纖維(wei)素是由(you)葡萄糖組(zu)成的大(da)分(fen)子多糖，通(tong)常(chang)與(yu)半纖(xian)維素、果(guo)膠和(he)木(mu)質(zhi)素結(jie)合在壹(yi)起(qi)，是植(zhi)物細胞壁(bi)的主要結(jie)構成分(fen)。纖(xian)維(wei)素是壹(yi)種重(zhong)要的膳(shan)食纖維，是自(zi)然界中(zhong)分(fen)布(bu)zui廣(guang)、含(han)量最多的壹(yi)種多糖。
纖(xian)維(wei)素CLL含(han)量試劑(ji)盒(he) 糖代(dai)謝(xie)

纖(xian)維(wei)素（CLL）含(han)量試劑(ji)盒(he)說明書

微(wei)量法 100 管/96 樣(yang)

纖(xian)維(wei)素CLL含(han)量試劑(ji)盒(he) 糖代(dai)謝(xie)

正(zheng)式(shi)測(ce)定(ding)前(qian)務必取 2-3 個預期(qi)差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的樣(yang)本(ben)做預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義(yi)：

纖(xian)維(wei)素是由(you)葡(pu)萄(tao)糖組(zu)成的大(da)分(fen)子多糖，通(tong)常(chang)與(yu)半纖(xian)維素、果(guo)膠和(he)木(mu)質(zhi)素結(jie)合在壹(yi)起(qi)，是植(zhi)物細胞壁(bi)的主要結(jie)構成分(fen)。纖(xian)維(wei)素是壹(yi)種重(zhong)要的膳(shan)食纖維，是自(zi)然界中(zhong)分(fen)布(bu)zui 廣(guang)、含(han)量最多的壹(yi)種多糖。

測(ce)定(ding)原理(li)：

纖(xian)維(wei)素為β－葡萄(tao)糖殘基(ji)組成的多糖，在(zai)酸性(xing)條件下加熱能(neng)分(fen)解(jie)成β－葡萄(tao)糖。β－葡(pu)萄(tao)糖在(zai)強酸作(zuo)用(yong)下，可(ke)脫(tuo)水(shui)生(sheng)成β－糠醛(quan)類(lei)化合物。β－糠醛(quan)類(lei)化(hua)合物與(yu)蒽酮(tong)脫水(shui)縮合，生(sheng)成糠醛(quan)衍(yan)生(sheng)物。顏色(se)的深(shen)淺(qian)可(ke)間(jian)接(jie)定(ding)量測(ce)定(ding)纖(xian)維素含(han)量。

組(zu)成：

自(zi)備(bei)儀器和(he)用(yong)品(pin)：

可(ke)見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)/酶標(biao)儀、水浴鍋(guo)、可(ke)調(tiao)式(shi)移液(ye)器、微(wei)量石(shi)英(ying)比(bi)色(se)皿/96 孔板、80％乙醇、丙(bing)酮(tong)、濃(nong)硫(liu)酸（不(bu)允(yun)許(xu)快(kuai)遞）、研缽和(he)蒸(zheng)餾(liu)水。

樣(yang)品(pin)的前(qian)處(chu)理(li)：

1、細(xi)胞(bao)壁(bi)的提(ti)取：取約(yue) 0.3g 樣(yang)本(ben)，加(jia)入(ru) 1ml 80％乙醇，室(shi)溫(wen)快(kuai)速(su)勻(yun)漿，90℃水(shui)浴 20min（加(jia)熱過程(cheng)中(zhong)EP管可(ke)能(neng)爆(bao)開(kai)，建(jian)議(yi)用(yong)膠(jiao)帶封口(kou)或使用(yong)防爆(bao) EP 管），冷卻(que)至(zhi)室(shi)溫(wen)，6000g 25℃離(li)心(xin) 10min，棄(qi)上清。沈澱(dian)加入(ru) 1.5ml80％乙醇和(he)丙酮(tong)各洗壹(yi)遍（渦(wo)旋(xuan)振蕩(dang) 2min 左(zuo)右，6000g 25℃離(li)心(xin) 10min，棄(qi)上清即(ji)可(ke)），沈澱(dian)即為粗(cu)細胞(bao)壁(bi)，加(jia)入 1ml 試劑(ji)壹(yi)（去除(chu)澱(dian)粉）浸(jin)泡(pao) 15 小時(shi)，6000g 25℃離(li)心(xin) 10min，棄(qi)上清，將沈澱(dian)幹燥(zao)，稱重(zhong)得(de)細胞(bao)壁(bi)物(wu)質(zhi)（CWM）。

2、纖(xian)維(wei)素的提(ti)取：稱取烘(hong)幹(gan)的CWM 約(yue) 5mg，加(jia)入 0.5ml 蒸(zheng)餾(liu)水充分(fen)勻(yun)漿(jiang)(若烘(hong)幹(gan)物質(zhi)質(zhi)地(di)堅硬(ying)，可(ke)先(xian)研碎後(hou)再(zai)加(jia)入(ru) 0.5ml 蒸(zheng)餾(liu)水勻(yun)漿(jiang)，或者(zhe)用(yong)勻(yun)漿器勻漿(jiang))，勻漿液(ye)轉移至(zhi)EP 管中(zhong)，用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水定(ding)容(rong)至 0.5ml，置(zhi)於冰水(shui)浴中(zhong)，緩慢(man)加(jia)入 0.75ml 濃(nong)硫(liu)酸，混(hun)勻(yun)，冰水(shui)浴中(zhong)靜置(zhi) 30min。8000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取上清液(ye)，用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水稀(xi)釋(shi) 20 倍(bei)後(hou)待(dai)測(ce)。

測(ce)定(ding)步驟：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)或酶標(biao)儀預熱 30min 以(yi)上，調節(jie)波(bo)長(chang)至(zhi) 620nm，蒸(zheng)餾(liu)水調(tiao)零(ling)。

2、調(tiao)節(jie)水(shui)浴鍋(guo)至(zhi) 95 度。

3、工作液(ye)的配(pei)制(zhi)：在試劑(ji)二(er)中(zhong)加入(ru) 4ml 試劑(ji)三，充分(fen)溶(rong)解(jie)，如(ru)較(jiao)難溶(rong)解(jie)，可(ke)加(jia)熱攪拌；用(yong)不(bu)完(wan)的試劑(ji) 4℃

保(bao)存(cun)壹(yi)周；

4、加(jia)樣(yang)表（在(zai)EP 管中(zhong)反(fan)應(ying)）：

混(hun)勻(yun)，置(zhi) 95 度水(shui)浴中(zhong) 10min（蓋緊，以(yi)防止(zhi)水(shui)分(fen)散(san)失），冷卻(que)至(zhi)室(shi)溫(wen)後(hou)，取 200μl 至微(wei)量石(shi)英(ying)比(bi)色(se)皿或96 孔板中(zhong)，於 620nm 處(chu)，分(fen)別(bie)讀取空白管和(he)測(ce)定(ding)管吸(xi)光(guang)值，ΔA=A 測(ce)定(ding)管-A 空(kong)白(bai)管。

註意：

1、空(kong)白(bai)管只要做壹(yi)管。

2、由(you)於(yu)濃(nong)硫(liu)酸具(ju)有(you)強腐蝕(shi)性(xing)，請(qing)謹慎(shen)操(cao)作。

纖(xian)維(wei)素含(han)量計算：

用(yong)微(wei)量石(shi)英(ying)比(bi)色(se)皿測(ce)定(ding)的計(ji)算(suan)公式(shi)如(ru)下

1、標(biao)準條件下測(ce)定(ding)的回(hui)歸(gui)方程為 y = 7.875x - 0.0043；x 為標(biao)準品濃(nong)度（mg/ml），y 為吸光(guang)值(zhi)。

2、按(an)樣(yang)本(ben)質(zhi)量計算：

纖(xian)維(wei)素（mg /g 幹(gan)重(zhong)）= [(ΔA＋0.0043) ÷7.875×V1]÷（W×V1÷V2）×20=3.17×(ΔA＋0.0043) ÷W。

V1：加(jia)入(ru)樣本(ben)體(ti)積(ji)，0.15ml；V2：加(jia)入(ru)提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)，1.25ml；W：樣(yang)本(ben)幹(gan)重(zhong)，5×10-3g；20：樣(yang)本(ben)稀(xi)釋(shi)倍數。

用(yong) 96 孔板測(ce)定(ding)的計(ji)算(suan)公式(shi)如(ru)下

1、標(biao)準條件下測(ce)定(ding)的回(hui)歸(gui)方程為 y = 5.25x - 0.0043；x 為標(biao)準品濃(nong)度（mg/ml），y 為吸光(guang)值(zhi)。

2、按(an)樣(yang)本(ben)質(zhi)量計算：

纖(xian)維(wei)素（mg /g 幹(gan)重(zhong)）= [(ΔA＋0.0043) ÷5.25×V1]÷（W×V1÷V2）×20=4.76×(ΔA＋0.0043)÷W。

V1：加(jia)入(ru)樣本(ben)體(ti)積(ji)，0.15ml；V2：加(jia)入(ru)提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)，1.25ml；W：樣(yang)本(ben)幹(gan)重(zhong)，約(yue) 5×10-3g；20：樣(yang)本(ben)稀(xi)釋(shi)倍數。

註意：最(zui)di檢(jian)測(ce)限(xian)為 1mg/g 幹重(zhong)或 10ng/ mg prot

纖(xian)維(wei)素CLL含(han)量試劑(ji)盒(he) 糖代(dai)謝(xie)