xie)中(zhong)具(ju)有(you)重(zhong)要(yao)調控作(zuo)用，尤(you)其(qi)是調節遊(you)離(li)氨(an)含量和尿(niao)素代謝(xie)。
谷an酰胺酶(mei)活(huo)性測(ce)定試(shi)劑(ji)盒(he) 氮(dan)代(dai)謝(xie)

谷an酰胺酶(mei)(glutaminase, GLS) 活(huo)性測(ce)定試(shi)劑(ji)盒(he)說明(ming)書

分(fen)光(guang)光(guang)度法 50 管(guan)/48 樣

谷an酰胺酶(mei)活(huo)性測(ce)定試(shi)劑(ji)盒(he) 氮(dan)代(dai)謝(xie)

正式(shi)測(ce)定前務(wu)必(bi)取 2-3 個預期差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的樣本做(zuo)預(yu)測(ce)定測(ce)定意義(yi)：

GLS（EC 3.5.1.1）是(shi)酰(xian)胺基水(shui)解(jie)酶(mei)，催化(hua)天dong酰胺水(shui)解(jie)成谷an酸氨(an)，在(zai)氮(dan)素(su)代(dai)謝(xie)中(zhong)具(ju)有(you)重(zhong)要(yao)調控作(zuo)用，尤(you)其(qi)是調節遊(you)離(li)氨(an)含量和尿(niao)素代謝(xie)。

測(ce)定原理(li)：

GLS 催化(hua)谷an酰胺水(shui)解(jie)成 L-谷an酸氨(an)，利(li)用奈氏(shi)試(shi)劑(ji)檢測(ce)氨(an)增加(jia)的速率(lv)，即(ji)可(ke)計(ji)算(suan)其(qi)酶(mei)活(huo)性。

組成(cheng)：

自(zi)備儀器(qi)和用品(pin)：

臺(tai)式(shi)離(li)心機、可(ke)見分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)、水(shui)浴(yu)鍋、1ml 玻璃比(bi)色(se)皿(min)、可調式(shi)移(yi)液槍(qiang)、研缽(bo)、冰(bing)和(he)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

粗(cu)酶(mei)液(ye)提取：

1、細(xi)菌、細(xi)胞(bao)或(huo)組織(zhi)樣(yang)品(pin)的制備：

細(xi)菌或(huo)培(pei)養(yang)細胞(bao)：先(xian)收(shou)集(ji)細(xi)菌或(huo)細胞(bao)到(dao)離(li)心管(guan)內，離心後棄(qi)上(shang)清；按照(zhao)細(xi)菌或(huo)細胞(bao)數(shu)量

（104 個）：試(shi)劑(ji)壹(yi)體積(ji)（ml）為 500~1000：1 的比(bi)例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬細(xi)菌或(huo)細胞(bao)加(jia)入 1ml 試(shi)劑(ji)壹(yi)），超(chao)聲(sheng)波(bo)破碎細菌或(huo)細胞(bao)（冰(bing)浴(yu)，功(gong)率(lv) 20％或 200W，超(chao)聲(sheng) 3s，間(jian)隔(ge) 10s，重(zhong)復(fu) 30 次）；

8000g4℃離(li)心 10min，取上(shang)清，置冰(bing)上(shang)待(dai)測(ce)。

組織(zhi)：按照(zhao)組織(zhi)質(zhi)量（g）：試(shi)劑(ji)壹(yi)體積(ji)(ml)為 1：5~10 的比(bi)例(li)（建(jian)議(yi)稱取約 0.1g組織(zhi)，加(jia)入 1ml 試(shi)劑(ji)壹(yi)），進行冰(bing)浴(yu)勻漿(jiang)。8000g 4℃離(li)心 10min，取上(shang)清，置冰(bing)上(shang)待(dai)測(ce)。

2、血(xue)清(qing)（漿(jiang)）樣品(pin)：直接(jie)檢測(ce)。

測(ce)定步驟(zhou)：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)預熱(re) 30min 以(yi)上(shang)，調節波(bo)長(chang)至(zhi) 420nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調零。

2、樣(yang)品(pin)測(ce)定（在(zai) EP 中(zhong)加(jia)入下(xia)列試(shi)劑(ji)）：

混(hun)勻，37℃水(shui)浴(yu) 1 小(xiao)時

混(hun)勻，8000 g，25℃離(li)心 10 min；取上(shang)清液，在(zai)EP 管(guan)中(zhong)加(jia)入下(xia)列試(shi)劑(ji)

混(hun)勻，室(shi)溫(wen)靜(jing)置 15min，420nm 處讀取吸光(guang)值A，計(ji)算(suan)ΔA=A 測(ce)定管(guan)-A 對照(zhao)管(guan)。對照(zhao)管(guan)只(zhi)要(yao)做(zuo)壹(yi)管(guan)。

註(zhu)意：

1、試(shi)劑(ji)六如出現沈澱，靜(jing)置後取上(shang)清使用。

2、ΔA（A 測(ce)定管(guan)-A 對照(zhao)管(guan)）若出(chu)現負(fu)值，可能是酶(mei)活(huo)性較(jiao)低(di)，可(ke)將(jiang)反應(ying)時(shi)間(jian) 1h 延(yan)長(chang)到 2h，相應的在(zai)計(ji)算(suan)公(gong)式(shi)中(zhong)除以(yi) 2。

酶(mei)活(huo)性計(ji)算(suan)：

標(biao)準(zhun)條(tiao)件(jian)下(xia)測(ce)定的回(hui)歸方程為y =3.8488x +0.0057，R2 = 0.9983；x 為標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)（μmol/ml），y 為吸光(guang)值A。

1、血(xue)清(qing)（漿(jiang)）GLS 活(huo)性

單位(wei)定(ding)義(yi)：每ml 血(xue)清（漿(jiang)）每min 催化(hua)谷an酰胺生成 1nmol 氨(an)定義(yi)為壹個酶(mei)活(huo)力(li)單位(wei)。GLS（nmol /min/ml）＝ (ΔA-0.0057) ÷3.8488×V 反總(zong)÷V 樣(yang)÷T×1000=181.8×(ΔA -0.0057)

2、組織(zhi)、細(xi)菌或(huo)細胞(bao) GLS 活(huo)性

按樣本蛋白濃(nong)度(du)計(ji)算(suan)：

單位(wei)定(ding)義(yi)：每mg 蛋白質(zhi)每(mei)min 催化(hua)谷an酰胺生成 1nmol 氨(an)定義(yi)為壹個酶(mei)活(huo)力(li)單位(wei)。

GLS（nmol /min /mg prot）＝ (ΔA-0.0057) ÷3.8488×V 反總(zong)÷(V 樣(yang)×Cpr)÷T×1000=181.8×(ΔA -0.0057)÷Cpr

按樣本鮮(xian)重(zhong)計(ji)算(suan)：

單位(wei)定(ding)義(yi)：每g 組織(zhi)每(mei)min 催化(hua)谷an酰胺生成 1nmol 氨(an)定義(yi)為壹個酶(mei)活(huo)力(li)單位(wei)。

GLS（nmol/min/g 鮮(xian)重(zhong)）＝(ΔA-0.0057)÷3.8488×V 反總(zong)÷(W×V 樣(yang)÷V 樣總)÷T×1000

=181.8×(ΔA -0.0057)÷W

按細菌或(huo)細胞(bao)密度(du)計(ji)算(suan)

單位(wei)定(ding)義(yi)：每 1 萬個細菌或(huo)細胞(bao)每(mei)min 催化(hua)谷an酰胺生成 1nmol 氨(an)定義(yi)為壹個酶(mei)活(huo)力(li)單位(wei)。GLS

（nmol/min/104 cell）＝(ΔA-0.0057) ÷3.8488×V 反總(zong)÷(500× V 樣(yang)÷V 樣總)÷T×1000

=0.3637×(ΔA-0.0057)

V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入提(ti)取液體積，1 ml；T：反應(ying)時(shi)間(jian)，60min；V 反總(zong)：反應(ying)體(ti)系總體積(ji)，1.05ml；V 樣(yang)：加(jia)入反應(ying)體(ti)系中(zhong)樣(yang)本體積(ji)，0.025ml；Cpr：樣本蛋白質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或(huo)細胞(bao)總(zong)數(shu)， 500 萬; 1000，μmol 到(dao)nmol 換(huan)算(suan)系(xi)數(shu)。

谷an酰胺酶(mei)活(huo)性測(ce)定試(shi)劑(ji)盒(he) 氮(dan)代(dai)謝(xie)