糖(tang)化(hua)酶水解(jie)可(ke)溶(rong)性澱粉(fen)生(sheng)成葡萄(tao)糖，與 3,5-二(er)硝(xiao)基水楊酸生成紅棕(zong)色化合(he)物，在(zai) 540nm 處有(you)最大(da)光吸(xi)收(shou)，在(zai)壹定範圍(wei)內(nei)反(fan)應(ying)液(ye)顏(yan)色深(shen)淺(qian)與葡(pu)萄(tao)糖的(de)量成正比(bi)，可(ke)測(ce)定計算(suan)得糖(tang)化(hua)酶的(de)活(huo)力(li)。
糖化(hua)酶試劑盒(he) 糖(tang)代(dai)謝

糖化酶(Glucoamylase)試劑盒(he)說(shuo)明書

微(wei)量法(fa) 100 管(guan)/48 樣(yang)

糖化酶試劑盒(he) 糖(tang)代(dai)謝

正式測(ce)定前務必取 2-3 個預(yu)期(qi)差(cha)異較(jiao)大(da)的(de)樣(yang)本做(zuo)預(yu)測(ce)定測定意(yi)義：

糖化酶，即(ji)葡(pu)萄(tao)糖澱fen酶（EC3.2.1.3），又(you)稱(cheng)γ-澱fen酶，是壹種外切(qie)型(xing)糖(tang)苷(gan)酶，它從(cong)澱粉(fen)的(de)非還原(yuan)性末(mo)端水(shui)解α-1,4 糖苷鍵(jian)和α-1,6 糖苷(gan)鍵(jian)，將(jiang)澱粉(fen)wan全水解為(wei)葡萄(tao)糖，因(yin)此廣(guang)泛的(de)應(ying)用(yong)於(yu)酒(jiu)精(jing)、白(bai)酒(jiu)、抗生(sheng)素(su)、氨(an)基酸、有機(ji)酸，甘油(you)，澱粉(fen)糖(tang)等工(gong)業中，是我國(guo)重要(yao)的(de)工(gong)業酶制(zhi)劑之(zhi)壹。

測定原(yuan)理：

糖化酶水解(jie)可(ke)溶(rong)性澱粉(fen)生(sheng)成葡萄(tao)糖，與 3,5-二硝基水楊酸生成紅棕(zong)色化合(he)物，在(zai) 540nm 處有最(zui)大(da)光吸(xi)收(shou)，在(zai)壹定範圍(wei)內(nei)反(fan)應(ying)液(ye)顏(yan)色深(shen)淺(qian)與葡(pu)萄(tao)糖的(de)量成正比(bi)，可(ke)測(ce)定計算(suan)得糖(tang)化(hua)酶的(de)活(huo)力(li)。

組成：

自備儀(yi)器(qi)和用(yong)品(pin)：

天(tian)平、低(di)溫離心機(ji)、研(yan)缽、可(ke)見(jian)分光(guang)光(guang)度計/酶標儀(yi)、微(wei)量石(shi)英比(bi)色皿(min)/96 孔板(ban)、恒(heng)溫水(shui)浴(yu)鍋(guo)。

酶液提(ti)取(qu)：

組織(zhi)：按照質量（g）：提取(qu)液體積(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比(bi)例（建議稱(cheng)取(qu)約 0.1g，加入 1ml 提(ti)取液）加入提(ti)取液，冰(bing)浴(yu)勻漿(jiang)後(hou)於 4℃，10000g 離心 10min，取(qu)上清置於冰上待(dai)測(ce)。

細(xi)胞：按照細(xi)胞數量（104 個）：提(ti)取液(ye)體積（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比(bi)例（建議 500 萬(wan)細(xi)胞加入 1ml提(ti)取液），冰(bing)浴(yu)超(chao)聲波(bo)破碎細(xi)胞（功率(lv) 300w，超(chao)聲 3 秒(miao)，間隔(ge) 7 秒，總(zong)時(shi)間(jian) 3min）；然後(hou) 4℃，10000g離心 10min，取(qu)上清置於冰上待(dai)測(ce)。

培養液或(huo)其它(ta)液(ye)體：直接(jie)檢(jian)測。

測定操作(zuo)：

酶活(huo)性(xing)計算(suan)公式(shi)：

標準(zhun)曲(qu)線(xian)：y = 0.2164x - 0.0182，R² = 0.9992

用(yong)微(wei)量石(shi)英比(bi)色皿(min)測定(ding)的(de)計算(suan)公式(shi)如下(xia)

按照蛋白(bai)含量計算(suan)

酶活(huo)性(xing)定義：在 40℃，pH4.6 條(tiao)件(jian)下(xia)，每(mei)毫克蛋白(bai)每分鐘(zhong)分解(jie)可(ke)溶(rong)性澱粉(fen)產(chan)生 1mg 葡(pu)萄(tao)糖所需(xu)的(de)酶量為(wei)壹個酶活(huo)力(li)單位(wei)。

糖化酶活(huo)性(xing)（U/mg prot）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V 反總(zong)÷（V 樣(yang)×Cpr）÷T

= 2.54×（△A+0.0182）÷ Cpr

按照樣(yang)本質量計算(suan)

酶活(huo)性(xing)定義：在 40℃，pH4.6 條(tiao)件(jian)下(xia)，每(mei)克組織(zhi)每分(fen)鐘(zhong)分解(jie)可(ke)溶(rong)性澱粉(fen)產(chan)生 1mg 葡(pu)萄(tao)糖所需(xu)的(de)酶量為(wei)壹個酶活(huo)力(li)單位(wei)。

糖化酶活(huo)性(xing)（U/g）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V 反總(zong)÷（W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)）÷T

= 2.54×（△A+0.0182）÷ W

按照液體體積計算

酶活(huo)性(xing)定義：在 40℃，pH4.6 條(tiao)件(jian)下(xia)，每(mei)毫升(sheng)培養液每(mei)分鐘(zhong)分解(jie)可(ke)溶(rong)性澱粉(fen)產(chan)生 1mg 葡(pu)萄(tao)糖所需(xu)的(de)酶量為(wei)壹個酶活(huo)力(li)單位(wei)。

糖化酶活(huo)性(xing)（U/ml）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V 反總(zong)÷V 樣(yang)÷T

= 2.54×（△A+0.0182）

按照細(xi)胞數量計算(suan)

酶活(huo)性(xing)定義：在 40℃，pH4.6 條(tiao)件(jian)下(xia)，每(mei) 10⁴ 個細(xi)胞每(mei)分(fen)鐘(zhong)分解(jie)可(ke)溶(rong)性澱粉(fen)產(chan)生 1mg 葡(pu)萄(tao)糖所需(xu)的(de)酶量為(wei)壹個酶活(huo)力(li)單位(wei)。

糖化酶活(huo)性(xing)（U/10⁴cell）=（△A+0.0182）÷ 0.2164×V 反總(zong)÷（V 樣(yang)×細(xi)胞數量（萬個）÷V 樣(yang)總(zong)）÷T

= 2.54×（△A+0.0182）÷ 細(xi)胞數量（萬個）

V 反總(zong)：反應(ying)總(zong)體積，0.11ml，V 樣(yang)：反應(ying)體系(xi)中加入樣(yang)本體積，0.01ml；V 樣(yang)總(zong)：加入提(ti)取液體積，1ml；

Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)濃(nong)度，mg/ml；W：樣(yang)本質量，g；T：反應(ying)時(shi)間(jian)，20min

用(yong) 96 孔板(ban)測(ce)定的(de)計算(suan)公式(shi)如下(xia)

標準(zhun)曲(qu)線(xian)：y = 0.1082x - 0.0182，R² = 0.9992

按照蛋白(bai)含量計算(suan)

酶活(huo)性(xing)定義：在 40℃，pH4.6 條(tiao)件(jian)下(xia)，每(mei)毫克蛋白(bai)每分鐘(zhong)分解(jie)可(ke)溶(rong)性澱粉(fen)產(chan)生 1mg 葡(pu)萄(tao)糖所需(xu)的(de)酶量為(wei)壹個酶活(huo)力(li)單位(wei)。

糖化酶活(huo)性(xing)（U/mg prot）=（△A+0.0182）÷ 0.1082×V 反總(zong)÷（V 樣(yang)×Cpr）÷T

= 5.08×（△A+0.0182）÷ Cpr

按照樣(yang)本質量計算(suan)

酶活(huo)性(xing)定義：在 40℃，pH4.6 條(tiao)件(jian)下(xia)，每(mei)克組織(zhi)每分(fen)鐘(zhong)分解(jie)可(ke)溶(rong)性澱粉(fen)產(chan)生 1mg 葡(pu)萄(tao)糖所需(xu)的(de)酶量為(wei)壹個酶活(huo)力(li)單位(wei)。

糖化酶活(huo)性(xing)（U/g）=（△A+0.0182）÷ 0.1082×V 反總(zong)÷（W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)）÷T

= 5.08×（△A+0.0182）÷ W

按照液體體積計算

酶活(huo)性(xing)定義：在 40℃，pH4.6 條(tiao)件(jian)下(xia)，每(mei)毫升(sheng)培養液每(mei)分鐘(zhong)分解(jie)可(ke)溶(rong)性澱粉(fen)產(chan)生 1mg 葡(pu)萄(tao)糖所需(xu)的(de)酶量為(wei)壹個酶活(huo)力(li)單位(wei)。

糖化酶活(huo)性(xing)（U/ml）=（△A+0.0182）÷ 0.1082×V 反總(zong)÷V 樣(yang)÷T

= 5.08×（△A+0.0182）

按照細(xi)胞數量計算(suan)

酶活(huo)性(xing)定義：在 40℃，pH4.6 條(tiao)件(jian)下(xia)，每(mei) 10⁴ 個細(xi)胞每(mei)分(fen)鐘(zhong)分解(jie)可(ke)溶(rong)性澱粉(fen)產(chan)生 1mg 葡(pu)萄(tao)糖所需(xu)的(de)酶量為(wei)壹個酶活(huo)力(li)單位(wei)。

糖化酶活(huo)性(xing)（U/10⁴cell）=（△A+0.0182）÷ 0.1082×V 反總(zong)÷（V 樣(yang)×細(xi)胞數量（萬個）÷V 樣(yang)總(zong)）÷T

= 5.08×（△A+0.0182）÷ 細(xi)胞數量（萬個）

V 反總(zong)：反應(ying)總(zong)體積，0.11ml，V 樣(yang)：反應(ying)體系(xi)中加入樣(yang)本體積，0.01ml；V 樣(yang)總(zong)：加入提(ti)取液體積，1ml；

Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白(bai)濃(nong)度，mg/ml；W：樣(yang)本質量，g；T：反應(ying)時(shi)間(jian)，20min

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：

滅活(huo)樣(yang)本的(de)制(zhi)備建議將(jiang)樣(yang)本放(fang)在沸(fei)水(shui)浴(yu)中煮沸(fei) 10min，以將(jiang)酶徹(che)di滅活(huo)。

測定之(zhi)前進行預(yu)實驗，若(ruo)吸光(guang)值(zhi)較(jiao)高，請將(jiang)樣(yang)品用(yong)提(ti)取(qu)液(ye)進行適(shi)當的(de)稀(xi)釋再測定(ding)，並在計算公式(shi)中乘以稀(xi)釋倍(bei)數。

糖化酶試劑盒(he) 糖(tang)代(dai)謝