C1（EC3.2.1.91）存在於(yu)細(xi)菌、真菌和(he)動(dong)物體(ti)內，是(shi)纖(xian)維(wei)素酶系的組份之(zhi)壹(yi)，C1催化多(duo)聚(ju)糖(tang)鏈(lian)的(de)末(mo)端非還(hai)原端釋放(fang)出(chu)纖(xian)維(wei)二(er)糖(tang)和(he)葡(pu)萄(tao)糖。
外切-β-1 4-葡(pu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)C1檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he) 糖代謝(xie)

外切-β-1，4-葡(pu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)（C1）/纖(xian)維(wei)二(er)糖(tang)苷酶(mei)活(huo)性測(ce)定(ding)試(shi)劑(ji)盒(he)說明(ming)書

微(wei)量法(fa) 100 管(guan)/48 樣(yang)

外切-β-1 4-葡(pu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)C1檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he) 糖代謝(xie)

正式(shi)測(ce)定(ding)前務必取(qu) 2-3 個(ge)預期(qi)差(cha)異較大(da)的(de)樣本(ben)做(zuo)預測定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義：

C1（EC3.2.1.91）存(cun)在(zai)於(yu)細(xi)菌、真菌和(he)動(dong)物體(ti)內，是(shi)纖(xian)維(wei)素酶系的組份之(zhi)壹(yi)，C1催化多(duo)聚(ju)糖(tang)鏈(lian)的(de)末(mo)端非還(hai)原端釋放(fang)出(chu)纖(xian)維(wei)二(er)糖(tang)和(he)葡(pu)萄(tao)糖。

測(ce)定(ding)原理：

采(cai)用(yong)3,5－二(er)硝基水(shui)楊酸(suan)法測(ce)定(ding)C1催化微(wei)晶纖(xian)維(wei)素降解(jie)產生(sheng)的(de)還(hai)原糖(tang)的(de)含量(liang)。

組成(cheng)：

自(zi)備(bei)儀器和(he)用(yong)品：

酶(mei)標(biao)儀/可見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)、水(shui)浴鍋(guo)、離心(xin)機(ji)、可調(tiao)式(shi)移(yi)液(ye)器(qi)、96 孔板(ban)/微(wei)量石(shi)英比色皿(min)、研缽、冰(bing)和(he)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

樣(yang)品測定(ding)的(de)準備(bei)：

1、細(xi)菌或(huo)培(pei)養細(xi)胞：先(xian)收集(ji)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞到離(li)心管內，離心(xin)後棄上清(qing)；按照(zhao)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞數(shu)量(liang)（104 個）：提取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例(li)（建議(yi) 500 萬細(xi)菌或(huo)細(xi)胞加入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），超(chao)聲波(bo)破(po)碎(sui)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞（冰(bing)浴，功(gong)率(lv) 20％或(huo) 200W，超(chao)聲 3s，間隔 10s，重復(fu) 30 次(ci)）；8000g 4℃離心 10min，取(qu)上清(qing)，置(zhi)冰(bing)上待(dai)測(ce)。

2、組織：按照(zhao)組織質(zhi)量(liang)（g）：提取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的比例(li)（建議(yi)稱取(qu)約(yue) 0.1g 組織，加入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)），進(jin)行冰(bing)浴勻(yun)漿。8000g 4℃離心 10min，取(qu)上清(qing)，置(zhi)冰(bing)上待(dai)測(ce)。

3、血(xue)清(qing)（漿）樣品：直接(jie)檢(jian)測(ce)。

測(ce)定(ding)步驟：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)或酶(mei)標(biao)儀預熱 30min 以(yi)上，調(tiao)節波(bo)長至 540nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調(tiao)零。

2、加樣表(biao)（在EP 管(guan)中依次(ci)加入下列試(shi)劑(ji)）：

混(hun)勻(yun)，37℃準確水(shui)浴 2h

混(hun)勻(yun)， 90℃水(shui)浴 10min（蓋緊，防(fang)止(zhi)水(shui)分(fen)散(san)失），冷(leng)卻(que)後(hou)，取(qu) 200μl 至(zhi)微(wei)量石(shi)英比色皿(min)或 96 孔板(ban)中，測(ce)

540nm 下吸光(guang)值(zhi)A，計(ji)算(suan)ΔA=A 測(ce)定(ding)管(guan)-A 對照(zhao)管(guan)。每個測定(ding)管(guan)需設壹(yi)個(ge)對照(zhao)管(guan)。

C1 活(huo)性(xing)計(ji)算(suan)

用(yong)微(wei)量石(shi)英比色皿(min)測定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式(shi)如(ru)下

1、標(biao)準條件(jian)下測定(ding)回(hui)歸(gui)方程為 y = 6.4078x - 0.0673；x 為標(biao)準品濃度(du)（mg/ml），y 為(wei)吸(xi)光(guang)值(zhi)。

2、血(xue)清(qing)（漿）C1 活力(li)的計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)的定(ding)義：每ml 血清（漿）每分(fen)鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1μg 葡(pu)萄(tao)糖定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單(dan)位(wei)。

C1 活(huo)力(li)(μg /min/ml)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反(fan)總]÷V 樣(yang)÷T

=14.305×(ΔA+0.0673)

3、細(xi)胞、細(xi)菌和(he)組織中(zhong) C1 活(huo)力的(de)計(ji)算(suan)

按照(zhao)蛋白濃度(du)計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)的定(ding)義：每mg 組織蛋白每分(fen)鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1μg 葡(pu)萄(tao)糖定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單(dan)位(wei)。

C1 活(huo)力(li)(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反(fan)總]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷Cpr

按樣(yang)本(ben)鮮重計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)的定(ding)義：每g 組織每分(fen)鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1μg 葡(pu)萄(tao)糖定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單(dan)位(wei)。

C1 活(huo)力(li)(μg /min /g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反(fan)總]÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T

=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W

按細(xi)菌或(huo)細(xi)胞密度(du)計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)的定(ding)義：每 1 萬個細(xi)菌或(huo)細(xi)胞每分(fen)鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1μg 葡(pu)萄(tao)糖定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單(dan)位(wei)。

C1 活(huo)力(li)(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反(fan)總]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T

=0.0286×(ΔA+0.0673)

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反(fan)總：反(fan)應體(ti)系總體(ti)積(ji)，0.11ml； V 樣(yang)：加入樣(yang)本(ben)體(ti)積(ji)，0.01 ml；V 樣(yang)總：加入提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1 ml；T：反(fan)應時間(jian)，120 min；Cpr：樣本蛋白質濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量，g；500：細(xi)菌或(huo)細(xi)胞總數(shu)，500 萬。

用(yong) 96 孔(kong)板(ban)測定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式(shi)如(ru)下

1、標(biao)準條件(jian)下測定(ding)回(hui)歸(gui)方程為 y = 3.2039x - 0.0673；x 為標(biao)準品濃度(du)（mg/ml），y 為(wei)吸(xi)光(guang)值(zhi)。

2、血(xue)清(qing)（漿）C1 活力(li)的計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)的定(ding)義：每ml 血清（漿）每分(fen)鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1μg 葡(pu)萄(tao)糖定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單(dan)位(wei)。

C1 活(huo)力(li)(μg /min/ml)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V 反(fan)總]÷V 樣(yang)÷T

=28.61×(ΔA+0.0673)

3、細(xi)胞、細(xi)菌和(he)組織中(zhong) C1 活(huo)力的(de)計(ji)算(suan)

按照(zhao)蛋白濃度(du)計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)的定(ding)義：每mg 組織蛋白每分(fen)鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1μg 葡(pu)萄(tao)糖定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單(dan)位(wei)。

C1 活(huo)力(li)(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V 反(fan)總]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷Cpr

按樣(yang)本(ben)鮮重計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)的定(ding)義：每g 組織每分(fen)鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1μg 葡(pu)萄(tao)糖定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單(dan)位(wei)。

C1 活(huo)力(li)(μg /min /g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V 反(fan)總]÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T

=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W

按細(xi)菌或(huo)細(xi)胞密度(du)計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)的定(ding)義：每 1 萬個細(xi)菌或(huo)細(xi)胞每分(fen)鐘(zhong)催化產(chan)生(sheng) 1μg 葡(pu)萄(tao)糖定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單(dan)位(wei)。

C1 活(huo)力(li)(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V 反(fan)總]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T

=0.057×(ΔA+0.0673)

1000：1mg/ml=1000ug/ml；V 反(fan)總：反(fan)應體(ti)系總體(ti)積(ji)，0.11ml； V 樣(yang)：加入樣(yang)本(ben)體(ti)積(ji)，0.01 ml；V 樣(yang)總：加入提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1 ml；T：反(fan)應時間(jian)，120 min；Cpr：樣本蛋白質濃(nong)度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質(zhi)量，g；500：細(xi)菌或(huo)細(xi)胞總數(shu)，500 萬。

外切-β-1 4-葡(pu)聚(ju)糖(tang)酶(mei)C1檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he) 糖代謝(xie)