NAG 是(shi)溶酶體(ti)中的壹(yi)種酸性水解(jie)酶(mei)，廣(guang)泛(fan)存在於各種組織(zhi)、體(ti)液(ye)和細胞中，以(yi)前(qian)列腺(xian)和(he)腎(shen)近曲(qu)小管細胞內(nei)含量最高(gao)。NAG 活(huo)性(xing)變(bian)化(hua)與機體(ti)某些病理狀(zhuang)態密(mi)切相(xiang)關。
N-乙(yi)酰(xian)-β-D-葡萄糖(tang)苷(gan)酶(mei)試(shi)劑盒 糖(tang)代謝

N-乙酰(xian)-β-D-葡萄糖(tang)苷(gan)酶(mei)（N-acetyl-β-D-glucosidase, NAG）試(shi)劑盒說(shuo)明(ming)書

微量(liang)法(fa) 100 管/48 樣

N-乙酰(xian)-β-D-葡萄糖(tang)苷(gan)酶(mei)試(shi)劑盒 糖(tang)代謝

正(zheng)式(shi)測(ce)定前(qian)務必取(qu) 2-3 個預期(qi)差異(yi)較大的樣(yang)本做(zuo)預測(ce)定測(ce)定意(yi)義(yi)：

NAG 是溶(rong)酶(mei)體(ti)中的壹(yi)種酸性水解(jie)酶(mei)，廣(guang)泛(fan)存在於各種組織(zhi)、體(ti)液(ye)和細胞中，以(yi)前(qian)列腺(xian)和(he)腎(shen)近曲(qu)小管細胞內(nei)含量最高(gao)。NAG 活(huo)性(xing)變(bian)化(hua)與機體(ti)某些病理狀(zhuang)態密(mi)切相(xiang)關。

測(ce)定原(yuan)理：

NAG 分解(jie)β-N-乙(yi)酰(xian)an基葡(pu)萄糖(tang)苷(gan)生(sheng)成對(dui)-硝基苯fen，後(hou)者在 400nm 有(you)最大吸(xi)收(shou)峰(feng)，通過測(ce)定吸(xi)光(guang)值升(sheng)高(gao)速(su)率(lv)來計(ji)算NAG 活(huo)性。

組成(cheng)：

試(shi)劑壹(yi)：粉劑×1 瓶(ping)，-20℃保(bao)存；臨(lin)用前(qian)加(jia)入 2.5ml 蒸(zheng)餾水，充(chong)分(fen)溶解(jie)備用；用不(bu)完(wan)的試(shi)劑仍(reng)-20℃保存

自備(bei)儀器和用品：

酶標儀/可見分光(guang)光(guang)度(du)計、臺式(shi)離心機、水浴鍋、可調式(shi)移(yi)液(ye)器、96 孔(kong)板/微量(liang)石英(ying)比(bi)色(se)皿、研缽(bo)、冰和(he)蒸(zheng)餾水。

粗酶(mei)液(ye)提取(qu)：

1、細菌(jun)或培養(yang)細胞：先(xian)收(shou)集細菌(jun)或細胞到(dao)離心管內，離心後(hou)棄(qi)上清(qing)；按照(zhao)細菌(jun)或細胞數(shu)量（104 個）：提取(qu)液(ye)體(ti)積（ml）為 500~1000：1 的比(bi)例（建(jian)議 500 萬(wan)細菌(jun)或細胞加(jia)入(ru) 1ml 提取(qu)液(ye)），超聲波(bo)破(po)碎細菌(jun)或細胞（冰(bing)浴，功(gong)率(lv) 20％或(huo) 200W，超聲 3s，間(jian)隔 10s，重(zhong)復(fu) 30 次）；15000g 4℃離心 10min，取(qu)上清(qing)，置冰上待測(ce)。

2、組織(zhi)：按(an)照(zhao)組織(zhi)質(zhi)量（g）：提取(qu)液(ye)體(ti)積(ml)為 1：5~10 的比(bi)例（建(jian)議稱取(qu)約(yue) 0.1g 組織(zhi)，加(jia)入 1ml 提取(qu)液(ye)），進行(xing)冰浴勻漿(jiang)。15000g 4℃離心 10min，取(qu)上清(qing)，置冰上待測(ce)。

3、血清(qing)（漿）樣品：直(zhi)接(jie)檢(jian)測(ce)。

測(ce)定步驟：

1、酶標儀或分光(guang)光(guang)度(du)計預熱 30min 以(yi)上，調節(jie)波長(chang)至(zhi) 400nm，蒸(zheng)餾水調(tiao)零(ling)。

2、樣本測(ce)定（在 EP 管或 96 孔(kong)板中依(yi)次加入(ru)下(xia)列試(shi)劑）：

迅(xun)速(su)混(hun)勻(yun)，放(fang)入 37℃保(bao)溫 30min

充分(fen)混(hun)勻(yun)， 400nm 處測(ce)定吸(xi)光(guang)值A，計(ji)算ΔA=A 測(ce)定-A 對(dui)照(zhao)。每(mei)個測(ce)定管需設壹(yi)個對(dui)照(zhao)管。

NAG 活性(xing)計(ji)算：

用微量(liang)石英比(bi)色(se)皿測(ce)定的計(ji)算公(gong)式(shi)如(ru)下(xia)

1、標準條件(jian)下(xia)測(ce)定的回(hui)歸方程為(wei) y = 0.00585x +0.0083；x 為(wei)標準品濃(nong)度(du)（nmol/ml），y 為吸(xi)光(guang)值。

2、血清(qing)（漿）NAG 活力(li)的計(ji)算

單位的定(ding)義：每(mei)ml 血清(qing)（漿）每(mei)分(fen)鐘產生 1nmol 對(dui)-硝(xiao)基苯fen定(ding)義為(wei)壹(yi)個酶活(huo)性單(dan)位。

NAG 活力(li)(nmol /min/ml)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反(fan)總(zong)]÷V 樣÷T =39.89×(ΔA-0.0083)

3、細胞、細菌(jun)和組織(zhi)中 NAG 活(huo)力的計(ji)算

按樣(yang)本蛋白(bai)濃(nong)度(du)計算(suan)：

單位的定(ding)義：每(mei)mg 組織(zhi)蛋(dan)白每(mei)分(fen)鐘產生 1nmol 對(dui)-硝(xiao)基苯fen定(ding)義為(wei)壹(yi)個酶活(huo)性單(dan)位。

NAG 活性(xing)(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反(fan)總(zong)]÷(V 樣×Cpr)÷T

=39.89×(ΔA-0.0083) ÷Cpr

按樣(yang)本鮮重(zhong)計算(suan)：

單位的定(ding)義：每(mei)g 組織(zhi)每(mei)分(fen)鐘產生 1nmol 對(dui)-硝(xiao)基苯fen定(ding)義為(wei)壹(yi)個酶活(huo)性單(dan)位。

NAG 活性(xing)(nmol/min/g 鮮(xian)重(zhong))= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反(fan)總(zong)]÷(W×V 樣÷V 樣總(zong))÷T

=39.89×(ΔA-0.0083)÷W

按細菌(jun)或細胞密(mi)度(du)計算(suan)：

單位的定(ding)義：每(mei) 1 萬(wan)個細菌(jun)或細胞每(mei)分(fen)鐘產生 1nmol 對(dui)-硝(xiao)基苯fen定(ding)義為(wei)壹(yi)個酶活(huo)性單(dan)位。

NAG 活性(xing)(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V 反(fan)總(zong)]÷(500×V 樣÷V 樣總(zong))÷T

=0.08×(ΔA-0.0083)

V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)總(zong)體(ti)積，0.07ml；V 樣：加入(ru)反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中樣(yang)本體(ti)積，0.01ml；V 樣總(zong)：加入提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積， 1ml；Cpr：樣本蛋白(bai)質(zhi)濃度(du)，mg/ml；W：樣本質量(liang)，g； 500：細胞或(huo)細菌(jun)總(zong)數(shu)，500 萬；T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)， 30min。

用 96 孔(kong)板測(ce)定的計(ji)算公(gong)式(shi)如(ru)下(xia)

1、標準條件(jian)下(xia)測(ce)定的回(hui)歸方程為(wei) y = 0.0039x +0.0083；x 為(wei)標準品濃(nong)度(du)（nmol/ml），y 為吸(xi)光(guang)值。

2、血清(qing)（漿）NAG 活力(li)的計(ji)算

單位的定(ding)義：每(mei)ml 血清(qing)（漿）每(mei)分(fen)鐘產生 1nmol 對(dui)-硝(xiao)基苯fen定(ding)義為(wei)壹(yi)個酶活(huo)性單(dan)位。

NAG 活力(li)(nmol /min/ml)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反(fan)總(zong)]÷V 樣÷T =59.83×(ΔA-0.0083)

3、細胞、細菌(jun)和組織(zhi)中 NAG 活(huo)力的計(ji)算

按樣(yang)本蛋白(bai)濃(nong)度(du)計算(suan)：

單位的定(ding)義：每(mei)mg 組織(zhi)蛋(dan)白每(mei)分(fen)鐘產生 1nmol 對(dui)-硝(xiao)基苯fen定(ding)義為(wei)壹(yi)個酶活(huo)性單(dan)位。

NAG 活性(xing)(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反(fan)總(zong)]÷(V 樣×Cpr)÷T

=59.83×(ΔA-0.0083) ÷Cpr

按樣(yang)本鮮重(zhong)計算(suan)：

單位的定(ding)義：每(mei)g 組織(zhi)每(mei)分(fen)鐘產生 1nmol 對(dui)-硝(xiao)基苯fen定(ding)義為(wei)壹(yi)個酶活(huo)性單(dan)位。

NAG 活性(xing)(nmol/min/g 鮮(xian)重(zhong))= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反(fan)總(zong)]÷(W×V 樣÷V 樣總(zong))÷T

=59.83×(ΔA-0.0083)÷W

按細菌(jun)或細胞密(mi)度(du)計算(suan)：

單位的定(ding)義：每(mei) 1 萬(wan)個細菌(jun)或細胞每(mei)分(fen)鐘產生 1nmol 對(dui)-硝(xiao)基苯fen定(ding)義為(wei)壹(yi)個酶活(huo)性單(dan)位。

NAG 活性(xing)(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V 反(fan)總(zong)]÷(500×V 樣÷V 樣總(zong))÷T

=0.12×(ΔA-0.0083)

V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)總(zong)體(ti)積，0.07ml；V 樣：加入(ru)反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中樣(yang)本體(ti)積，0.01ml；V 樣總(zong)：加入提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積， 1ml；Cpr：樣本蛋白(bai)質(zhi)濃度(du)，mg/ml；W：樣本質量(liang)，g； 500：細胞或(huo)細菌(jun)總(zong)數(shu)，500 萬；T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)， 30min。

N-乙酰(xian)-β-D-葡萄糖(tang)苷(gan)酶(mei)試(shi)劑盒 糖(tang)代謝