土壤(rang)磷酸酶是(shi)催(cui)化(hua)土壤(rang)有(you)機(ji)磷礦化(hua)的酶(mei)，其(qi)活性的高(gao)低直接(jie)影(ying)響(xiang)著(zhe)土壤(rang)中(zhong)有(you)機(ji)磷的分(fen)解(jie)轉化(hua)及(ji)其(qi)生物有(you)效性，是評(ping)價(jia)土壤(rang)磷素生物(wu)轉化(hua)方向(xiang)與(yu)強(qiang)度(du)的(de)指標。磷酸酶活(huo)性受到土壤(rang)碳(tan)、氮(dan)含(han)量(liang)、有(you)效磷含量和 pH的(de)顯(xian)著(zhu)影(ying)響(xiang)，根據(ju)最適PH 範(fan)圍(wei)，壹(yi)般(ban)把(ba)土壤(rang)磷酸酶分(fen)為中(zhong)性、酸性和堿(jian)性三種類型。
土壤(rang)中(zhong)性磷酸酶S-NP活(huo)性測定試(shi)劑盒

土壤(rang)中(zhong)性磷酸酶（S-NP）活(huo)性測定試(shi)劑盒說明書(shu)

微量(liang)法 100T/96S

土壤(rang)中(zhong)性磷酸酶S-NP活(huo)性測定試(shi)劑盒

正(zheng)式測(ce)定前(qian)務必(bi)取(qu) 2-3 個預(yu)期差異較(jiao)大(da)的樣本做預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義：

土壤(rang)磷酸酶是(shi)催(cui)化(hua)土壤(rang)有(you)機(ji)磷礦化(hua)的酶(mei)，其(qi)活性的高(gao)低直接(jie)影(ying)響(xiang)著(zhe)土壤(rang)中(zhong)有(you)機(ji)磷的分(fen)解(jie)轉化(hua)及(ji)其(qi)生物有(you)效性，是評(ping)價(jia)土壤(rang)磷素生物(wu)轉化(hua)方向(xiang)與(yu)強(qiang)度(du)的(de)指標。磷酸酶活(huo)性受到土壤(rang)碳(tan)、氮(dan)含(han)量(liang)、有(you)效磷含量和 pH的顯(xian)著(zhu)影(ying)響(xiang)，根據(ju)最適PH 範(fan)圍(wei)，壹(yi)般(ban)把(ba)土壤(rang)磷酸酶分(fen)為中(zhong)性、酸性和堿(jian)性三種類型。

測定(ding)原(yuan)理(li)：

中(zhong)性環(huan)境(jing)中(zhong)，S-NP 催化(hua)磷酸苯(ben)er鈉(na)水解(jie)生(sheng)成(cheng)ben酚和磷酸氫er鈉(na)，通(tong)過(guo)測(ce)定(ding)酚的(de)生(sheng)成量(liang)即(ji)可(ke)計(ji)算(suan)出(chu)NP活性。

試(shi)劑組成和配(pei)制：

試(shi)劑二：粉(fen)劑×1 瓶，4℃保(bao)存(cun)。用(yong)前(qian)加(jia) 100ml 蒸餾(liu)水充(chong)分(fen)溶解(jie)。

試(shi)劑四(si)：粉(fen)劑×1 瓶，4℃避(bi)光保(bao)存(cun)。臨(lin)用(yong)前(qian)加(jia) 576μl 無水乙醇（自備(bei)），24μl 蒸(zheng)餾(liu)水充(chong)分(fen)溶解(jie)。（變(bian)褐(he)色後(hou)不能(neng)再(zai)使(shi)用(yong)）。

標準品：液(ye)體×1 瓶，0.5 μmol/ml 酚標準液(ye)，4℃保存(cun)。

自備(bei)儀(yi)器(qi)和用(yong)品：

可見(jian)分(fen)光光度(du)計(ji)/酶(mei)標儀(yi)、微(wei)量(liang)玻(bo)璃比色皿/96 孔(kong)板(ban)、臺(tai)式離(li)心機(ji)、37℃恒(heng)溫(wen)培(pei)養(yang)箱(xiang)、分(fen)析(xi)天平(ping)、可調式移(yi)液(ye)器、冰(bing)、蒸餾(liu)水、乙醇和甲苯(ben)。

催化(hua)反應(ying)：

稱取(qu)風(feng)幹混(hun)勻土壤(rang)約 0.1g，加(jia)入(ru) 50μl 甲苯(ben)（自(zi)備(bei)），輕(qing)搖(yao) 15min；加(jia) 400μl 試(shi)劑壹(yi)並(bing)且(qie)搖勻後(hou)，置(zhi)於(yu)37℃恒(heng)溫(wen)培(pei)養(yang)箱(xiang)，開始(shi)計(ji)時(shi)，催化(hua)反應(ying) 24h；到(dao)時(shi)後(hou)迅速(su)加入(ru) 1ml 試(shi)劑二充(chong)分(fen)混(hun)勻，以(yi)終止酶(mei)催化(hua)的反(fan)應(ying)。

8000g，25℃離心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清液(ye)置(zhi)於(yu)冰(bing)上待測(ce)。

顯(xian)色反應(ying)：

分(fen)光光度(du)計(ji)預(yu)熱(re) 30 min 以(yi)上(shang)，調節(jie)波(bo)長到(dao) 660 nm，蒸餾水調零。

空白管(guan)：取(qu)微(wei)量(liang)玻(bo)璃比色皿/酶標板(ban)，加(jia)入(ru) 10μl 蒸餾水，20μl 試(shi)劑三，4μl 試(shi)劑四(si)，充(chong)分(fen)混(hun)勻，顯(xian)色後(hou)再(zai)加蒸(zheng)餾水 166μl，混(hun)勻後(hou) 25℃靜置(zhi) 30min，於(yu) 660nm 測(ce)定吸光度，記為 A 空白管(guan)。

標準管：取(qu)微(wei)量(liang)玻(bo)璃比色皿/酶標板(ban)，加(jia)入(ru) 10μl 標準液(ye)，20μl 試(shi)劑三，4μl 試(shi)劑四(si)，充(chong)分(fen)混(hun)勻，顯(xian)色後(hou)再(zai)加蒸(zheng)餾水 166μl，混(hun)勻後(hou) 25℃靜置(zhi) 30 min，於(yu) 660nm 測(ce)定吸光度，記為 A 標準管。

測定(ding)管：取(qu)微(wei)量(liang)玻(bo)璃比色皿/酶標板(ban)，加(jia)入(ru) 10μl 上清液(ye)，20μl 試(shi)劑三，4μl 試(shi)劑四(si)，充(chong)分(fen)混(hun)勻，顯(xian)色後(hou)再(zai)加蒸(zheng)餾水 166μl，混(hun)勻後(hou)室溫(wen) 25℃30 min，於(yu) 660nm 測(ce)定吸光度，記為 A 測(ce)定(ding)管(guan)。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang):

空白管(guan)和標準管只(zhi)需(xu)測(ce)定(ding)壹(yi)次。

使(shi)用(yong)微量石英比色皿測定的計(ji)算(suan)公(gong)式如(ru)下

活性單位定義：37℃中(zhong)每(mei)克(ke)土壤(rang)每(mei)天釋(shi)放 1nmol 酚為 1 個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位。

S-NP（μmol/d/g 土樣）=[C 標準液(ye)×(A 測定(ding)管－A 空白管(guan))÷(A 標準管－A 空白管(guan))]×V 總(zong)÷W÷T

= 0.725×(A 測定(ding)管－A 空白管(guan))÷(A 標準管－A 空白管(guan))÷W

C 標準液(ye)：0.5μmol/ml；V 總：催(cui)化(hua)體系(xi)總(zong)體積，1.45ml；W：土壤(rang)樣品質(zhi)量(liang)，g；T：催(cui)化(hua)反應(ying)時(shi)間，24 h=1 d。

土壤(rang)中(zhong)性磷酸酶S-NP活(huo)性測定試(shi)劑盒