Cx（EC3.2.1.4）存(cun)在於(yu)細菌(jun)、真(zhen)菌(jun)和(he)動物(wu)體內(nei)，是(shi)纖(xian)維(wei)素(su)酶(mei)系(xi)的(de)組份(fen)之(zhi)壹(yi)，Cx主(zhu)要作(zuo)用於(yu)非(fei)晶態纖(xian)維(wei)素(su)和(he)水(shui)溶性(xing)纖(xian)維(wei)素(su)衍(yan)生(sheng)物(wu)，隨(sui)機水(shui)解(jie)糖苷(gan)鍵，將其(qi)分解(jie)成葡(pu)萄(tao)糖(tang)、纖(xian)維(wei)二(er)糖(tang)、纖(xian)維(wei)三(san)糖和(he)其(qi)他寡聚(ju)體(ti)。
內(nei)切(qie)-β-1 4-葡(pu)聚(ju)糖(tang)酶活性(xing)測(ce)定試劑盒(he)糖代(dai)謝(xie)

內(nei)切(qie)-β-1 4-葡(pu)聚(ju)糖(tang)酶（Cx）活(huo)性(xing)測(ce)定試劑盒(he)說明書(shu)

微量法(fa) 100 管/48 樣(yang)

內(nei)切(qie)-β-1 4-葡(pu)聚(ju)糖(tang)酶活性(xing)測(ce)定試劑盒(he)糖代(dai)謝(xie)

正(zheng)式測(ce)定前(qian)務必(bi)取 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差(cha)異較大(da)的樣(yang)本(ben)做(zuo)預(yu)測(ce)定測(ce)定意義(yi)：

Cx（EC3.2.1.4）存(cun)在於(yu)細菌(jun)、真(zhen)菌(jun)和(he)動物(wu)體內(nei)，是(shi)纖(xian)維(wei)素(su)酶(mei)系(xi)的(de)組份(fen)之(zhi)壹(yi)，Cx主(zhu)要作(zuo)用於(yu)非(fei)晶態纖(xian)維(wei)素(su)和(he)水(shui)溶性(xing)纖(xian)維(wei)素(su)衍(yan)生(sheng)物(wu)，隨(sui)機水(shui)解(jie)糖苷(gan)鍵，將其(qi)分解(jie)成葡(pu)萄(tao)糖(tang)、纖(xian)維(wei)二(er)糖(tang)、纖(xian)維(wei)三(san)糖和(he)其(qi)他寡聚(ju)體(ti)。

測(ce)定原理：

采(cai)用3,5－二硝基水(shui)楊(yang)酸法(fa)測(ce)定Cx催化羧(suo)甲基(ji)纖(xian)維(wei)素(su)鈉降(jiang)解產(chan)生的(de)還原糖的含量。

組成：

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和(he)用品：

酶(mei)標(biao)儀(yi)/可(ke)見(jian)分(fen)光(guang)光度(du)計(ji)、水(shui)浴(yu)鍋(guo)、離(li)心機、可調(tiao)式移(yi)液(ye)器、96 孔板(ban)/微量石(shi)英(ying)比(bi)色皿、研(yan)缽(bo)、冰和(he)蒸餾(liu)水(shui)。

樣(yang)品測(ce)定的準(zhun)備(bei)：

1、細菌(jun)或培養(yang)細胞(bao)：先(xian)收(shou)集(ji)細菌(jun)或細胞(bao)到(dao)離(li)心管內(nei)，離(li)心後(hou)棄(qi)上清(qing)；按照(zhao)細菌(jun)或細胞(bao)數量（104 個(ge)）：提(ti)取液體(ti)積（ml）為 500~1000：1 的比(bi)例（建(jian)議(yi) 500 萬細菌(jun)或細胞(bao)加入 1ml 提取液），超(chao)聲(sheng)波(bo)破(po)碎(sui)細菌(jun)或細胞(bao)（冰浴(yu)，功(gong)率(lv) 20％或 200W，超(chao)聲(sheng) 3s，間隔 10s，重(zhong)復(fu) 30 次）；8000g 4℃離(li)心 10min，取上清(qing)，置冰上待(dai)測(ce)。

2、組織(zhi)：按照(zhao)組織(zhi)質(zhi)量（g）：提取液體(ti)積(ml)為 1：5~10 的比(bi)例（建(jian)議(yi)稱取約 0.1g 組織(zhi)，加入 1ml 提取液），進(jin)行(xing)冰浴(yu)勻漿(jiang)。8000g 4℃離(li)心 10min，取上清(qing)，置冰上待(dai)測(ce)。

3、血(xue)清(qing)（漿(jiang)）樣(yang)品：直(zhi)接(jie)檢(jian)測(ce)。

測(ce)定步(bu)驟：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)或酶標儀(yi)預(yu)熱(re) 30min 以上，調(tiao)節波長(chang)至(zhi) 540nm，蒸餾(liu)水(shui)調(tiao)零。

2、加(jia)樣(yang)表（在EP 管中(zhong)依次加入下(xia)列(lie)試劑）：

混勻，37℃準(zhun)確水(shui)浴(yu) 2h

混勻， 90℃水(shui)浴(yu) 10min（蓋(gai)緊(jin)，防止水(shui)分(fen)散失(shi)），冷卻後(hou)，取 200μl 至微量石(shi)英(ying)比(bi)色皿或 96 孔板(ban)中(zhong)，測(ce)540nm 下(xia)吸(xi)光值A，計(ji)算(suan)ΔA=A 測(ce)定管-A 對(dui)照管。每個(ge)測(ce)定管需設壹(yi)個(ge)對(dui)照(zhao)管。

Cx 活(huo)性(xing)計(ji)算(suan)

用微量石(shi)英(ying)比(bi)色皿測(ce)定的計(ji)算(suan)公式(shi)如下(xia)

1、標(biao)準(zhun)條件(jian)下(xia)測(ce)定回(hui)歸(gui)方(fang)程為(wei) y = 6.4078x - 0.0673；x 為(wei)標準(zhun)品濃(nong)度(du)（mg/ml），y 為(wei)吸(xi)光值。

2、血(xue)清(qing)（漿(jiang)）Cx 活力(li)的(de)計(ji)算(suan)

單位的定義(yi)：每ml 血清(qing)（漿）每分鐘催化產(chan)生 1μg 葡(pu)萄(tao)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單位。

Cx 活(huo)力(li)(μg /min/ml)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反(fan)總(zong)]÷V 樣(yang)÷T

=14.305×(ΔA+0.0673)

3、細胞(bao)、細菌(jun)和(he)組織(zhi)中 Cx 活力(li)的(de)計(ji)算(suan)

按照(zhao)蛋(dan)白濃(nong)度(du)計(ji)算(suan)

單位的定義(yi)：每mg 組織(zhi)蛋(dan)白每分鐘催化產(chan)生 1μg 葡(pu)萄(tao)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單位。

Cx 活(huo)力(li)(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反(fan)總(zong)]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷Cpr

按樣(yang)本(ben)鮮(xian)重(zhong)計(ji)算(suan)

單位的定義(yi)：每g 組織(zhi)每分鐘催化產(chan)生 1μg 葡(pu)萄(tao)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單位。

Cx 活(huo)力(li)(μg /min /g 鮮(xian)重(zhong))=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反總]÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W

按細菌(jun)或細胞(bao)密(mi)度計(ji)算(suan)

單位的定義(yi)：每 1 萬個(ge)細菌(jun)或細胞(bao)每分鐘催化產(chan)生 1μg 葡(pu)萄(tao)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單位。

Cx 活(huo)力(li)(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反(fan)總(zong)]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T

=0.0286×(ΔA+0.0673)

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體系(xi)總(zong)體積，0.11ml； V 樣(yang)：加入樣(yang)本(ben)體(ti)積，0.01 ml；V 樣(yang)總：加(jia)入提取液體(ti)積，1 ml；T：反應(ying)時間，120 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白質(zhi)濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量，g；500：細菌(jun)或細胞(bao)總數(shu)，500 萬。

用 96 孔板(ban)測(ce)定的計(ji)算(suan)公式(shi)如下(xia)

1、標(biao)準(zhun)條件(jian)下(xia)測(ce)定回(hui)歸(gui)方(fang)程為(wei) y = 3.2039x - 0.0673；x 為(wei)標準(zhun)品濃(nong)度(du)（mg/ml），y 為(wei)吸(xi)光值。

2、血(xue)清(qing)（漿(jiang)）Cx 活力(li)的(de)計(ji)算(suan)

單位的定義(yi)：每ml 血清(qing)（漿）每分鐘催化產(chan)生 1μg 葡(pu)萄(tao)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單位。

Cx 活(huo)力(li)(μg /min/ml)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V 反(fan)總(zong)]÷V 樣(yang)÷T

=28.61×(ΔA+0.0673)

3、細胞(bao)、細菌(jun)和(he)組織(zhi)中 Cx 活力(li)的(de)計(ji)算(suan)

按照(zhao)蛋(dan)白濃(nong)度(du)計(ji)算(suan)

單位的定義(yi)：每mg 組織(zhi)蛋(dan)白每分鐘催化產(chan)生 1μg 葡(pu)萄(tao)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單位。

Cx 活(huo)力(li)(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V 反(fan)總(zong)]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷Cpr

按樣(yang)本(ben)鮮(xian)重(zhong)計(ji)算(suan)

單位的定義(yi)：每g 組織(zhi)每分鐘催化產(chan)生 1μg 葡(pu)萄(tao)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單位。

Cx 活(huo)力(li)(μg /min /g 鮮(xian)重(zhong))=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V 反總]÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W

按細菌(jun)或細胞(bao)密(mi)度計(ji)算(suan)

單位的定義(yi)：每 1 萬個(ge)細菌(jun)或細胞(bao)每分鐘催化產(chan)生 1μg 葡(pu)萄(tao)糖(tang)定義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶(mei)活(huo)力(li)單位。

Cx 活(huo)力(li)(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V 反(fan)總(zong)]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T

=0.057×(ΔA+0.0673)

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體系(xi)總(zong)體積，0.11ml； V 樣(yang)：加入樣(yang)本(ben)體(ti)積，0.01 ml；V 樣(yang)總：加(jia)入提取液體(ti)積，1 ml；T：反應(ying)時間，120 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白質(zhi)濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量，g；500：細菌(jun)或細胞(bao)總數(shu)，500 萬。

內(nei)切(qie)-β-1 4-葡(pu)聚(ju)糖(tang)酶活性(xing)測(ce)定試劑盒(he)糖代(dai)謝(xie)