總(zong)糖酸水解為(wei)還(hai)原糖，在(zai) NaOH 和丙三(san)醇(chun)存(cun)在(zai)下，DNS 試劑(ji)與(yu)還原糖共(gong)熱後(hou)被(bei)還(hai)原成氨(an)基化(hua)合(he)物(wu)，在(zai)過(guo)量的NaOH 堿(jian)性溶液中(zhong)呈桔(ju)紅色(se)，在(zai) 540nm 處有最大(da)吸(xi)收(shou)峰(feng)，以此(ci)測定(ding)樣(yang)品(pin)中(zhong)的總(zong)糖(tang)含量(liang)。
總糖含量試劑(ji)盒 糖代謝(xie)

總糖(tang)含(han)量(liang)試劑(ji)盒說(shuo)明書

微量(liang)法(fa) 100 管/96 樣(yang)

總糖(tang)含(han)量(liang)試劑(ji)盒 糖代謝(xie)

正式測定(ding)前務必取 2-3 個(ge)預(yu)期差異(yi)較大的樣(yang)本做(zuo)預(yu)測定(ding)測定(ding)意(yi)義(yi)：

糖類(lei)物質(zhi)是(shi)構(gou)成植物體的重(zhong)要組成成分(fen)之(zhi)壹，也是(shi)新陳(chen)代謝(xie)的主(zhu)要原料(liao)和貯存(cun)物(wu)質。總糖(tang)也可稱為碳(tan)水化(hua)合(he)物(wu)，包括可溶性的單(dan)糖(tang)，二(er)糖(tang)以及不(bu)溶性的澱(dian)粉(fen)，纖(xian)維素(su)，幾丁(ding)質(zhi)等(deng)。

測定(ding)原理(li)：

總糖(tang)酸(suan)水(shui)解為(wei)還(hai)原糖，在(zai) NaOH 和丙三(san)醇(chun)存(cun)在(zai)下，DNS 試劑(ji)與(yu)還原糖共(gong)熱後(hou)被(bei)還(hai)原成氨(an)基化(hua)合(he)物(wu)，在(zai)過(guo)量的NaOH 堿性溶液中(zhong)呈桔(ju)紅色(se)，在(zai) 540nm 處有最大(da)吸(xi)收(shou)峰(feng)，以此(ci)測定(ding)樣(yang)品(pin)中(zhong)的總(zong)糖(tang)含量(liang)。

組成：

自備儀器和用品(pin)：

可見分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)/酶標(biao)儀、沸水浴、可調式移液器、微(wei)量(liang)石英(ying)比色(se)皿(min)/96 孔板、研缽、蒸(zheng)餾水。

樣品(pin)中(zhong)總(zong)糖的提取：

組織(zhi)：稱取約 0.1g 樣(yang)品，加(jia)入(ru) 1ml 試劑(ji)壹，1.5ml 蒸(zheng)餾水(shui)，勻(yun)漿(jiang)，95℃水(shui)浴中加(jia)熱(re) 30min，加(jia)入(ru) 1ml試劑(ji)二(er)，混(hun)勻(yun)，用蒸(zheng)餾(liu)水定(ding)容至 10ml，8000g 25℃離(li)心 10min，取上清液待測。（註意(yi)稀(xi)釋，見註意(yi)事(shi)項）液(ye)體樣(yang)本：取 0.1ml 樣本，加(jia)入(ru) 1ml 試劑(ji)壹，1.5ml 蒸(zheng)餾水(shui)，勻(yun)漿(jiang)，95℃水(shui)浴中加(jia)熱(re) 30min，加(jia)入(ru) 1ml 試 劑(ji)二(er)，8000g 25℃離(li)心 10min，取上清液待測。（註意(yi)稀(xi)釋，見註意(yi)事(shi)項）

測定(ding)步驟：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)或(huo)酶標(biao)儀預(yu)熱(re) 30min 以上(shang)，調節波(bo)長至 540nm，蒸(zheng)餾水(shui)調零。

2、調節水(shui)浴鍋(guo)至(zhi) 95 度。

3、加(jia)樣(yang)表：

混勻(yun)，置 95 度水(shui)浴中 10min（蓋緊(jin)，以防止(zhi)水分(fen)散(san)失），冷(leng)卻(que)至室(shi)溫

混勻(yun)，540nm 測定(ding)吸(xi)光(guang)值，ΔA=A 測定(ding)管(guan)-A 空白(bai)管(guan)

註意(yi)：1、空白(bai)管(guan)只(zhi)要做(zuo)壹管(guan)。

2、如果(guo)ΔA 大於(yu) 2，需要將上清液用蒸(zheng)餾(liu)水稀釋，計算(suan)公式中乘以相(xiang)應(ying)稀釋倍(bei)數。

總糖(tang)含(han)量(liang)計算(suan)：

1、標(biao)準(zhun)條件(jian)下(xia)測定(ding)的回(hui)歸(gui)方(fang)程為(wei) y = 0.3002x - 0.0507；x 為(wei)標(biao)準(zhun)品濃(nong)度（mg/ml），y 為(wei)吸(xi)光(guang)值。

2、按樣本鮮(xian)重計算：

總糖(tang)（mg /g 鮮(xian)重）= [(ΔA＋0.0507) ÷0.3002×V1]÷（W×V1÷V2）×稀釋倍(bei)數=33.311×(ΔA＋0.0507) ÷W×稀釋倍(bei)數。

3、按樣本蛋白(bai)濃(nong)度計(ji)算(suan)：

總糖(tang)（mg /mg prot）=[(ΔA＋0.0507) ÷0.3002×V1]÷(V1×Cpr) ×稀(xi)釋倍(bei)數=3.3311×(ΔA＋0.0507) ÷Cpr×稀釋倍(bei)數。

V1：加(jia)入(ru)樣本體積，0.008ml；V2：加(jia)入(ru)提取液體(ti)積，10ml； Cpr：樣(yang)本蛋白(bai)質(zhi)濃(nong)度，mg/ml；W：樣(yang)本鮮(xian)重，g。

4、按照(zhao)液(ye)體(ti)體(ti)積計(ji)算(suan)：

總糖(tang)（mg /ml）=[(ΔA＋0.0507) ÷0.3002×V1]÷（V3×V1÷V2）×稀(xi)釋倍(bei)數=116.59×(ΔA＋0.0507)×稀釋倍(bei)數。

V1：加(jia)入(ru)樣本體積，0.008ml；V2：加(jia)入(ru)提取液體(ti)積，10ml/3.5ml； V3:液(ye)體(ti)樣本，0.1ml；Cpr：樣本蛋白(bai)質(zhi)濃(nong)度，mg/ml；W：樣(yang)本鮮(xian)重，g。

註意(yi)：最di檢(jian)測限(xian)為 1mg/g 鮮(xian)重或 10ng/mg prot

總糖(tang)含(han)量(liang)試劑(ji)盒 糖代謝(xie)