土(tu)壤磷酸(suan)酶(mei)是(shi)壹(yi)類催化(hua)土壤有機磷(lin)礦(kuang)化(hua)的酶(mei)，其(qi)活性的高低直(zhi)接影響(xiang)著土壤中有機(ji)磷(lin)的分解(jie)轉(zhuan)化(hua)及其(qi)生物(wu)有效(xiao)性，是(shi)評價土(tu)壤磷素生物(wu)轉化(hua)方向(xiang)與強(qiang)度(du)的指標。土壤磷酸(suan)酶(mei)受(shou)到(dao)土(tu)壤碳、氮含量、有(you)效(xiao)磷含量和(he)pH 顯著影響(xiang)，根(gen)據(ju)最(zui)適 pH 範圍，通(tong)常(chang)分為(wei)酸(suan)性、中(zhong)性和(he)堿(jian)性三種類型。
土壤酸(suan)性磷(lin)酸(suan)酶(mei)S-ACP活(huo)性測定試劑(ji)盒(he)

土(tu)壤酸(suan)性磷(lin)酸(suan)酶(mei)（S-ACP）活(huo)性測定試劑(ji)盒(he)說明書(shu)

微量法(fa) 100T/96S

土(tu)壤酸(suan)性磷(lin)酸(suan)酶(mei)S-ACP活(huo)性測定試劑(ji)盒(he)

正(zheng)式(shi)測定前(qian)務(wu)必取 2-3 個(ge)預期(qi)差異(yi)較大(da)的樣(yang)本(ben)做(zuo)預測定測定意義：

土(tu)壤磷酸(suan)酶(mei)是(shi)壹(yi)類催化(hua)土壤有機磷(lin)礦(kuang)化(hua)的酶(mei)，其(qi)活性的高低直(zhi)接影響(xiang)著土壤中有機(ji)磷(lin)的分解(jie)轉(zhuan)化(hua)及其(qi)生(sheng)物(wu)有效(xiao)性，是(shi)評價土(tu)壤磷素生物(wu)轉化(hua)方向(xiang)與強(qiang)度(du)的指標。土壤磷酸(suan)酶(mei)受(shou)到(dao)土(tu)壤碳、氮含量、有(you)效(xiao)磷含量和(he)pH 顯著影響(xiang)，根(gen)據(ju)最(zui)適 pH 範圍，通(tong)常(chang)分為(wei)酸(suan)性、中(zhong)性和(he)堿(jian)性三種類型。

測定原(yuan)理(li)：

酸(suan)性環境(jing)中，S-ACP 催化(hua)磷酸(suan)苯er鈉(na)水解(jie)生(sheng)成ben酚和(he)磷酸(suan)氫(qing)er鈉(na)，通過測定酚的生(sheng)成量(liang)即(ji)可計算(suan)出(chu)S-ACP活(huo)性。

試劑(ji)組(zu)成和(he)配(pei)制：

試劑(ji)二(er)：粉(fen)劑(ji)×1 瓶(ping)，4℃保(bao)存(cun)。用(yong)前(qian)加(jia) 100ml 蒸餾水充(chong)分溶解(jie)。

試劑(ji)四：粉(fen)劑(ji)×1 瓶(ping)，4℃避(bi)光保(bao)存(cun)。臨(lin)用(yong)前(qian)加(jia) 576 μl 無(wu)水乙(yi)醇(chun)（自(zi)備(bei)），24 μl 蒸餾水充(chong)分溶解(jie)。（變褐色後不能再使用(yong)）。

標準品：液(ye)體(ti)×1 瓶(ping)，0.5μmol/ml ben酚標準液，4℃保(bao)存(cun)。

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和(he)用(yong)品：

可(ke)見(jian)分光光度(du)計/酶(mei)標儀(yi)、微量玻璃(li)比色皿/96 孔(kong)板、臺(tai)式(shi)離心機(ji)、37℃恒(heng)溫(wen)培養箱、分析(xi)天平(ping)、可(ke)調(tiao)式(shi)移(yi)液器(qi)、冰(bing)、蒸餾水、乙(yi)醇(chun)和(he)甲(jia)苯。

粗(cu)酶液提取：

稱(cheng)取風(feng)幹(gan)混(hun)勻土(tu)壤約 0.1g，加(jia)入 50μl 甲(jia)苯（自(zi)備(bei)），輕搖 15min；加(jia) 0.4 ml 試劑(ji)壹(yi)並且(qie)搖勻後，置(zhi)於37℃恒(heng)溫(wen)培養箱，開始計時(shi)，催化(hua)反應 24h；到(dao)時(shi)後迅(xun)速加(jia)入 1ml 試劑(ji)二(er)充分混(hun)勻，以終(zhong)止(zhi)酶催化(hua)的反應。8000g，25℃離心 10min，取上清液置(zhi)於冰(bing)上待測。

測定步(bu)驟(zhou)：

分光光度(du)計/酶(mei)標儀(yi)預熱(re) 30 min 以上，調(tiao)節波(bo)長到(dao) 660 nm，蒸餾水調(tiao)零(ling)。

空白管：取微量玻璃(li)比色皿/酶(mei)標板，加(jia)入 10μl 蒸餾水，20μl 試劑(ji)三，4μl 試劑(ji)四，充分混(hun)勻，顯色後再加(jia)蒸餾水 166μl，混(hun)勻後 25℃靜(jing)置(zhi) 30 min，於(yu) 660 nm 測定吸(xi)光度(du)，記(ji)為(wei)A 空白管。

標準管：取微量玻璃(li)比色皿/酶(mei)標板，加(jia)入 10μl 標準液，20μl 試劑(ji)三，4μl 試劑(ji)四，充分混(hun)勻，顯色後再加(jia)蒸餾水 166μl，混(hun)勻後 25℃靜(jing)置(zhi) 30 min，於(yu) 660 nm 測定吸(xi)光度(du)，記(ji)為(wei)A 標準管。

測定管：取微量玻璃(li)比色皿/酶(mei)標板，加(jia)入 10μl 上清液，20μl 試劑(ji)三，4μl 試劑(ji)四，充分混(hun)勻，顯色後再加(jia)蒸餾水 166μl，混(hun)勻後 25℃靜(jing)置(zhi) 30 min，於(yu) 660 nm 測定吸(xi)光度(du)，記(ji)為(wei)A 測定管。

註(zhu)意事項:

空白管和標準管只需測定壹(yi)次。

S-ACP 活(huo)性計算(suan)公式(shi)：

活(huo)性單(dan)位定(ding)義：37℃中(zhong)每克土(tu)壤每天釋(shi)放(fang) 1μmol 酚為(wei) 1 個(ge)酶(mei)活(huo)單(dan)位。

S-ACP（μmol/d /g 土(tu)樣(yang)）=[C 標準液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)]×V 總÷W÷T

=0.725×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)÷W

C 標準液：0.5 μmol/ml； V 總(zong)：催化(hua)體(ti)系總體(ti)積(ji)，1.45ml；W：土(tu)壤樣品質(zhi)量，g；T：催化(hua)反應時(shi)間，24h=1 d。

土(tu)壤酸(suan)性磷(lin)酸(suan)酶(mei)S-ACP活(huo)性測定試劑(ji)盒(he)