6PG (Glucose-6-phosphate，葡萄糖-6-磷酸，又稱(cheng) 6-磷酸葡萄糖)，是糖酵(jiao)解(jie)和磷酸戊糖(tang)途(tu)徑的中間產物，廣(guang)泛存在(zai)於(yu)動植(zhi)物體(ti)和(he)微(wei)生物中。
葡萄糖-6-磷酸含量(liang)測定試(shi)劑(ji)盒 糖(tang)酵解(jie)

葡萄糖-6-磷酸(Glucose 6-phosphate， 6P G)含量(liang)測定試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)

微(wei)量(liang)法(fa) 100 管(guan)/48 樣

葡萄糖-6-磷酸含量(liang)測定試(shi)劑(ji)盒 糖(tang)酵解(jie)

正式(shi)測(ce)定前(qian)務必取 2-3 個預期(qi)差(cha)異較(jiao)大的樣本(ben)做(zuo)預測定測(ce)定意(yi)義(yi)：

6PG (Glucose-6-phosphate，葡萄糖-6-磷酸，又稱(cheng) 6-磷酸葡萄糖)，是糖酵(jiao)解(jie)和磷酸戊糖(tang)途(tu)徑的中間產物，廣(guang)泛存在(zai)於(yu)動植(zhi)物體(ti)和(he)微(wei)生物中。在糖(tang)酵(jiao)解(jie)的第壹(yi)步反應(ying)中(zhong)，葡萄糖被(bei)己(ji)糖(tang)激酶催(cui)化(hua)生成(cheng)葡萄糖-6-磷酸，然(ran)後通(tong)過(guo)磷酸葡萄糖異構酶的催化(hua)形成(cheng)果糖(tang)-6-磷酸，以繼(ji)續糖(tang)酵解(jie)的其它(ta)步驟(zhou)；而在戊糖磷酸途徑中(zhong)，葡萄糖-6-磷酸是其(qi)第(di)壹個底(di)物(wu)，該過(guo)程(cheng)也是生成(cheng) NADPH 的主要(yao)途徑。此(ci)外(wai)，葡萄糖-6-磷酸也能轉(zhuan)化(hua)形成(cheng)糖原(yuan)或澱(dian)粉而被(bei)儲(chu)存起(qi)來(lai)。

測定原(yuan)理(li)：

6-磷酸葡萄糖脫氫酶可(ke)催化(hua) 6PG 和NADP⁺生成(cheng) 6 磷酸葡萄糖酸和NADPH，NADPH 在 1-mPMS 的作用下使WST-8 顯橙黃(huang)色，在(zai) 450 nm 下測定吸(xi)光(guang)值(zhi)。

組(zu)成(cheng)：

自備(bei)儀器(qi)和用品：

酶標(biao)儀、臺(tai)式(shi)離(li)心機(ji)、可(ke)調(tiao)式(shi)移(yi)液(ye)器、96 孔板、研(yan)缽、冰、蒸餾水(shui)。

6PG 提(ti)取：

1、細菌或(huo)培(pei)養細(xi)胞(bao)：先(xian)收(shou)集細菌或(huo)細(xi)胞到離心管(guan)內，離心後(hou)棄上清；按照(zhao)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞數(shu)量(liang)（104 個）：提(ti)取液(ye)體(ti)積（ml）為 500~1000：1 的比(bi)例(li)（建(jian)議 500 萬細菌或(huo)細(xi)胞加入 1ml 提(ti)取液(ye)），超(chao)聲(sheng)波(bo)破(po)碎（冰浴，功率 20％或(huo) 200W，超(chao)聲(sheng) 3s，間隔 10s，重(zhong)復(fu) 30 次(ci)）， 8000g，25℃離(li)心 10min，取上(shang)清待(dai)測。

2、組(zu)織(zhi)：按照(zhao)組(zu)織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取液(ye)體(ti)積(ml)為 1：5~10 的比(bi)例(li)（建(jian)議稱(cheng)取約(yue) 0.1g 組(zu)織(zhi)，加入 1ml 提(ti)取液(ye)），進行冰浴勻(yun)漿，8000g，25℃離(li)心 10min，取上(shang)清待(dai)測。

3、血清（漿(jiang)）等液(ye)體(ti)樣(yang)品(pin)：直(zhi)接測定。

測定步(bu)驟(zhou)：

1、酶標(biao)儀預(yu)熱(re) 30min 以上，調(tiao)節波長(chang)至 450nm。

2、試劑二的配制(zhi)：臨用前加入 3ml 水(shui)充(chong)分溶解(jie)待用，用不完的試劑(ji)分裝後(hou)-20℃保存；

3、工作液(ye)的配制(zhi)：臨用前按(an)照(zhao)樣本(ben)數(shu)量(liang)，按以(yi)下比(bi)例(li)配制(zhi)工作液(ye)

樣本(ben)測(ce)定

按下表(biao)在(zai) 96 孔(kong)板(ban)中加入如下試劑

37℃避光(guang)孵育(yu) 30min，450nm 下測定吸(xi)光(guang)值(zhi) A 測(ce)定與(yu)A 對(dui)照(zhao)，△A=A 測(ce)定-A 對(dui)照(zhao)。每(mei)個(ge)測定管(guan)需(xu)設壹(yi)個對(dui)照(zhao)管(guan)。

6PG 含量(liang)計算(suan)：

1、標準(zhun)條(tiao)件(jian)下測定回歸(gui)方程(cheng)為 y = 3.8589x - 0.0016，R2 = 0.997； x 為 6PG 含量(liang)（μmol/ml），y 為吸(xi)光(guang)值(zhi)。

2、按照血(xue)清（漿）體(ti)積計算(suan)

6PG 含量(liang)（nmol/ml）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷V1×1000

=259.1×(△A+0.0016)

3、按照蛋白濃度(du)計算(suan)

6PG 含量(liang)（nmol/mg prot）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷(V1×Cpr)×1000

=259.1×(△A+0.0016) ÷Cpr

4、按照樣(yang)品質(zhi)量(liang)計算(suan)

6PG 含量(liang)（nmol/g 鮮重(zhong)）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷(W ×V1÷V2）×1000

=259.1×(△A+0.0016) ÷W

3、按照細(xi)菌或(huo)細(xi)胞密(mi)度計算(suan)

6PG 含量(liang)（nmol/104 cell）= [(△A+0.0016)÷3.8589×V1]÷（500×V1÷V2）×1000

=0.518×(△A+0.0016)

V1：加入反應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)樣本(ben)體(ti)積，0.05ml；V2：加入提(ti)取液(ye)體(ti)積，1 ml； Cpr：樣本(ben)蛋白質(zhi)濃度(du)，mg/ml； W：樣本(ben)質(zhi)量(liang)，g；500：細菌或(huo)細(xi)胞總(zong)數(shu)，500 萬(wan)；1000，μmol 到nmol 的換算系數(shu)。

葡萄糖-6-磷酸含量(liang)測定試(shi)劑(ji)盒 糖(tang)酵解(jie)