UE 能(neng)夠(gou)水(shui)解尿(niao)素(su)，產生(sheng)氨和(he)碳酸。UE 活性(xing)與有(you)機物質(zhi)含(han)量(liang)、全(quan)氮(dan)和(he)速(su)效(xiao)氮(dan)含(han)量(liang)呈(cheng)正(zheng)相(xiang)關(guan)，反(fan)應(ying)了氮(dan)素(su)狀況(kuang)。
脲(niao)酶(mei)Urease UE測(ce)定(ding)試(shi)劑盒(he) 氮(dan)代謝

脲(niao)酶(mei)（Urease， UE）測(ce)定試劑盒(he)說(shuo)明(ming)書

分光光度法(fa) 50 管(guan)/24 樣(yang)

脲(niao)酶(mei)Urease UE測(ce)定(ding)試(shi)劑盒(he) 氮(dan)代謝

正(zheng)式測(ce)定前務(wu)必取 2-3 個(ge)預期(qi)差異(yi)較(jiao)大(da)的(de)樣(yang)本(ben)做(zuo)預測(ce)定測(ce)定意義(yi)：

UE 能(neng)夠(gou)水(shui)解尿(niao)素(su)，產生(sheng)氨和(he)碳酸。UE 活性(xing)與有(you)機物質(zhi)含(han)量(liang)、全(quan)氮(dan)和(he)速(su)效(xiao)氮(dan)含(han)量(liang)呈(cheng)正(zheng)相(xiang)關(guan)，反(fan)應(ying)了氮(dan)素(su)狀況(kuang)。

測(ce)定原理：

利(li)用靛(dian)酚(fen)藍(lan)比(bi)色(se)法(fa)測(ce)定(ding)脲(niao)酶(mei)水(shui)解尿(niao)素(su)產生(sheng)的(de) NH3-N。

組(zu)成：

試(shi)劑壹：粉劑×1 瓶(ping)，臨(lin)用前加(jia)入(ru) 5ml 蒸餾水(shui)，充分溶解待(dai)用，4℃保存(cun)；用不(bu)完(wan)的(de)試劑 4℃保存(cun)；

試(shi)劑三(san)A 液：液體×1 支，4℃保存(cun)；試劑三(san)B 液：液體×1 瓶(ping)，4℃保存(cun)；臨用前將(jiang)A 液倒(dao)入(ru)B 液中混合(he)，待(dai)用；用不(bu)完(wan)的(de)試劑 4℃保存(cun)壹周；

自(zi)備儀器和(he)用品(pin)：

可(ke)見(jian)分光光度計、水(shui)浴(yu)鍋、可(ke)調(tiao)式移(yi)液器、1ml 比(bi)色(se)皿(min)、研(yan)缽、冰、和(he)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

樣(yang)本(ben)的前處理：

1、細(xi)菌、細胞或(huo)組(zu)織(zhi)樣(yang)品的(de)制備：

細(xi)菌或培養細胞：先(xian)收集細(xi)菌(jun)或細(xi)胞到(dao)離心管(guan)內，離心後棄上(shang)清(qing)；按照細(xi)菌(jun)或細(xi)胞數(shu)量(liang)（104 個(ge)）：提取液體積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比(bi)例(li)（建議(yi) 500 萬(wan)細菌(jun)或細胞加(jia)入(ru) 1ml 提取液），超聲波(bo)破(po)碎(sui)細菌(jun)或細胞（冰(bing)浴(yu)，功率(lv) 20％或 200W，超聲 3s，間(jian)隔(ge) 10s，重(zhong)復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上(shang)清(qing)，置冰上(shang)待(dai)測(ce)。

組(zu)織(zhi)：按照組(zu)織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取(qu)液體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比(bi)例(li)（建議(yi)稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入(ru) 1ml 提取液），進(jin)行冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿。8000g 4℃離心 10min，取上(shang)清(qing)，置冰上(shang)待(dai)測(ce)。

2、血(xue)清(qing)（漿）樣(yang)品：直接(jie)檢(jian)測。

測(ce)定步驟：

1、分光光度計或(huo)酶(mei)標(biao)儀(yi)預熱(re) 30min 以上(shang)，調(tiao)節(jie)波(bo)長(chang)至(zhi) 578nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調(tiao)零。

2、酶(mei)促(cu)反(fan)應(ying)

混勻(yun)，放入(ru) 37℃水(shui)浴(yu) 1h 後，10000g 25℃離心 10min，取上(shang)清(qing)液。 2、將(jiang)上(shang)清(qing)液稀(xi)釋(shi) 10 倍(bei)（取(qu) 0.1ml 上(shang)清(qing)液，加(jia)入(ru) 0.9ml 蒸餾水(shui)）。

3、測(ce)氨量(liang)（在(zai) 1ml 比(bi)色(se)皿(min)中加(jia)入(ru)下列(lie)試(shi)劑）

充分混勻(yun)，室溫(wen)放置 20min

混勻(yun)，於(yu) 578nm 處，蒸餾(liu)水(shui)調(tiao)零，讀吸(xi)光值A，計算ΔA=A 測定管(guan)-A 對(dui)照管(guan)。每個(ge)測定管(guan)設壹個(ge)對(dui)照管(guan)。

UE 活力(li)計算:

標(biao)準(zhun)條件下測定(ding)的回(hui)歸(gui)方(fang)程為(wei)y = 0.0915x +0.0373；x 為(wei)標(biao)準(zhun)品濃度(du)（μg/ml），y 為(wei)吸(xi)光值A。 1、血(xue)清(qing)（漿）UE 活力(li)的(de)計算:

單位(wei)的定義(yi)：每ml 血(xue)清(qing)（漿）每分鐘(zhong)產(chan)生(sheng) 1μg NH3-N 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位(wei)。

UE 活力(li)（μg/min/ml）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反(fan)總÷V 樣(yang)÷T=27.32×(ΔA -0.0373)

單位(wei)的定義(yi)：每天(tian)每g 土(tu)樣(yang)中產生(sheng) 1μg NH3-N 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位(wei)。

2、組(zu)織(zhi)、細(xi)菌(jun)或細胞中 1μg NH3-N 活力(li)的(de)計算:

按樣(yang)本(ben)蛋白濃度(du)計算：

單位(wei)的定義(yi)：每mg 組(zu)織(zhi)蛋白每(mei)分鐘(zhong)產(chan)生(sheng) 1μg NH3-N 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位(wei)。

UE 活力(li)（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反(fan)總÷(V 樣(yang)×Cpr)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷Cpr

按樣(yang)本(ben)鮮(xian)重(zhong)計算：

單位(wei)的定義(yi)：每g 組(zu)織(zhi)每(mei)分鐘(zhong)產(chan)生(sheng) 1μg NH3-N 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位(wei)。

UE 活力(li)（μg/min/ g 鮮(xian)重(zhong)）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反(fan)總÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷W

按細菌或細(xi)胞密(mi)度(du)計算：

單位(wei)的定義(yi)：每 1 萬(wan)個(ge)細菌或細胞每(mei)分鐘(zhong)產(chan)生(sheng) 1μg NH3-N 定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位(wei)。

UE 活力(li)（μg/min/104 cell）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反(fan)總÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T=0.0546×ΔA

10：稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)；T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，60min； V 反(fan)總：反(fan)應(ying)體系總(zong)體積(ji)：0.3ml；V 樣(yang)：加(jia)入(ru)反(fan)應(ying)體系中樣(yang)本(ben)體積(ji)，0.02ml；V 樣(yang)總：提(ti)取液體積(ji)，1ml；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白質(zhi)濃度(du)，mg/ml； W：樣(yang)本(ben)質量(liang)， g；500：細(xi)菌(jun)或(huo)細(xi)胞總(zong)數，500 萬(wan)。

脲(niao)酶(mei)Urease UE測(ce)定(ding)試(shi)劑盒(he) 氮(dan)代謝