幾(ji)丁質(zhi)主(zhu)要(yao)存在(zai)於(yu)蝦(xia)、蟹(xie)、昆蟲(chong)等(deng)甲殼(ke)類(lei)動(dong)物(wu)的外殼(ke)與軟(ruan)體動(dong)物(wu)的器官(例如烏(wu)賊(zei)的軟(ruan)骨(gu))，以及(ji)真(zhen)菌類(lei)的(de)細(xi)胞(bao)壁中(zhong)。而幾(ji)丁質(zhi)酶(mei)(EC 3.2.1.14)可催化(hua)幾(ji)丁質(zhi)水(shui)解(jie)，具有抵(di)禦真(zhen)菌侵(qin)染(ran)的(de)作(zuo)用(yong)，成為抗真(zhen)菌病害(hai)的(de)研(yan)究(jiu)熱點(dian)。
幾(ji)丁質(zhi)酶(mei)試(shi)劑(ji)盒(he) 糖代(dai)謝

幾(ji)丁質(zhi)酶(mei)（Chitinase）試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書

微(wei)量法 100 管(guan)/48 樣

幾(ji)丁質(zhi)酶(mei)試(shi)劑(ji)盒(he) 糖代(dai)謝

正(zheng)式(shi)測(ce)定前(qian)務(wu)必取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期差(cha)異較(jiao)大(da)的樣本(ben)做預(yu)測(ce)定測(ce)定意(yi)義：

幾(ji)丁質(zhi)主(zhu)要(yao)存在(zai)於(yu)蝦(xia)、蟹(xie)、昆蟲(chong)等(deng)甲殼(ke)類(lei)動(dong)物(wu)的外殼(ke)與軟(ruan)體動(dong)物(wu)的器官(例如烏(wu)賊(zei)的軟(ruan)骨(gu))，以(yi)及(ji)真(zhen)菌類(lei)的(de)細(xi)胞(bao)壁中(zhong)。而幾(ji)丁質(zhi)酶(mei)(EC 3.2.1.14)可催化(hua)幾(ji)丁質(zhi)水(shui)解(jie)，具有抵(di)禦真(zhen)菌侵(qin)染(ran)的(de)作(zuo)用(yong)，成為抗真(zhen)菌病害(hai)的(de)研(yan)究(jiu)熱點(dian)。

測(ce)定原理(li)：

幾(ji)丁質(zhi)酶(mei)水解幾丁質(zhi)產生N-乙(yi)酰(xian)氨基葡(pu)萄(tao)糖(tang)，進(jin)壹(yi)步與對二甲氨基苯(ben)甲醛產生紅(hong)色化(hua)合(he)物(wu)，在(zai) 585nm處(chu)有特(te)征(zheng)吸收(shou)峰，吸光(guang)值增(zeng)加(jia)速率(lv)反映(ying)了(le)幾(ji)丁質(zhi)酶(mei)的活(huo)性(xing)。

組(zu)成：

試(shi)劑(ji)二：液體 5ml×1 瓶(ping)，4℃保(bao)存(cun)。（若(ruo)出(chu)現結(jie)晶，可(ke) 80℃左右(you)加(jia)熱溶(rong)解後(hou)使(shi)用）

自(zi)備儀(yi)器和用(yong)品：

天(tian)平(ping)、水(shui)浴(yu)鍋(guo)、離(li)心機(ji)、可(ke)見分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)/酶(mei)標儀(yi)、微量石(shi)英(ying)比(bi)色(se)皿/96 孔(kong)板(ban)、甲苯（土壤樣品(pin)專用(yong)）和(he)蒸餾水。

粗(cu)酶(mei)液提取(qu)：

組(zu)織：按(an)照組(zu)織質(zhi)量（g）：提(ti)取(qu)液體積(ml)為 1：5~10 的比(bi)例（建議稱(cheng)取約(yue) 0.1g 組織，加(jia)入 1ml 提取(qu)液）進行(xing)冰(bing)浴勻漿(jiang)，然(ran)後 10000g，4℃離心 20min，取(qu)上(shang)清(qing)，置(zhi)冰(bing)上(shang)待(dai)測(ce)。

真(zhen)菌：按(an)照細(xi)胞(bao)數量（104 個(ge)）：提(ti)取(qu)液體積（ml）為 500~1000：1 的比(bi)例（建議 500 萬細(xi)胞(bao)加(jia)入 1ml提取(qu)液），冰浴(yu)超(chao)聲(sheng)波破(po)碎細(xi)胞(bao)（功率(lv) 300w，超聲(sheng) 3 秒，間(jian)隔(ge) 7 秒，總時(shi)間(jian) 3min）；然後 10000g，4℃，離心 20min，取(qu)上(shang)清(qing)置(zhi)於(yu)冰上(shang)待(dai)測(ce)。

培養液：直接測(ce)定。

測(ce)定操作(zuo)表(biao)：

計(ji)算公(gong)式(shi)：

用(yong)微(wei)量石(shi)英(ying)比(bi)色(se)皿測(ce)定的(de)計算公(gong)式(shi)如下

標(biao)準(zhun)曲線：y=0.3088-0.003，R2=0.9995

計(ji)算公(gong)式(shi)：

1、按(an)照樣本(ben)重量計(ji)算

酶(mei)活(huo)性(xing)定義：37℃條(tiao)件(jian)下(xia)，每克(ke)組(zu)織每(mei)小(xiao)時(shi)分(fen)解幾丁質(zhi)產生 1mg N-乙酰(xian)氨基葡(pu)萄(tao)糖(tang)的(de)酶(mei)量為壹個(ge)酶(mei)活(huo)性(xing)單位。

幾(ji)丁質(zhi)酶(mei)活(huo)性(xing)（mg/h/g 鮮(xian)重）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反(fan)總÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T

=8.096×（ΔA +0.003）÷W

2、按(an)照蛋白質(zhi)濃度計(ji)算

酶(mei)活(huo)定義：37℃條(tiao)件(jian)下(xia)，每毫(hao)克(ke)蛋白每小(xiao)時(shi)分(fen)解幾丁質(zhi)產生 1mgN-乙酰(xian)氨基葡(pu)萄(tao)糖(tang)的(de)酶(mei)量為壹個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位。幾丁質(zhi)酶(mei)活(huo)性(xing)（mg/h mg prot）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T

= 8.096×（ΔA +0.003）÷Cpr

3、按(an)細(xi)胞(bao)數量計(ji)算

酶(mei)活(huo)定義：37℃條(tiao)件(jian)下(xia)，每 104 個(ge)細(xi)胞(bao)每小(xiao)時(shi)分(fen)解幾丁質(zhi)產生 1mgN-乙酰(xian)氨基葡(pu)萄(tao)糖(tang)的(de)酶(mei)量為壹個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位。

幾(ji)丁質(zhi)酶(mei)活(huo)性(xing)（mg/h /104 cell）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xi)胞(bao)數量)

=8.096×（ΔA +0.003）÷細(xi)胞(bao)數量

4、按(an)液體體(ti)積計(ji)算

酶(mei)活(huo)定義：37℃條(tiao)件(jian)下(xia)，每毫(hao)升(sheng)培養液每小(xiao)時(shi)分(fen)解幾丁質(zhi)產生 1mg N-乙酰(xian)氨基葡(pu)萄(tao)糖(tang)的(de)酶(mei)量為壹個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位。

幾(ji)丁質(zhi)酶(mei)活(huo)性(xing)（mg/h /ml）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷V 樣=8.096×（ΔA +0.003）

V 反(fan)總：反(fan)應(ying)體系總體(ti)積，1ml；V 樣：反(fan)應(ying)體系中(zhong)樣本(ben)體積，0.4ml；V 樣總：加(jia)入提取(qu)液體積，1ml；W：樣本(ben)質(zhi)量，g；Cpr：樣本(ben)蛋白濃度，mg/ml

用(yong) 96 孔(kong)板測(ce)定的(de)計算公(gong)式(shi)如下

標(biao)準(zhun)曲線：y=0.1544x-0.003，R2=0.9995

計(ji)算公(gong)式(shi)：

4、按(an)照樣本(ben)重量計(ji)算

酶(mei)活(huo)性(xing)定義：37℃條(tiao)件(jian)下(xia)，每克(ke)組(zu)織每(mei)小(xiao)時(shi)分(fen)解幾丁質(zhi)產生 1mg N-乙酰(xian)氨基葡(pu)萄(tao)糖(tang)的(de)酶(mei)量為壹個(ge)酶(mei)活(huo)性(xing)單位。

幾(ji)丁質(zhi)酶(mei)活(huo)性(xing)（mg/h/g 鮮(xian)重）=（ΔA+0.003）÷0.1544×V 反(fan)總÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T

=16.192×（ΔA +0.003）÷W

5、按(an)照蛋白質(zhi)濃度計(ji)算

酶(mei)活(huo)定義：37℃條(tiao)件(jian)下(xia)，每毫(hao)克(ke)蛋白每小(xiao)時(shi)分(fen)解幾丁質(zhi)產生 1mgN-乙酰(xian)氨基葡(pu)萄(tao)糖(tang)的(de)酶(mei)量為壹個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位。幾丁質(zhi)酶(mei)活(huo)性(xing)（mg/h mg prot）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T

= 16.192×（ΔA +0.003）÷Cpr

6、按(an)細(xi)胞(bao)數量計(ji)算

酶(mei)活(huo)定義：37℃條(tiao)件(jian)下(xia)，每 104 個(ge)細(xi)胞(bao)每小(xiao)時(shi)分(fen)解幾丁質(zhi)產生 1mgN-乙酰(xian)氨基葡(pu)萄(tao)糖(tang)的(de)酶(mei)量為壹個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位。

幾(ji)丁質(zhi)酶(mei)活(huo)性(xing)（mg/h /104 cell）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xi)胞(bao)數量)

=16.192×（ΔA +0.003）÷細(xi)胞(bao)數量

4、按(an)液體體(ti)積計(ji)算

酶(mei)活(huo)定義：37℃條(tiao)件(jian)下(xia)，每毫(hao)升(sheng)培養液每小(xiao)時(shi)分(fen)解幾丁質(zhi)產生 1mg N-乙酰(xian)氨基葡(pu)萄(tao)糖(tang)的(de)酶(mei)量為壹個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位。

幾(ji)丁質(zhi)酶(mei)活(huo)性(xing)（mg/h /ml）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V 反總÷V 樣=16.192×（ΔA +0.003）

V 反(fan)總：反(fan)應(ying)體系總體(ti)積，1ml；V 樣：反(fan)應(ying)體系中(zhong)樣本(ben)體積，0.4ml；V 樣總：加(jia)入提取(qu)液體積，1ml；W：樣本(ben)質(zhi)量，g；Cpr：樣本(ben)蛋白濃度，mg/ml

註(zhu)意(yi)事項(xiang)：

1、反(fan)應(ying)結(jie)束後立(li)即進行比(bi)色。

2、試(shi)劑(ji)四有壹(yi)定的(de)毒性，請操作(zuo)時(shi)做好(hao)防護措(cuo)施。

幾(ji)丁質(zhi)酶(mei)試(shi)劑(ji)盒(he) 糖代(dai)謝