PEPC 催(cui)化(hua)磷(lin)酸(suan)烯(xi)醇(chun)式(shi)丙(bing)tong酸(suan)和(he)CO2 生成(cheng)草xian乙酸(suan)和(he)HPO42-，蘋(ping)果(guo)suan脫(tuo)氫酶(mei)進壹(yi)步(bu)催(cui)化(hua)草(cao)xian乙(yi)酸(suan)和(he) NADH 生成(cheng)蘋(ping)果(guo)酸(suan)和(he)NAD+，在 340nm 測定NADH 減少(shao)速(su)率(lv)，計(ji)算(suan)PEPC 活性(xing)。
磷(lin)酸(suan)烯(xi)醇(chun)式(shi)丙(bing)tong酸(suan)羧(suo)化(hua)酶(mei)試劑(ji)盒 糖(tang)酵解(jie)

磷(lin)酸(suan)烯(xi)醇(chun)式(shi)丙(bing)tong酸(suan)羧(suo)化(hua)酶(mei)（PEPC)試(shi)劑(ji)盒說明(ming)書(shu)

分光(guang)光度法(fa) 50 管(guan)/48 樣(yang)

磷(lin)酸(suan)烯(xi)醇(chun)式(shi)丙(bing)tong酸(suan)羧(suo)化(hua)酶(mei)試劑(ji)盒 糖(tang)酵解(jie)

正(zheng)式測定前務必(bi)取(qu) 2-3 個預(yu)期差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的(de)樣(yang)本(ben)做(zuo)預(yu)測定測定意義：

PEPC（EC 4.1.1.31）廣泛(fan)存(cun)在於動物(wu)、植物(wu)、微(wei)生物(wu)和(he)細胞(bao)中(zhong)，是(shi)催(cui)化(hua)磷(lin)酸(suan)烯(xi)醇(chun)式(shi)丙(bing)tong酸(suan)與(yu)二(er)氧(yang)化碳(tan)反應(ying)生成(cheng)草xian乙酸(suan)呈(cheng)不(bu)可(ke)逆反(fan)應(ying)的酶(mei)，對三(san)羧(suo)酸(suan)循環(huan)的運(yun)轉起重要調(tiao)節(jie)作(zuo)用(yong)。

測定原理：

PEPC 催(cui)化(hua)磷(lin)酸(suan)烯(xi)醇(chun)式(shi)丙(bing)tong酸(suan)和(he)CO2 生成(cheng)草xian乙(yi)酸(suan)和(he)HPO4^2-，蘋(ping)果(guo)suan脫(tuo)氫酶(mei)進壹(yi)步(bu)催(cui)化(hua)草(cao)xian乙(yi)酸(suan)和(he) NADH 生成(cheng)蘋(ping)果(guo)酸(suan)和(he)NAD⁺，在(zai) 340nm 測定NADH 減少(shao)速(su)率(lv)，計(ji)算(suan)PEPC 活(huo)性(xing)。

組(zu)成(cheng)：

自(zi)備(bei)儀器和(he)用(yong)品：

紫(zi)外(wai)分光(guang)光度計、臺(tai)式離心(xin)機(ji)、可(ke)調式(shi)移(yi)液器、1 ml 石英(ying)比(bi)色(se)皿(min)、研(yan)缽(bo)、冰和(he)蒸(zheng)餾水。

樣(yang)本(ben)的前(qian)處理：

1、細(xi)菌(jun)或(huo)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)：先(xian)收集(ji)細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)到(dao)離心(xin)管(guan)內，離心(xin)後(hou)棄(qi)上清；按照細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)數(shu)量（104 個(ge)）：提取液(ye)體(ti)積（ml）為 500~1000：1 的比例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)加(jia)入 1ml 提取液），超聲波破(po)碎(sui)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)（冰(bing)浴(yu)，功(gong)率(lv) 20％或(huo) 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)，置(zhi)冰上(shang)待測。

2、組(zu)織(zhi)：按照組(zu)織質(zhi)量（g）：提(ti)取液體(ti)積(ml)為 1：5~10 的比例(li)（建(jian)議(yi)稱取(qu)約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入 1ml 提取液），進行(xing)冰浴勻漿。8000g 4℃離心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)，置(zhi)冰上(shang)待測。

3、血(xue)清(qing)（漿）樣品：直接(jie)檢(jian)測。

測定步(bu)驟(zhou)：

1、分光(guang)光度計預(yu)熱 30min 以(yi)上(shang)，調(tiao)節(jie)波長(chang)至(zhi) 340nm，蒸(zheng)餾水調零(ling)。

2、試(shi)劑(ji)五(wu)工(gong)作(zuo)液(ye)的(de)配(pei)制(zhi)：將(jiang)試(shi)劑(ji)五(wu)原液：試(shi)劑五(wu)稀(xi)釋(shi)液=1μl:329μl 稀(xi)釋(shi)，用(yong)多(duo)少配多(duo)少。

3、將(jiang)試(shi)劑(ji)壹(yi)、二(er)、三(san)、四(si)和(he)試劑五(wu)工(gong)作(zuo)液(ye)置(zhi)於 37℃(哺(bu)乳(ru)動物(wu))或(huo) 25℃(其它(ta)物(wu)種)預(yu)熱 5 分鐘(zhong)。加(jia)樣表：

將(jiang)上(shang)述(shu)試劑按順序(xu)加(jia)入 1 ml 石英(ying)比(bi)色(se)皿(min)中，立(li)即(ji)混(hun)勻，加(jia)樣本(ben)的同(tong)時開始計(ji)時，340 nm 波長(chang)下記錄(lu)初始吸光度A1 和(he)反應(ying) 5 分鐘(zhong)後的吸光度A2。計算(suan)ΔA=A1-A2。

註(zhu)意(yi)事(shi)項：如(ru)果(guo)壹(yi)次性測定樣本(ben)數較(jiao)多(duo)，可(ke)將試(shi)劑(ji)壹(yi)、二(er)、三(san)、四(si)、和(he)試劑五(wu)工(gong)作(zuo)液(ye)按比例配成(cheng)混合液。

PEPC 活(huo)性(xing)計(ji)算(suan)：

1、血(xue)清(qing)（漿）PEPC 活力計算(suan)

單位(wei)定義：每毫(hao)升(sheng)血清(qing)（漿）每分鐘(zhong)消(xiao)耗 1 nmol NADH 定義為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單位(wei)。

PEPC（nmol/min/ml））＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷V 樣(yang)÷T=1624×ΔA 2、組織、細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)中(zhong) PEPC 活(huo)力計算(suan)

按樣本(ben)蛋白濃度計算(suan)

單位(wei)定義：每mg 組(zu)織(zhi)蛋白每分鐘(zhong)消(xiao)耗 1nmol NADH 定義為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單位(wei)。

PEPC（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=1624×ΔA÷Cpr

按樣本(ben)鮮(xian)重計算(suan)

單位(wei)定義：每g 組(zu)織(zhi)每分鐘(zhong)消(xiao)耗 1 nmol NADH 定義為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單位(wei)。

PEPC（nmol/min/g 鮮(xian)重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=1624×ΔA÷W

按細菌(jun)或(huo)細胞(bao)密度計算(suan)：

單位(wei)定義：每 1 萬(wan)個(ge)細胞(bao)每(mei)分鐘(zhong)消(xiao)耗 1 nmol NADH 定義為壹(yi)個(ge)酶(mei)活力單位(wei)。

PEPC（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣總)÷T=3.248×ΔA

V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體(ti)系總體(ti)積，1.010×10-3 L；ε：NADH 摩爾(er)消(xiao)光系(xi)數，6.22×103 L / mol /cm；d：比(bi)色(se)皿(min)光徑(jing)， 1cm；V 樣(yang)：加(jia)入樣本(ben)體(ti)積，0.02 ml；V 樣總：加(jia)入提取液體(ti)積，1 ml；T：反應(ying)時間，5 min；Cpr：樣本(ben)蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本(ben)質量，g；500：細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)總(zong)數(shu)，500 萬(wan)。

磷(lin)酸(suan)烯(xi)醇(chun)式(shi)丙(bing)tong酸(suan)羧(suo)化(hua)酶(mei)試劑(ji)盒 糖(tang)酵解(jie)