GCDH（EC 1.1.1.47）催化(hua)D-葡(pu)萄(tao)糖(tang)和(he)NAD(P)生成(cheng)D-葡(pu)萄(tao)糖(tang)酸(suan)和(he)NAD(P)H，大(da)量存(cun)在於(yu)高等(deng)動(dong)物的(de)肝臟和(he)弱氧(yang)化(hua)醋(cu)桿(gan)菌中。在(zai)低聚果糖生產中使(shi)用(yong)GCDH，不僅(jin)能(neng)去除(chu)低聚果糖中的(de)葡(pu)萄(tao)糖(tang)提(ti)高低聚果糖的含(han)量，而且(qie)生成(cheng)的(de)葡(pu)萄(tao)糖(tang)酸(suan)與鈣(gai)離子(zi)結合生成(cheng)的(de)葡(pu)萄(tao)tang酸(suan)鈣是(shi)壹(yi)種理(li)想的(de)補(bu)鈣制(zhi)劑(ji)。因(yin)而(er)，GCDH已成(cheng)為(wei)制備(bei)高含(han)量低聚果糖的理(li)想用(yong)酶。
葡(pu)萄(tao)糖(tang)脫(tuo)氫酶試(shi)劑盒 糖(tang)代謝

葡(pu)萄(tao)糖(tang)脫(tuo)氫酶（Glucose dehydrogenase，GCDH）試劑(ji)盒(he)說明(ming)書

微量法 100 管/96 樣

葡(pu)萄(tao)糖(tang)脫(tuo)氫酶試(shi)劑盒 糖(tang)代謝

正(zheng)式測定(ding)前(qian)務(wu)必取(qu) 2-3 個(ge)預期(qi)差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的樣本做(zuo)預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義：

GCDH（EC 1.1.1.47）催化(hua)D-葡(pu)萄(tao)糖(tang)和(he)NAD(P)生成(cheng)D-葡(pu)萄(tao)糖(tang)酸(suan)和(he)NAD(P)H，大(da)量存(cun)在於(yu)高等(deng)動(dong)物的(de)肝臟和(he)弱氧(yang)化(hua)醋(cu)桿(gan)菌中。在(zai)低聚果糖生產中使(shi)用(yong)GCDH，不僅(jin)能(neng)去除(chu)低聚果糖中的(de)葡(pu)萄(tao)糖(tang)提(ti)高低聚果糖的含(han)量，而且(qie)生成(cheng)的(de)葡(pu)萄(tao)糖(tang)酸(suan)與鈣(gai)離子(zi)結合生成(cheng)的(de)葡(pu)萄(tao)tang酸(suan)鈣是(shi)壹(yi)種理(li)想的(de)補(bu)鈣制(zhi)劑(ji)。因(yin)而(er)，GCDH已成(cheng)為(wei)制備(bei)高含(han)量低聚果糖的理(li)想用(yong)酶。

測定(ding)原(yuan)理(li)：

GCDH 催化(hua)D-葡(pu)萄(tao)糖(tang)和(he)NAD 生成(cheng)D-葡(pu)萄(tao)糖(tang)酸(suan)和(he)NADH，在 340nm 下測(ce)定(ding)NADH 上(shang)升(sheng)速率，即(ji)可反映(ying)GCDH 活(huo)性(xing)。

組成(cheng)：

自備(bei)儀(yi)器和(he)用(yong)品(pin)：

紫(zi)外(wai)分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)/酶標(biao)儀、臺式(shi)離心(xin)機(ji)、可調式移(yi)液(ye)器、微量石英(ying)比色(se)皿/96 孔板(ban)、研(yan)缽(bo)、冰(bing)和(he)蒸(zheng)餾水(shui)。

樣本的(de)前(qian)處(chu)理(li)：

組織的(de)前(qian)處(chu)理(li)：按(an)照(zhao)組(zu)織質(zhi)量（g）：提取(qu)液體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例(li)（建議(yi)稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組(zu)織，加(jia)入(ru) 1ml 提取液），進行冰(bing)浴(yu)勻漿(jiang)。8000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清(qing)，置(zhi)冰(bing)上(shang)待(dai)測。

細(xi)菌或(huo)培(pei)養細(xi)胞(bao)的(de)前處(chu)理(li)：先(xian)收集(ji)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)到(dao)離心(xin)管內，離心(xin)後(hou)棄(qi)上(shang)清(qing)；按照(zhao)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)數(shu)量（104 個(ge)）：提取(qu)液(ye)體積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比例(li)（建議(yi) 500 萬細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)加(jia)入(ru) 1ml 提取液），超聲(sheng)波破(po)碎(sui)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)（冰(bing)浴，功率 20％或(huo) 200W，超聲(sheng) 3s，間(jian)隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清(qing)，置(zhi)冰(bing)上(shang)待(dai)測。

測定(ding)步驟(zhou)：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)或(huo)酶標(biao)儀預熱(re) 30min 以(yi)上(shang)，調節(jie)波(bo)長(chang)至(zhi) 340nm，蒸(zheng)餾水(shui)調零；

2、工作液的配制(zhi)：臨用(yong)前(qian)將試劑(ji)二(er)轉(zhuan)移到(dao)試(shi)劑(ji)壹中混(hun)合溶(rong)解待用(yong)；用(yong)不完(wan)的(de)試劑(ji) 4℃可保(bao)存(cun)壹周(zhou)；

3、將工作液置(zhi)於(yu) 37℃預熱(re) 5 分(fen)鐘(zhong)。

4、在 1ml 石英(ying)比色(se)皿中加(jia)入(ru) 10μl 樣本和(he) 190μl 工作液，立(li)即(ji)混(hun)勻，記(ji)錄(lu) 340nm 處(chu)初(chu)始(shi)吸光(guang)值 A1 和(he) 1min後(hou)的(de)吸光(guang)值A2，計算(suan)ΔA=A2-A1。

GCDH 活性(xing)計(ji)算(suan)：

用(yong)微(wei)量石英(ying)比色(se)皿測定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式(shi)如(ru)下：

按樣(yang)本蛋(dan)白(bai)濃度計算(suan)

單位(wei)定(ding)義：每mg 組織蛋(dan)白(bai)每分(fen)鐘(zhong)生成(cheng) 1nmol NADH 定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單位(wei)。

GCDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr

按樣(yang)本鮮(xian)重計算

單位(wei)定(ding)義：每g 組織每分(fen)鐘(zhong)生成(cheng) 1 nmol NADH 定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單位(wei)。

GCDH（nmol/min/g 鮮(xian)重）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T=3215×ΔA÷W

按細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)密(mi)度計(ji)算(suan)：

單位(wei)的(de)定(ding)義：每 1 萬個(ge)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)每分(fen)鐘(zhong)生成(cheng) 1 nmol NADH 定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單位(wei)。

GCDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T=6.43×ΔA

V 反總(zong)：反應(ying)體(ti)系總體積(ji)，2×10-4 L；ε：NADH 摩爾消(xiao)光(guang)系數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光(guang)徑(jing)，1cm； V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣本體(ti)積(ji)，0.01 ml；V 樣(yang)總(zong)：加入(ru)提取液體積(ji)，1 ml；T：反應(ying)時間(jian)，1 min；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhi)量，g；500：細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)總(zong)數(shu)，500 萬。

用(yong) 96 孔板(ban)測(ce)定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式(shi)如(ru)下：

按樣(yang)本蛋(dan)白(bai)濃度計算(suan)

單位(wei)定(ding)義：每mg 組織蛋(dan)白(bai)每分(fen)鐘(zhong)生成(cheng) 1nmol NADH 定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單位(wei)。

GCDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

按樣(yang)本鮮(xian)重計算

單位(wei)定(ding)義：每g 組織每分(fen)鐘(zhong)生成(cheng) 1 nmol NADH 定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單位(wei)。

GCDH（nmol/min/g 鮮(xian)重）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T=6430×ΔA÷W

按細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)密(mi)度計(ji)算(suan)：

單位(wei)的(de)定(ding)義：每 1 萬個(ge)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)每分(fen)鐘(zhong)生成(cheng) 1 nmol NADH 定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單位(wei)。

GCDH（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反總(zong)÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T=12.86×ΔA

V 反總(zong)：反應(ying)體(ti)系總體積(ji)，2×10-4 L；ε：NADH 摩爾消(xiao)光(guang)系數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：96 孔板(ban)光(guang)徑(jing)，0.05cm； V 樣(yang)：加(jia)入(ru)樣本體(ti)積(ji)，0.01 ml；V 樣(yang)總(zong)：加入(ru)提取液體積(ji)，1 ml；T：反應(ying)時間(jian)，1 min；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhi)量，g；500：細(xi)菌或(huo)細(xi)胞(bao)總(zong)數(shu)，500 萬。

葡(pu)萄(tao)糖(tang)脫(tuo)氫酶試(shi)劑盒 糖(tang)代謝