SP(EC2.4.1.7)主要(yao)存在於(yu)微(wei)生物和植(zhi)物中(zhong)，裂(lie)解葡萄(tao)糖(tang)苷鍵(jian)，催(cui)化(hua)葡萄(tao)糖(tang)基轉(zhuan)移(yi)到(dao)果糖(tang)、木(mu)糖(tang)、半乳(ru)糖(tang)和鼠(shu)李(li)糖(tang)等(deng)，合(he)成相(xiang)應的(de)葡(pu)萄(tao)糖(tang)基低(di)聚糖(tang)。此(ci)外(wai)，SP 還(hai)能(neng)催(cui)化(hua)qing醌合(he)成熊果(guo)苷，具有(you)ji強的(de)美白(bai)效(xiao)果，在化(hua)妝(zhuang)品工(gong)業中(zhong)具有(you)重要(yao)應(ying)用(yong)。
蔗糖(tang)磷酸(suan)化(hua)酶試(shi)劑盒(he) 輔(fu)酶Ⅱ

蔗糖(tang)磷酸(suan)化(hua)酶（Sucrose Phosphorylase, SP）試(shi)劑盒(he)說(shuo)明書(shu)

分(fen)光光度法(fa) 50 管/48 樣

蔗糖(tang)磷酸(suan)化(hua)酶試(shi)劑盒(he) 輔(fu)酶Ⅱ

正式(shi)測(ce)定(ding)前(qian)務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期差(cha)異較(jiao)大(da)的(de)樣本(ben)做預(yu)測定(ding)測定(ding)意(yi)義(yi)：

SP(EC2.4.1.7)主要(yao)存在於(yu)微(wei)生物和植(zhi)物中(zhong)，裂(lie)解葡萄(tao)糖(tang)苷鍵(jian)，催(cui)化(hua)葡萄(tao)糖(tang)基轉(zhuan)移(yi)到(dao)果糖(tang)、木(mu)糖(tang)、半乳(ru)糖(tang)和鼠(shu)李(li)糖(tang)等(deng)，合(he)成相(xiang)應的(de)葡(pu)萄(tao)糖(tang)基低(di)聚糖(tang)。此(ci)外(wai)，SP 還(hai)能(neng)催(cui)化(hua)qing醌合(he)成熊果(guo)苷，具有(you)ji強的(de)美白(bai)效(xiao)果，在化(hua)妝(zhuang)品工(gong)業中(zhong)具有(you)重要(yao)應(ying)用(yong)。

測定(ding)原(yuan)理：

SP 能(neng)夠以磷酸(suan)為受(shou)體，催(cui)化(hua)蔗糖(tang)產(chan)生(sheng) 1-磷酸(suan)葡(pu)萄(tao)糖(tang)，在葡(pu)萄(tao)糖(tang)磷酸(suan)變(bian)位酶催(cui)化(hua)下變(bian)位為 6-磷酸(suan)葡(pu)萄(tao)糖(tang)，在 6-磷酸(suan)葡(pu)萄(tao)糖(tang)脫(tuo)氫(qing)酶(mei)作用(yong)下還(hai)原(yuan)NADP+生成NADPH，導(dao)致 340nm 光吸(xi)收值增(zeng)加(jia)。測定(ding) 340nm 吸(xi)光度增(zeng)加(jia)速率，即(ji)可(ke)計(ji)算SP 活(huo)性。

組(zu)成：

試劑二(er)：粉(fen)劑×1 瓶(ping)，-20℃避光保(bao)存，臨用(yong)前(qian)加(jia) 6ml 蒸餾水(shui)溶解；用(yong)不完的(de)試(shi)劑分(fen)裝(zhuang)後-20℃保(bao)存，禁止反(fan)復(fu)凍(dong)融。

試劑三：粉劑×1 瓶(ping)，-20℃避光保(bao)存，臨用(yong)前(qian)加(jia) 12ml 蒸餾水(shui)水(shui)溶解；用(yong)不完的(de)試(shi)劑分(fen)裝(zhuang)後-20℃保(bao)存，禁止反(fan)復(fu)凍(dong)融。

自(zi)備儀器和用(yong)品：

天(tian)平、低(di)溫離心(xin)機、恒(heng)溫水(shui)浴(yu)鍋、紫外分(fen)光光度計(ji)、1 ml 石英比(bi)色(se)皿和蒸(zheng)餾水(shui)。

粗酶液(ye)提(ti)取(qu)：

組(zu)織(zhi)：按照組(zu)織(zhi)質量（g）：提(ti)取(qu)液(ye)體積(ml)為 1：5~10 的(de)比(bi)例(li)（建(jian)議稱取(qu)約(yue) 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)）進行(xing)冰浴(yu)勻(yun)漿，然後 10000g，4℃，離心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)待(dai)測。

細菌、真(zhen)菌：按照(zhao)細胞數量（10⁴ 個(ge)）：提(ti)取(qu)液(ye)體積（ml）為 500~1000：1 的(de)比(bi)例(li)（建(jian)議 500 萬(wan)細胞加(jia)入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），冰浴(yu)超聲(sheng)波(bo)破(po)碎細胞（功(gong)率 300w，超聲(sheng) 3 秒，間(jian)隔 7 秒，總(zong)時(shi)間(jian) 3min）；然後 10000g， 4℃，離心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)置(zhi)於冰上待(dai)測。

測定(ding)步(bu)驟：

分(fen)光光度計(ji)預(yu)熱(re) 30min，調(tiao)節波(bo)長(chang)至(zhi) 340nm，蒸餾水(shui)調(tiao)零。

操(cao)作表(biao)

SP 活性計(ji)算公(gong)式:

按照(zhao)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度計(ji)算

酶活(huo)定(ding)義(yi)：37℃，pH6.8 時，每(mei)毫克蛋(dan)白(bai)質(zhi)每(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化(hua)產生(sheng) 1nmol NADPH 為壹(yi)個(ge)酶(mei)活單位。

SP 活性（nmol/min/mg prot）=

按照(zhao)樣本(ben)質量計(ji)算

A

 d

×V 反(fan)總(zong)÷V 樣÷Cpr÷T=804×△A÷Cpr

酶活(huo)定(ding)義(yi)：37℃，pH6.8 時，每(mei)克樣本(ben)每(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化(hua)產生(sheng) 1nmol NADPH 為壹(yi)個(ge)酶(mei)活單位。

SP 活性（nmol/min/g 鮮重）=

按照(zhao)細胞數量計(ji)算

A

 d

×V 反(fan)總(zong)÷(V 樣÷V 樣總(zong)×W)÷T=804×△A÷W

酶活(huo)定(ding)義(yi)：37℃，pH6.8 時，每(mei) 10⁴ 個細胞每(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化(hua)產生(sheng) 1nmol NADPH 為壹(yi)個(ge)酶(mei)活單位。

SP 活性（nmol/min/10⁴ cell）=

個）

A

 d

×V 反(fan)總(zong)÷(V 樣÷V 樣總(zong)×細胞數量（萬(wan)個(ge)）)÷T=804×△A÷細胞數量（萬

：NADPH 摩爾消(xiao)光系(xi)數，6220 L/mol/cm；d：比(bi)色(se)皿光徑(jing)，1cm；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體系(xi)總(zong)體積，1ml；V 樣：反(fan)應(ying)體系(xi)中樣本(ben)體積，0.1ml；W：樣本(ben)質量，g；Cpr：蛋(dan)白(bai)濃(nong)度，mg/ml；V 樣總(zong)：加(jia)入提(ti)取(qu)液(ye)體積， 1ml；T：反(fan)應(ying)時(shi)間，2min

註(zhu)意(yi)事項:

可選(xuan)用(yong)BCA 法(fa)測定(ding)蛋(dan)白(bai)含量試(shi)劑盒(he)測(ce)定蛋(dan)白(bai)含量。

樣本(ben)較多(duo)時(shi)，可(ke)以(yi)按照每(mei)個樣本(ben)試劑壹(yi)：試(shi)劑二(er)：試(shi)劑三=600：100：200（μl）的(de)比(bi)例(li)配(pei)制工(gong)作液，用(yong)多(duo)少(shao)配(pei)多(duo)少(shao)，臨用(yong)前(qian)立(li)刻(ke)配(pei)制，10 分(fen)鐘(zhong)內(nei)使用(yong)。

蔗糖(tang)磷酸(suan)化(hua)酶試(shi)劑盒(he) 輔(fu)酶Ⅱ