土壤亞硝(xiao)酸還原酶是(shi)反(fan)硝(xiao)化作用中的(de)關(guan)鍵酶之(zhi)壹，參(can)與(yu)亞硝(xiao)酸鹽(yan)至NO 的(de)還原反(fan)應(ying)，它(ta)的(de)活(huo)性(xing)反(fan)映(ying)了生(sheng)物降(jiang)解(jie)過程(cheng)中氮素的(de)轉化效(xiao)率，為(wei)氮素轉化規(gui)律(lv)的(de)研(yan)究提(ti)供(gong)壹定的(de)依(yi)據。
土壤亞硝(xiao)酸還原酶試劑盒(he)

土壤亞硝(xiao)酸還原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）試劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書(shu)

微(wei)量法(fa) 100T/48S

土壤亞硝(xiao)酸還原酶試劑盒(he)

正式(shi)測定前務(wu)必(bi)取 2-3 個(ge)預期差異(yi)較大的(de)樣(yang)本(ben)做(zuo)預(yu)測定測定意(yi)義(yi)：

土壤亞硝(xiao)酸還原酶是(shi)反(fan)硝(xiao)化作用中的(de)關(guan)鍵酶之(zhi)壹，參(can)與(yu)亞硝(xiao)酸鹽(yan)至NO 的(de)還原反(fan)應(ying)，它(ta)的(de)活(huo)性(xing)反(fan)映(ying)了生(sheng)物降(jiang)解(jie)過程(cheng)中氮素的(de)轉化效(xiao)率，為(wei)氮素轉化規(gui)律(lv)的(de)研(yan)究提(ti)供(gong)壹定的(de)依(yi)據。

測定原理：

亞硝(xiao)酸還原酶可將 NO2—還原為 NO，使(shi)樣品中參(can)與(yu)重(zhong)氮化反(fan)應(ying)生(sheng)成(cheng)紫(zi)紅色(se)化合物的(de) NO2—減少，即 540nm 處吸光值的(de)變(bian)化可(ke)反(fan)應(ying)土壤中亞硝(xiao)酸還原酶的(de)活(huo)性(xing)。

試劑(ji)的(de)組(zu)成(cheng)和(he)配(pei)制：

試劑(ji)二(er)：粉(fen)劑(ji)×1 瓶，4℃保(bao)存。臨用前加 4ml 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)溶解(jie)。

試劑(ji)三(san)：液體(ti) 4ml×1 瓶，4℃保(bao)存。（如(ru)出(chu)現沈(chen)澱(dian)可以(yi) 70-80℃加熱(re)溶(rong)解(jie)）

試劑(ji)四(si)：液體(ti) 10ml×1 瓶，4℃避光保(bao)存。（如(ru)出(chu)現(xian)沈(chen)澱(dian)可以(yi) 70-80℃加熱(re)溶(rong)解(jie)）工作液：臨用前根(gen)據用量將試(shi)劑四和(he)試(shi)劑(ji)五以 1:1 的(de)比例混(hun)合。

自(zi)備(bei)儀器(qi)和(he)用品：

天平、可見(jian)分(fen)光光度(du)計/酶標儀、微(wei)量石(shi)英比色皿(min)/96 孔板(ban)、水(shui)浴(yu)鍋(guo)、低溫離心機(ji)。

樣品(pin)處(chu)理(li)：

新鮮(xian)土樣自(zi)然(ran)風(feng)幹(gan)或 37 度(du)烘(hong)箱(xiang)風(feng)幹(gan)，過(guo) 30~50 目(mu)篩(shai)。

測定操(cao)作表(biao)：

計算(suan)公式：

使(shi)用微(wei)量石(shi)英比色皿(min)測定的(de)計(ji)算(suan)公式如(ru)下(xia)

標準(zhun)曲(qu)線(xian)：y = 1.5562x+ 0.0088，R² = 0.996；x 為標(biao)準(zhun)品(pin)濃度(du)（μmol/ml），y 為吸光值（A 標準管-A空白(bai)管）。

酶活(huo)單(dan)位(wei)定義(yi)：每g 土樣每天(tian)還原 1μmol NO2ˉ 的(de)量為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位(wei)。

S-NiR（μmol /d /g 土樣）=[A 空白(bai)管-(A 測定管-A 對(dui)照管) -0.0088]÷1.5562×V 標÷W÷T

= 0.617×[A 空白(bai)管-(A 測定管-A 對(dui)照管) -0.0088]÷W

T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，1h=1/24d；V 標：標(biao)準(zhun)液體(ti)積(ji)，0.04ml；W：樣本(ben)質(zhi)量，g。

使(shi)用 96 孔板(ban)測定的(de)計(ji)算(suan)公式如(ru)下(xia)

標準(zhun)曲(qu)線(xian)：y = 0.7781x+ 0.0088，R² = 0.996；x 為標(biao)準(zhun)品(pin)濃度(du)（μmol/ml），y 為吸光值（A 標準管-A空白(bai)管）。

酶活(huo)單(dan)位(wei)定義(yi)：每g 土樣每天(tian)還原 1μmol NO2ˉ 的(de)量為(wei)壹個(ge)酶活(huo)力單(dan)位(wei)。

S-NiR（μmol /d /g 土樣）=[A 空白(bai)管-(A 測定管-A 對(dui)照管) -0.0088]÷0.7781×V 標÷W÷T

= 1.234×[A 空白(bai)管-(A 測定管-A 對(dui)照管) -0.0088]÷W

T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，1h=1/24d；V 標：標(biao)準(zhun)液體(ti)積(ji)，0.04ml； W：樣本(ben)質(zhi)量，g。

註意(yi)事(shi)項:

配(pei)制好(hao)的(de)工作液 3 天內(nei)使(shi)用完。

若(ruo)吸光值超過 1.5，將上清(qing)液進行適當的(de)稀釋後(hou)再加入工作液顯色(se)，並(bing)在(zai)計(ji)算公式中乘以稀釋倍(bei)數。

嚴(yan)格(ge)控制顯(xian)色(se)時間，否則(ze)會(hui)對(dui)結果有(you)影(ying)響(xiang)。

標準(zhun)曲(qu)線(xian)線(xian)性範圍(wei)為(wei) 0.03μmol/ml-1.5μmol/ml。

A 空白(bai)管-（A 測定管-A 對(dui)照管）線(xian)性範圍(wei)為(wei) 0.02-1.5。

土壤亞硝(xiao)酸還原酶試劑盒(he)