α-L-Af 是壹(yi)種(zhong)能夠(gou)水(shui)解(jie)非(fei)還原呋喃阿拉伯糖(tang)殘基(ji)的(de)糖苷(gan)酶(mei)類(lei)，使細(xi)胞壁(bi)阿拉(la)伯(bo)半(ban)乳(ru)聚(ju)糖、阿拉伯(bo)甘(gan)露(lu)聚(ju)糖等中(zhong)性(xing)糖不斷(duan)解(jie)離(li)，促進(jin)果(guo)膠(jiao)的增(zeng)溶和(he)降(jiang)解(jie)。由(you)於果(guo)實(shi)成熟過(guo)程(cheng)中(zhong)常(chang)常(chang)伴隨著(zhe)阿(e)拉伯糖(tang)的喪(sang)失(shi)，該(gai)酶(mei)活性(xing)在果(guo)實(shi)成熟軟(ruan)化中(zhong)的研究具(ju)有重大意(yi)義(yi)。
α-L-阿(e)拉(la)伯呋喃糖苷(gan)酶(mei)試(shi)劑盒(he) 糖代(dai)謝

α-L-阿(e)拉(la)伯(bo)呋喃糖苷(gan)酶(mei)（α-L-Arabinofuranosidase, α-L-Af）試(shi)劑盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

微(wei)量(liang)法(fa) 100 管(guan)/48 樣(yang)

α-L-阿(e)拉(la)伯(bo)呋喃糖苷(gan)酶(mei)試(shi)劑盒(he) 糖代(dai)謝

正(zheng)式(shi)測定前務(wu)必(bi)取 2-3 個預期差(cha)異(yi)較大(da)的(de)樣(yang)本(ben)做(zuo)預測定測定意(yi)義(yi)：

α-L-Af 是壹(yi)種(zhong)能夠(gou)水(shui)解(jie)非(fei)還原呋喃阿拉伯糖(tang)殘基(ji)的(de)糖苷(gan)酶(mei)類(lei)，使細(xi)胞壁(bi)阿拉(la)伯(bo)半(ban)乳(ru)聚(ju)糖、阿拉伯(bo)甘(gan)露(lu)聚(ju)糖(tang)等(deng)中(zhong)性(xing)糖不斷(duan)解(jie)離(li)，促進(jin)果(guo)膠(jiao)的增(zeng)溶和(he)降(jiang)解(jie)。由(you)於果(guo)實(shi)成熟過(guo)程(cheng)中(zhong)常(chang)常(chang)伴隨著(zhe)阿(e)拉伯糖(tang)的喪(sang)失(shi)，該(gai)酶(mei)活性(xing)在果(guo)實(shi)成熟軟(ruan)化中(zhong)的研究具(ju)有重大意(yi)義(yi)。

測定原理：

α-L-Af 分解(jie)對硝(xiao)基(ji)酚阿(e)拉伯呋喃糖苷(gan)生成(cheng)對-硝(xiao)基(ji)苯(ben)fen，後(hou)者(zhe)在 400nm 有(you)最(zui)大(da)吸收峰，通過(guo)測定吸光值(zhi)升(sheng)高(gao)速率來(lai)計(ji)算α-L-Af 活性(xing)。

組成：

試(shi)劑壹(yi)：粉(fen)劑×1 瓶(ping)，-20℃保存(cun)；臨用前加入 2.5ml 蒸(zheng)餾水(shui)，充(chong)分溶解(jie)備用；用不完(wan)的試(shi)劑仍-20℃保(bao)存(cun)。

自備儀(yi)器(qi)和(he)用品(pin)：

酶(mei)標儀(yi)/可(ke)見(jian)分光光度(du)計(ji)、臺式離(li)心機、水(shui)浴鍋(guo)、可(ke)調式移(yi)液(ye)器、96 孔(kong)板/微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比色皿(min)、研缽、冰(bing)和(he)蒸(zheng)餾水(shui)。

粗(cu)酶(mei)液(ye)提取(qu)：

1、細(xi)菌或(huo)培養細胞：先收集(ji)細(xi)菌或(huo)細胞(bao)到離(li)心管(guan)內，離(li)心後(hou)棄(qi)上(shang)清；按(an)照細菌或(huo)細胞(bao)數(shu)量(liang)（104 個）：提取液(ye)體積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比例(li)（建(jian)議 500 萬細(xi)菌或(huo)細胞(bao)加入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），超(chao)聲波(bo)破碎(sui)細菌或(huo)細胞(bao)（冰(bing)浴(yu)，功率(lv) 20％或(huo) 200W，超(chao)聲 3s，間(jian)隔(ge) 10s，重復(fu) 30 次）；15000g 4℃離(li)心 10min，取上(shang)清，置冰(bing)上(shang)待(dai)測。

2、組織(zhi)：按(an)照組織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取(qu)液(ye)體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例(li)（建(jian)議稱取(qu)約(yue) 0.1g 組織(zhi)，加入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），進(jin)行冰(bing)浴(yu)勻漿(jiang)。15000g 4℃離(li)心 10min，取上(shang)清，置冰(bing)上(shang)待(dai)測。

測定步驟：

1、分光光度(du)計(ji)或(huo)酶(mei)標儀(yi)預(yu)熱(re) 30min 以(yi)上(shang)，調節(jie)波(bo)長至 400nm，蒸(zheng)餾水(shui)調零。

2、樣(yang)本(ben)測定（在 EP 管(guan)或(huo) 96 孔(kong)板中(zhong)依次加入下(xia)列(lie)試(shi)劑）：

迅速混勻，放(fang)入(ru) 37℃保(bao)溫 30min

充(chong)分混勻， 400nm 處測定吸光值(zhi)A，計(ji)算ΔA=A 測定-A 對照。每個測定管(guan)需設(she)壹(yi)個對照管(guan)。

α-L-Af 活性(xing)計(ji)算：

用(yong)微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比色皿(min)測定的計(ji)算公(gong)式如(ru)下(xia)

標準條(tiao)件(jian)下(xia)測定的回歸方(fang)程(cheng)為(wei)y =0.00585x -0.0027；x 為(wei)標準品(pin)濃度(du)（nmol/ml），y 為(wei)吸光值(zhi)。

按(an)樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算：

單位的定(ding)義：每mg 組織(zhi)蛋(dan)白(bai)每min 產(chan)生(sheng) 1nmol 對-硝(xiao)基(ji)苯fen定(ding)義為(wei)壹(yi)個酶(mei)活性(xing)單位。

α-L-Af 活性(xing)(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V 反總(zong)]÷(V 樣(yang)×Cpr)÷T

=39.89×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

按(an)樣(yang)本(ben)鮮重計(ji)算：

單位的定(ding)義：每g 組織(zhi)每小時產(chan)生(sheng) 1nmol 對-硝(xiao)基(ji)苯fen定(ding)義為(wei)壹(yi)個酶(mei)活性(xing)單位。

α-L-Af 活性(xing)(nmol/min/g 鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V 反總(zong)]÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T

=39.89×(ΔA+0.0027) ÷W

按(an)細(xi)菌或(huo)細胞(bao)密(mi)度(du)計(ji)算：

單位的定(ding)義：每 1 萬(wan)個細菌或(huo)細胞(bao)每小時產(chan)生(sheng) 1nmol 對-硝(xiao)基(ji)苯fen定(ding)義為(wei)壹(yi)個酶(mei)活性(xing)單位。

α-L-Af 活性(xing)(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V 反總(zong)]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T

=0.08×(ΔA +0.0027)

Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；V 反總：反(fan)應(ying)體系(xi)總體(ti)積(ji)，0.07ml；V 樣(yang)：加入反(fan)應(ying)體系(xi)中(zhong)樣(yang)本(ben)體(ti)積(ji)，0.01ml；

V 樣(yang)總：加入提(ti)取(qu)液(ye)體積(ji)，1ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)，g； 500：細(xi)胞(bao)或(huo)細菌總數(shu)，500 萬；T：反應(ying)時間(jian)，30min。

用(yong) 96 孔(kong)板測定的計(ji)算公(gong)式如(ru)下(xia)

標準條(tiao)件(jian)下(xia)測定的回歸方(fang)程(cheng)為(wei)y = 0.0039x -0.0027；x 為(wei)標準品(pin)濃度(du)（nmol/ml），y 為(wei)吸光值(zhi)。

按(an)樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算：

單位的定(ding)義：每mg 組織(zhi)蛋(dan)白(bai)每小時產(chan)生(sheng) 1nmol 對-硝(xiao)基(ji)苯fen定(ding)義為(wei)壹(yi)個酶(mei)活性(xing)單位。

α-L-Af 活性(xing)(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V 反總(zong)]÷(V 樣(yang)×Cpr)÷T

=59.83×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

按(an)樣(yang)本(ben)鮮重計(ji)算：

單位的定(ding)義：每g 組織(zhi)每小時產(chan)生(sheng) 1nmol 對-硝(xiao)基(ji)苯fen定(ding)義為(wei)壹(yi)個酶(mei)活性(xing)單位。

α-L-Af 活性(xing)(nmol/min/g 鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V 反總(zong)]÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T

=59.83×(ΔA+0.0027) ÷W

按(an)細(xi)菌或(huo)細胞(bao)密(mi)度(du)計(ji)算：

單位的定(ding)義：每 1 萬(wan)個細菌或(huo)細胞(bao)每小時產(chan)生(sheng) 1nmol 對-硝(xiao)基(ji)苯fen定(ding)義為(wei)壹(yi)個酶(mei)活性(xing)單位。

α-L-Af 活性(xing)(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V 反總(zong)]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T

=0.12×(ΔA +0.0027)

Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)質(zhi)濃(nong)度(du)，mg/ml；V 反總：反(fan)應(ying)體系(xi)總體(ti)積(ji)，0.07ml；V 樣(yang)：加入反(fan)應(ying)體系(xi)中(zhong)樣(yang)本(ben)體(ti)積(ji)，0.01ml；

V 樣(yang)總：加入提(ti)取(qu)液(ye)體積(ji)，1ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)，g； 500：細(xi)胞(bao)或(huo)細菌總數(shu)，500 萬；T：反應(ying)時間(jian)，30min。

α-L-阿(e)拉(la)伯(bo)呋喃糖苷(gan)酶(mei)試(shi)劑盒(he) 糖代(dai)謝