天(tian)dong酰(xian)胺(an)合成酶是廣泛(fan)存在(zai)於(yu)生物體內(nei)的壹(yi)類氨基轉移酶，催化谷an酞胺(an)的(de)氨基向天(tian)冬(dong)an酸(suan)轉(zhuan)移(yi)。當植(zhi)物處(chu)於(yu)氨毒時(shi)天(tian)an酞胺(an)的(de)形成是(shi)壹種(zhong)解毒反(fan)應(ying)。
天(tian)dong酰(xian)胺(an)合成酶活性測定(ding)試劑(ji)盒(he) 氮(dan)代(dai)謝

天(tian)dong酰(xian)胺(an)合成酶(asparagine synthetase，AS)活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法 50 管(guan)/48 樣

天(tian)dong酰(xian)胺(an)合成酶活性測定(ding)試劑(ji)盒(he) 氮(dan)代(dai)謝

正(zheng)式測(ce)定(ding)前(qian)務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預期差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的樣本做(zuo)預(yu)測定(ding)測定(ding)意義(yi)：

天(tian)dong酰(xian)胺(an)合成酶是廣泛(fan)存在(zai)於(yu)生物體內(nei)的壹(yi)類氨基轉移酶，催化谷an酞胺(an)的(de)氨基向天(tian)冬(dong)an酸(suan)轉(zhuan)移(yi)。當植(zhi)物處(chu)於(yu)氨毒時(shi)天(tian)an酞胺(an)的(de)形成是(shi)壹種(zhong)解毒反(fan)應(ying)。

測(ce)定(ding)原理(li)：

AS 催(cui)化(hua)L-天(tian)dong酰(xian)胺(an)水解成 L-天(tian)冬(dong)an酸(suan)和(he)氨(an)，利(li)用奈(nai)氏試劑(ji)檢(jian)測(ce)氨增(zeng)加的速(su)率，即(ji)可(ke)計(ji)算(suan)其(qi)酶活性。

組成：

自備儀(yi)器(qi)和用品(pin)：

臺式(shi)離(li)心(xin)機、可(ke)見分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)、水(shui)浴(yu)鍋、1ml 玻(bo)璃(li)比(bi)色皿(min)、可(ke)調式移(yi)液(ye)槍、研(yan)缽(bo)、冰(bing)和(he)蒸(zheng)餾(liu)水。

粗(cu)酶液(ye)提取：

1、細(xi)菌(jun)、細(xi)胞或組織(zhi)樣品的(de)制(zhi)備：

細(xi)菌(jun)或培(pei)養細(xi)胞：先(xian)收集(ji)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞到(dao)離(li)心(xin)管內(nei)，離(li)心(xin)後(hou)棄上(shang)清；按(an)照(zhao)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞數量(liang)（104 個(ge)）：試劑(ji)壹(yi)體(ti)積（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬(wan)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞加入 1ml 試劑(ji)壹(yi)），超(chao)聲(sheng)波(bo)破碎細(xi)菌(jun)或細(xi)胞（冰浴(yu)，功(gong)率 20％或 200W，超(chao)聲(sheng) 3s，間(jian)隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清，置冰上(shang)待(dai)測。

組織(zhi)：按(an)照(zhao)組織(zhi)質量(liang)（g）：試劑(ji)壹(yi)體(ti)積(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例(li)（建(jian)議(yi)稱取約(yue) 0.1g 組織(zhi)，加入 1ml 試劑(ji)壹(yi)），進(jin)行冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿。8000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清，置冰上(shang)待(dai)測。

2、血(xue)清(qing)（漿）樣品：直(zhi)接(jie)檢測。

測(ce)定(ding)步驟(zhou)：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)預(yu)熱(re) 30min 以(yi)上(shang)，調節波(bo)長至 420nm，蒸(zheng)餾(liu)水調零(ling)。

2、樣品測(ce)定(ding)（在(zai) EP 中(zhong)加入下(xia)列試劑(ji)）：

混勻(yun)，37℃水(shui)浴(yu) 1 小時(shi)

混勻(yun)，8000 g，25℃離(li)心(xin) 10 min；取(qu)上(shang)清液(ye)，在(zai)EP 管(guan)中加入下(xia)列試劑(ji)

混勻(yun)，室(shi)溫靜(jing)置 15min，420nm 處(chu)讀(du)取吸光(guang)值A，計(ji)算(suan)ΔA=A 測(ce)定(ding)管-A 對(dui)照管。對照管只要做壹管

註意：試劑(ji)六(liu)如出現(xian)沈澱，靜(jing)置後(hou)取上(shang)清使用。

計(ji)算(suan)：

標(biao)準(zhun)條(tiao)件(jian)下測(ce)定(ding)的回(hui)歸(gui)方程為y = 0.662x -0.0434；x 為(wei)標準(zhun)品濃(nong)度(du)（μg/ml），y 為(wei)吸光(guang)值 A。。 1、血(xue)清（漿）AS 活(huo)性(xing)

單(dan)位定(ding)義：每(mei)ml 血清（漿）每(mei)小時(shi)產生 1μg 氨定(ding)義為(wei)壹個酶活力單(dan)位。

AS（μg/h/ml）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反(fan)總(zong)÷V 樣÷T=31.722×(ΔA+0.0434)

2、組織(zhi)、細(xi)菌(jun)或細(xi)胞中 AS 活力的計(ji)算(suan):

按(an)樣本蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算(suan)：

單(dan)位的(de)定(ding)義：每(mei)mg 組織(zhi)蛋(dan)白(bai)每小時(shi)產生 1μg 氨定(ding)義為(wei)壹個酶活力單(dan)位。

AS 活(huo)力（μg/h/mg prot）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反總(zong)÷(V 樣×Cpr)÷T =31.722×(ΔA+0.0434) ÷Cpr

按(an)樣本鮮(xian)重計(ji)算(suan)：

單(dan)位的(de)定(ding)義：每(mei)g 組織(zhi)每(mei)小時(shi)產生 1μg 氨定(ding)義為(wei)壹個酶活力單(dan)位。

AS 活(huo)力（μg/h/g 鮮重）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反總(zong)÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T =31.722×(ΔA +0.0434) ÷W

按(an)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞密度(du)計(ji)算(suan)：

單(dan)位的(de)定(ding)義：每(mei) 1 萬個細(xi)菌(jun)或細(xi)胞每小時(shi)產生 1μg 氨定(ding)義為(wei)壹個酶活力單(dan)位。

AS 活(huo)力（μg/h/104 cell）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V 反總(zong)÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.0634×(ΔA+0.0434)

T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，1h； V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)總體積(ji)：0.525ml；V 樣：加入反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中樣本體(ti)積(ji)，0.025ml；V樣總：提(ti)取(qu)液(ye)體積，1ml；Cpr：樣本蛋(dan)白(bai)質濃(nong)度(du)，mg/ml； W：樣本質量(liang)， g；500：細(xi)菌(jun)或細(xi)胞總數， 500 萬

天(tian)dong酰(xian)胺(an)合成酶活性測定(ding)試劑(ji)盒(he) 氮(dan)代(dai)謝