S-NAG 分(fen)解(jie)β-N-乙酰(xian)氨(an)基葡(pu)萄糖(tang)苷生成對(dui)-硝基(ji)ben酚，後(hou)者(zhe)在 400nm 有(you)最大(da)吸(xi)收峰(feng)，通過測定(ding)吸光(guang)值升(sheng)高(gao)速率(lv)來(lai)計(ji)算(suan)NAG 活(huo)性。
土(tu)壤(rang)N-乙(yi)酰-β-D-葡(pu)萄糖(tang)苷酶(mei)試劑(ji)盒

土壤(rang)N-乙酰(xian)-β-D-葡(pu)萄糖(tang)苷酶(mei)（Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase, S-NAG）試劑(ji)盒說明(ming)書(shu)

微(wei)量法 100 管/48 樣(yang)

土壤(rang)N-乙(yi)酰-β-D-葡(pu)萄糖(tang)苷酶(mei)試劑(ji)盒

正式測定(ding)前務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個預(yu)期(qi)差(cha)異(yi)較大(da)的(de)樣本做(zuo)預(yu)測定(ding)測定(ding)意(yi)義：

S-NAG 是溶酶體(ti)中的(de)壹(yi)種(zhong)酸性水(shui)解(jie)酶，由(you)土壤(rang)微(wei)生物分(fen)泌。S-NAG 活(huo)性變化與機(ji)體(ti)某些病理狀態密(mi)切相(xiang)關(guan)。

測定(ding)原理：

S-NAG 分(fen)解(jie)β-N-乙酰(xian)氨(an)基葡(pu)萄糖(tang)苷生成對(dui)-硝基(ji)ben酚，後(hou)者(zhe)在 400nm 有(you)最大(da)吸(xi)收峰(feng)，通過測定(ding)吸光(guang)值升高(gao)速率(lv)來(lai)計(ji)算(suan)NAG 活(huo)性。

試劑(ji)組(zu)成和(he)配制：

試劑(ji)二：粉(fen)劑(ji)×1 瓶(ping)，-20℃保存(cun)；臨用(yong)前加入 10ml 蒸餾水，充分(fen)溶解(jie)備(bei)用(yong)，用不完(wan)的(de)試劑(ji)仍(reng)-20℃保存(cun)。

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和(he)用品(pin)：

可見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶(mei)標儀(yi)、臺(tai)式離(li)心(xin)機(ji)、水(shui)浴(yu)鍋(guo)、可調(tiao)式移(yi)液器(qi)、微(wei)量石(shi)英(ying)比(bi)色(se)皿(min)/96 孔(kong)板、甲(jia)苯（不(bu)允許(xu)快遞）和蒸餾水。

樣品(pin)處理：

新(xin)鮮(xian)土(tu)樣自(zi)然風幹或 37 度(du)烘(hong)箱(xiang)風幹(gan)，過 30~50 目篩。

測定(ding)步(bu)驟(zhou)：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)或酶標(biao)儀(yi)預(yu)熱(re) 30min 以上，調(tiao)節波(bo)長至 400nm，蒸餾水調(tiao)零。

2、加樣表：

混勻(yun)， 37℃振(zhen)蕩反(fan)應 1h 後(hou)，90℃水(shui)浴(yu) 5min（蓋(gai)緊，防(fang)止(zhi)水分(fen)散失），流水(shui)冷(leng)卻， 10000g 25℃離(li)心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)液(ye)（在 EP 管或 96 孔(kong)板中加入下(xia)列(lie)試劑）；

充分(fen)混勻(yun)，室溫(wen)靜(jing)置 2min 後(hou)， 400nm 處測定(ding)吸光(guang)值A，計(ji)算(suan)ΔA=A 測定(ding)管-A 對照(zhao)管。每(mei)個(ge)測定(ding)管設(she)

壹(yi)個(ge)對照管。

S-NAG 活(huo)力(li)計(ji)算(suan)：

用微(wei)量石(shi)英(ying)比(bi)色(se)皿(min)測定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式(shi)如下(xia)

標準(zhun)條(tiao)件下(xia)測定(ding)的(de)回歸(gui)方程為y = 0.00645x -0.0054；x 為標準(zhun)品(pin)濃度(du)（μmol/L），y 為吸光(guang)值。單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義：每(mei)天(tian)每(mei) g 土(tu)樣中產(chan)生 1 μmol 對-硝(xiao)基ben酚定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。

S-NAG 活(huo)力(li)（μmol/d/g 土(tu)樣(yang)）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V 反總(zong)÷W÷T =55.81×(ΔA+0.0054)

T：反應(ying)時間(jian)，1h=1/24d； V 反總(zong)：反應(ying)體系總體(ti)積(ji)：3×10-4 L；W：樣本質量，0.02g。

用 96 孔(kong)板測定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式(shi)如下(xia)

標準(zhun)條(tiao)件下(xia)測定(ding)的(de)回歸(gui)方程為y = 0.0043x -0.0054；x 為標準(zhun)品(pin)濃度(du)（μmol/L），y 為吸光(guang)值。單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義：每(mei)天(tian)每(mei) g 土(tu)樣中產(chan)生 1 μmol 對-硝(xiao)基ben酚定(ding)義為壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單(dan)位(wei)。

S-NAG 活(huo)力(li)（μmol/d/g 土(tu)樣(yang)）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.0043×V 反總(zong)÷W÷T =83.72×(ΔA+0.0054)

T：反應(ying)時間(jian)，1h=1/24d； V 反總(zong)：反應(ying)體系總體(ti)積(ji)：3×10-4 L；W：樣本質量，0.02g。mol/mg prot

土壤(rang)N-乙(yi)酰-β-D-葡(pu)萄糖(tang)苷酶(mei)試劑(ji)盒