土壤(rang)磷(lin)酸(suan)酶是(shi)壹類(lei)催(cui)化(hua)土壤(rang)有(you)機(ji)磷(lin)化(hua)合物(wu)礦(kuang)化的(de)酶(mei)，其活(huo)性(xing)的(de)高(gao)低直接影響(xiang)著(zhe)土壤(rang)中(zhong)有(you)機(ji)磷(lin)的(de)分(fen)解轉化(hua)及(ji)其(qi)生(sheng)物(wu)有(you)效(xiao)性，是(shi)評價(jia)土壤(rang)磷(lin)素生物轉化(hua)方向與(yu)強度(du)的(de)指(zhi)標(biao)。土壤(rang)磷(lin)酸(suan)酶受(shou)到(dao)土壤(rang)碳、氮(dan)含(han)量、有(you)效(xiao)磷(lin)含(han)量和pH 顯著影響(xiang)。通(tong)常(chang)按照(zhao)其(qi)最(zui)適(shi) pH 範圍，分(fen)為堿性(xing)、中(zhong)性和酸(suan)性三種(zhong)類(lei)型(xing)磷(lin)酸(suan)酶。
土壤(rang)堿性(xing)磷(lin)酸(suan)酶活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試劑盒

土壤(rang)堿性(xing)磷(lin)酸(suan)酶（S-AKP/ALP）活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試劑盒說(shuo)明書

微(wei)量法 100T/96S

土壤(rang)堿性(xing)磷(lin)酸(suan)酶活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試劑盒

正式測(ce)定(ding)前務(wu)必取(qu) 2-3 個預(yu)期差(cha)異(yi)較大的(de)樣(yang)本做預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義(yi)：

土壤(rang)磷(lin)酸(suan)酶是(shi)壹類(lei)催(cui)化(hua)土壤(rang)有(you)機(ji)磷(lin)化(hua)合物(wu)礦(kuang)化的(de)酶(mei)，其活(huo)性(xing)的(de)高(gao)低直接影響(xiang)著(zhe)土壤(rang)中(zhong)有(you)機(ji)磷(lin)的(de)分(fen)解轉化(hua)及(ji)其(qi)生(sheng)物(wu)有(you)效(xiao)性，是(shi)評價(jia)土壤(rang)磷(lin)素生物轉化(hua)方向與(yu)強度(du)的(de)指(zhi)標(biao)。土壤(rang)磷(lin)酸(suan)酶受(shou)到(dao)土壤(rang)碳、氮(dan)含(han)量、有(you)效(xiao)磷(lin)含(han)量和pH 顯著影響(xiang)。通(tong)常(chang)按照(zhao)其(qi)最(zui)適(shi) pH 範圍，分(fen)為堿性(xing)、中(zhong)性和酸(suan)性三種(zhong)類(lei)型(xing)磷(lin)酸(suan)酶。

測(ce)定(ding)原(yuan)理：

堿性(xing)環(huan)境(jing)中(zhong)，S-AKP/ALP 催(cui)化(hua)磷(lin)酸(suan)苯er鈉(na)水解生成ben酚和磷(lin)酸(suan)氫er鈉(na)，通(tong)過測(ce)定(ding)酚的(de)生(sheng)成量即可計(ji)算出(chu) S-AKP/ALP 活性(xing)。

試劑組(zu)成和配(pei)制：

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。用(yong)前加(jia) 100ml 蒸(zheng)餾水充分(fen)溶解。

試劑四(si)：粉劑×1 瓶，4℃避光(guang)保存。臨(lin)用(yong)前加(jia) 576μl 無水乙(yi)醇（自備），24μl 蒸(zheng)餾水充分(fen)溶解。（變褐色(se)後(hou)不能再(zai)使用）。

標(biao)準品(pin)：液體×1 瓶，0.5μmol/ml ben酚標(biao)準液，4℃保存。

自備(bei)儀(yi)器和用品(pin)：

可見(jian)光(guang)度(du)計(ji)/酶標(biao)儀、微(wei)量玻璃(li)比色(se)皿/96 孔(kong)板(ban)、臺(tai)式離心(xin)機(ji)、37℃恒溫培(pei)養(yang)箱、分(fen)析天(tian)平(ping)、可(ke)調式移(yi)液器、冰(bing)、蒸(zheng)餾水、無(wu)水乙(yi)醇和甲苯。

催(cui)化(hua)反(fan)應：

稱取(qu)風幹混勻(yun)土壤(rang)約 0.1g，加(jia)入(ru) 50μl 甲苯（自(zi)備(bei)），輕搖 15min；加 400μl 試(shi)劑壹(yi)並(bing)且(qie)搖(yao)勻(yun)後(hou)，置於37℃恒溫培(pei)養(yang)箱，開始計(ji)時(shi)，催(cui)化(hua)反(fan)應 24h；到(dao)時(shi)後(hou)迅速加入(ru) 1ml 試(shi)劑二充分(fen)混勻(yun)，以終止酶催(cui)化(hua)的(de)反(fan)應。

8000g，25℃離心(xin) 10min，取(qu)上清液置於冰(bing)上待測(ce)。

顯色(se)反(fan)應：

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)/酶標(biao)儀預(yu)熱(re) 30 min，調節(jie)波(bo)長(chang)到(dao) 660 nm，蒸(zheng)餾水調零。

空白(bai)管(guan)：取(qu)微(wei)量玻璃(li)比色(se)皿/酶標(biao)板，加(jia)入(ru) 10μl 蒸(zheng)餾水，20μl 試(shi)劑三，4μl 試劑四(si)，充分(fen)混勻(yun)，顯色(se)後(hou)再加(jia)蒸(zheng)餾水 166μl，混(hun)勻(yun)後(hou) 25℃靜(jing)置 30 min，於 660 nm 測(ce)定(ding)吸光(guang)度(du)，記(ji)為A 空(kong)白管(guan)。

標(biao)準管(guan)：微(wei)量玻璃(li)比色(se)皿/酶標(biao)板，加(jia)入(ru) 10μl 標(biao)準液，20μl 試劑三，4μl 試劑四(si)，充分(fen)混勻(yun)，顯色(se)後(hou)再加(jia)蒸(zheng)餾水 166μl，混(hun)勻(yun)後(hou) 25℃靜(jing)置 30 min，於 660 nm 測(ce)定(ding)吸光(guang)度(du)，記(ji)為A 標(biao)準管(guan)。

測(ce)定(ding)管(guan)：微(wei)量玻璃(li)比色(se)皿/酶標(biao)板，加(jia)入(ru) 10μl 上清液，20μl 試劑三，4μl 試劑四(si)，充分(fen)混勻(yun)，顯色(se)後(hou)再加(jia)蒸(zheng)餾水 166μl，混(hun)勻(yun)後(hou) 25℃靜(jing)置 30 min，於 660 nm 測(ce)定(ding)吸光(guang)度(du)，記(ji)為A 測(ce)定(ding)管(guan)。

註意(yi)事項：

空白(bai)管(guan)和標(biao)準管(guan)只需(xu)測(ce)定(ding)壹次(ci)。

S-ALP 活性(xing)計(ji)算公(gong)式：

活性(xing)單位(wei)定義(yi)：37℃中(zhong)每克土壤(rang)每天(tian)釋放 1μmol 酚為 1 個酶(mei)活單位(wei)。

S-AKP/ALP（μmol/d/g 土樣）=[C 標(biao)準液×(A 測(ce)定(ding)管(guan)－A 空白(bai)管(guan))÷(A 標(biao)準管(guan)－A 空白(bai)管(guan))]×V 總(zong)÷W÷T

= 0.725×(A 測(ce)定(ding)管(guan)－A 空白(bai)管(guan))÷(A 標(biao)準管(guan)－A 空白(bai)管(guan))÷W

C 標(biao)準液：0.5μmol/ml；V 總(zong)：催(cui)化(hua)體(ti)系(xi)總(zong)體(ti)積(ji)，1.45ml；W：土壤(rang)樣品(pin)質(zhi)量，g；T：催(cui)化(hua)反(fan)應時(shi)間(jian)，24 h=1 d。

土壤(rang)堿性(xing)磷(lin)酸(suan)酶活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)試劑盒