木質素過(guo)氧化物(wu)酶(mei)催(cui)化天(tian)青脫(tuo)甲(jia)基(ji)，在 651nm 處測定吸(xi)光(guang)值(zhi)減(jian)少(shao)。
輔(fu)酶(mei)ⅡNADP(H)含(han)量(liang)測定試劑盒 其他(ta)系列(lie)

輔(fu)酶(mei)ⅡNADP(H)含(han)量(liang)測定試劑盒(分光(guang)光(guang)度法）

微(wei)量法 100T/96S

輔(fu)酶(mei)ⅡNADP(H)含(han)量(liang)測定試劑盒 其他(ta)系列(lie)

正(zheng)式(shi)測定前務(wu)必取(qu) 2-3 個(ge)預期差異較(jiao)大(da)的樣(yang)本做(zuo)預測定測定意(yi)義：

木(mu)質素過(guo)氧化物(wu)酶(mei)（EC1.11.1.14）是壹種(zhong)含(han)亞鐵(tie)血紅(hong)素的(de)過(guo)氧化物(wu)酶(mei)，屬(shu)於木(mu)質(zhi)素(su)降解酶(mei)系，在木質(zhi)素(su)生(sheng)物(wu)降解、造紙工(gong)業(ye)、紡織(zhi)工(gong)業(ye)、芳(fang)香(xiang)化合(he)物(wu)轉化與降解(jie)及環境汙(wu)染控制(zhi)等方面具有(you)較(jiao)大(da)的應(ying)用(yong)潛力(li)。

測定原理(li)：

木(mu)質素過(guo)氧化物(wu)酶(mei)催(cui)化天(tian)青脫(tuo)甲(jia)基(ji)，在 651nm 處(chu)測定吸(xi)光(guang)值(zhi)減(jian)少(shao)。

試(shi)劑組(zu)成和(he)配(pei)制(zhi)：

試(shi)劑壹(yi)：粉(fen)劑×1 瓶，4℃保(bao)存。臨(lin)用前加(jia)入(ru) 115ml 蒸(zheng)餾(liu)水，充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)待用，用不(bu)完的試(shi)劑 4℃保(bao)存壹(yi)個月(yue)。

需(xu)自(zi)備儀器(qi)和(he)用(yong)品：

天(tian)平、研缽、低(di)溫(wen)離(li)心(xin)機、酶(mei)標儀(yi)、96 孔(kong)板、可(ke)調式(shi)移液(ye)器(qi)、冰。

酶(mei)液提取(qu)：

1、組(zu)織(zhi)：按(an)照(zhao)質(zhi)量（g）：試劑壹(yi)體(ti)積(ji)(ml)為 1：5~10 的(de)比(bi)例（建(jian)議稱(cheng)取(qu)約 0.1g，加(jia)入(ru) 1ml 試劑壹(yi)）加(jia)入(ru)試劑壹(yi)，冰浴勻(yun)漿(jiang)後(hou)於 4℃，10000g 離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清置(zhi)於(yu)冰上待(dai)測。

2、細胞：按(an)照細胞數(shu)量（104 個(ge)）：試(shi)劑壹(yi)體(ti)積(ji)（ml）為 500~1000：1 的(de)比(bi)例（建(jian)議 500 萬(wan)細胞加(jia)入(ru)1ml 試劑壹(yi)），冰浴超聲(sheng)波破碎(sui)細胞（功(gong)率 300w，超(chao)聲(sheng) 3 秒，間(jian)隔 7 秒，總(zong)時間(jian) 3min）；然(ran)後(hou) 4℃，10000g離(li)心(xin) 10min，取(qu)上(shang)清置(zhi)於(yu)冰上待(dai)測。

3、培養液或(huo)其(qi)它(ta)液(ye)體(ti)：直(zhi)接(jie)檢測。

測定步驟：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)預(yu)熱 30min 以(yi)上，調節波(bo)長至 651nm，蒸(zheng)餾(liu)水調零(ling)。

2、臨(lin)用前按(an)每個樣(yang)本試劑壹(yi)：試(shi)劑二(er)：試(shi)劑三(san)=80:40:40（μl）的(de)比(bi)例配制(zhi)工(gong)作液(ye)，現(xian)配(pei)現用。

3、在 96 孔(kong)板中依次加(jia)入(ru)如(ru)下(xia)試劑

充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，立即測定 651nm 處 10s 和(he) 130s 吸(xi)光(guang)值(zhi)，記為A1 和(he)A2，△A=A1- A2

酶(mei)活計算(suan)公式(shi)：

1．按(an)照蛋白濃度(du)計算(suan)

酶(mei)活性定義(yi)：每mg 組(zu)織(zhi)蛋白在每ml 反(fan)應(ying)體(ti)系中每分(fen)鐘(zhong)A651 變化 0.01 為壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

LiP 活性（U/mg prot）= ΔA×V 反總(zong)÷（V 樣×Cpr）÷0.01÷T =250×ΔA÷Cpr 2．按(an)照樣本質量(liang)計(ji)算(suan)

酶(mei)活性定義(yi)：每g 組(zu)織(zhi)在每ml 反(fan)應(ying)體(ti)系中每分(fen)鐘(zhong) A651 變化 0.01 為壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

LiP 活性（U/g 鮮(xian)重）=ΔA×V 反(fan)總(zong)÷(W× V 樣÷V 樣(yang)總(zong))÷0.01÷T =250×ΔA÷W 3．按照(zhao)細胞數(shu)量計(ji)算(suan)

酶(mei)活性定義(yi)：每 1 萬(wan)個細菌或(huo)細胞在每 ml 反(fan)應(ying)體(ti)系中每分(fen)鐘(zhong)A651 變化 0.01 為壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

LiP 活性（U/104 cell）=ΔA×V 反總(zong)÷(500×V 樣÷V 樣(yang)總(zong))÷0.01÷T=0.5×ΔA 4．按照(zhao)液體(ti)體(ti)積(ji)計(ji)算(suan)

酶(mei)活性定義(yi)：每ml 血(xue)清（漿(jiang)）在每 ml 反(fan)應(ying)體(ti)系中每分(fen)鐘(zhong)A651 變化 0.01 為壹(yi)個酶(mei)活力(li)單(dan)位。

LiP 活性（U/ml）=ΔA×V 反總(zong)÷V 樣÷0.01÷T =250×ΔA

V 反(fan)總(zong)：反應(ying)總(zong)體(ti)積(ji)，0.2ml；V 樣(yang)：反(fan)應(ying)中樣本體(ti)積(ji)，0.04ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入(ru)提取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；Cpr：樣(yang)本蛋白濃度(du)，mg/ml；W：樣本質量(liang)，g；T：反(fan)應時間(jian)，2min

輔(fu)酶(mei)ⅡNADP(H)含(han)量(liang)測定試劑盒 其他(ta)系列(lie)