錳(meng)過氧(yang)化物(wu)酶（EC1.11.1.13）是(shi)壹種含亞(ya)鐵(tie)血(xue)紅(hong)素的過氧(yang)化物(wu)酶，主(zhu)要存(cun)在(zai)於(yu)擔子(zi)菌(jun)中，屬(shu)於(yu)木質素(su)降(jiang)解(jie)酶系(xi)，能有(you)效的降(jiang)解(jie)木(mu)質素(su)及(ji)廢水(shui)和土(tu)壤(rang)中比較(jiao)難(nan)降(jiang)解(jie)的氯化(hua)物(wu)，疊(die)dan化(hua)合(he)物(wu)、DTT，多(duo)環芳(fang)烴(ting)等。
錳(meng)過氧(yang)化物(wu)酶試劑(ji)盒(he) 其他(ta)系(xi)列(lie)

錳(meng)過氧(yang)化物(wu)酶（Manganese peroxidase，Mnp）試劑(ji)盒(he)說明書(shu)

微(wei)量(liang)法(fa) 100T/96S

錳(meng)過氧(yang)化物(wu)酶試劑(ji)盒(he) 其他(ta)系(xi)列(lie)

正(zheng)式測定前務必(bi)取 2-3 個(ge)預期差(cha)異(yi)較(jiao)大的樣(yang)本(ben)做預測定測定意(yi)義(yi)：

錳(meng)過氧(yang)化物(wu)酶（EC1.11.1.13）是(shi)壹種含亞(ya)鐵(tie)血(xue)紅(hong)素的過氧(yang)化物(wu)酶，主(zhu)要存(cun)在(zai)於(yu)擔子(zi)菌(jun)中，屬(shu)於(yu)木質素(su)降(jiang)解(jie)酶系(xi)，能有(you)效的降(jiang)解(jie)木(mu)質素(su)及(ji)廢水(shui)和土(tu)壤(rang)中比較(jiao)難(nan)降(jiang)解(jie)的氯化(hua)物(wu)，疊(die)dan化(hua)合(he)物(wu)、DTT，多(duo)環芳(fang)烴(ting)等。

測定原理(li)：

錳(meng)過氧(yang)化物(wu)酶在(zai) Mn2+存(cun)在(zai)的條(tiao)件(jian)下，將愈(yu)創木酚(fen)氧(yang)化為(wei)四(si)鄰甲氧(yang)基(ji)連酚(fen)，在(zai) 465nm 有(you)特征吸收峰(feng)。

試劑(ji)組成(cheng)和配制(zhi)：

需自備(bei)儀(yi)器和用品(pin)：

天平、研缽(bo)、低(di)溫離(li)心(xin)機、可見分(fen)光光度計/酶標(biao)儀、微量(liang)石(shi)英(ying)比色(se)皿/96 孔(kong)板(ban)、恒溫(wen)水(shui)浴(yu)鍋(guo)。

酶液(ye)提取：

1、組(zu)織：按(an)照(zhao)質量(liang)（g）：試劑(ji)壹體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的比例（建議稱(cheng)取約 0.1g，加(jia)入(ru) 1ml 試劑(ji)壹）加入試劑(ji)壹，冰浴(yu)勻漿後於(yu) 4℃，10000g 離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)置於(yu)冰上(shang)待測。

2、細胞：按(an)照(zhao)細胞數(shu)量(liang)（104 個(ge)）：試劑(ji)壹體積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入(ru)1ml 試劑(ji)壹），冰浴(yu)超聲波破碎(sui)細胞（功率(lv) 300w，超聲 3 秒，間(jian)隔(ge) 7 秒，總(zong)時(shi)間(jian) 3min）；然後(hou) 4℃，10000g離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清(qing)置於(yu)冰上(shang)待測。

3、培(pei)養液(ye)或其它(ta)液(ye)體：直(zhi)接(jie)檢(jian)測。

測定步驟：

1、分(fen)光光度計預(yu)熱(re) 30min 以(yi)上(shang)，調(tiao)節波(bo)長至(zhi) 465nm，蒸餾水(shui)調零(ling)。

2、測定前將試劑(ji)壹、二、三、四(si)在(zai) 37℃（哺乳(ru)動物(wu)）或 25℃（其它(ta)物(wu)種(zhong)）放(fang)置 10min 以(yi)上。

在(zai)微量(liang)石(shi)英(ying)比色(se)皿或 96 孔(kong)板(ban)中按(an)順序(xu)加入上述(shu)試劑(ji)，立即混(hun)勻並(bing)計時(shi)，記錄(lu) 465nm 下 30s 時(shi)的吸光值(zhi)A1 和(he) 2min30s 後的吸光值(zhi) A2。計算(suan)ΔA＝A2-A1。

註(zhu)意(yi)事(shi)項

若(ruo)壹次性測定樣(yang)本(ben)較(jiao)多，可將試劑(ji)壹、二、三、四(si)按(an)比例配成混(hun)合(he)液(ye)，在(zai) 37℃（哺乳(ru)動物(wu)）或 25℃

（其它(ta)物(wu)種(zhong)）放(fang)置 10min 以(yi)上，測定時加入 20µl 樣(yang)本(ben)和 180µl 混(hun)合(he)液(ye)測定。

酶活計算(suan)公式：

用(yong)微量(liang)石(shi)英(ying)比色(se)皿測定的計算(suan)公式如(ru)下

按(an)照(zhao)蛋(dan)白(bai)濃度計算(suan)

酶活性定(ding)義(yi)：每(mei)毫(hao)克(ke)蛋(dan)白(bai)每(mei)分(fen)鐘(zhong)氧(yang)化 1nmol 愈(yu)創木酚(fen)所需的酶量(liang)為(wei)壹個酶活力(li)單(dan)位(wei)。 MnP 活性（nmol/min/mg prot）= [ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=413×ΔA÷Cpr 2．按(an)照(zhao)樣(yang)本(ben)質量(liang)計算(suan)

酶活性定(ding)義(yi)：每(mei)克樣(yang)品(pin)每(mei)分(fen)鐘(zhong)氧(yang)化 1nmol 愈(yu)創木酚(fen)所需的酶量(liang)為(wei)壹個酶活力(li)單(dan)位(wei)。

MnP 活性（nmol/min/g 鮮(xian)重(zhong)）= [ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109] ÷（V 樣(yang)×W÷V 樣(yang)總(zong)）÷T= 413×ΔA÷W 3．按(an)照(zhao)細胞數(shu)量(liang)計算(suan)

酶活性定(ding)義(yi)：每(mei) 104 個(ge)細胞每(mei)分(fen)鐘(zhong)氧(yang)化 1nmol 愈(yu)創木酚(fen)所需的酶量(liang)為(wei)壹個酶活力(li)單(dan)位(wei)。

MnP 活性（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109] ÷（V 樣(yang)×細胞數(shu)量(liang)÷V 樣(yang)總(zong)）÷T

= 413×ΔA÷細胞數(shu)量(liang) 4．按(an)照(zhao)液(ye)體體(ti)積(ji)計算(suan)

酶活性定(ding)義(yi)：每(mei)毫(hao)升培(pei)養液(ye)每(mei)分(fen)鐘(zhong)氧(yang)化 1nmol 愈(yu)創木酚(fen)所需的酶量(liang)為(wei)壹個酶活力(li)單(dan)位(wei)。

MnP 活性（nmol/min/ml）= [ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷V 樣(yang)÷T= 413×ΔA

ε：愈(yu)創木酚(fen)摩爾(er)消光(guang)系(xi)數(shu)：12100L/mol/cm；d：比色(se)皿光徑(jing)，1cm；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)總(zong)體(ti)積(ji)，2×10-4 L； V 樣(yang)：反(fan)應(ying)中樣(yang)本(ben)體積(ji)，0.02ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入(ru)提取液(ye)體積(ji)，1ml；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)濃度，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量(liang)，g；T：反(fan)應(ying)時間(jian)，2min

用(yong) 96 孔(kong)板(ban)測定的計算(suan)公式如(ru)下

按(an)照(zhao)蛋(dan)白(bai)濃度計算(suan)

酶活性定(ding)義(yi)：每(mei)毫(hao)克(ke)蛋(dan)白(bai)每(mei)分(fen)鐘(zhong)氧(yang)化 1nmol 愈(yu)創木酚(fen)所需的酶量(liang)為(wei)壹個酶活力(li)單(dan)位(wei)。 MnP 活性（nmol/min/mg prot）= [ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=826×ΔA÷Cpr 2．按(an)照(zhao)樣(yang)本(ben)質量(liang)計算(suan)

酶活性定(ding)義(yi)：每(mei)克樣(yang)品(pin)每(mei)分(fen)鐘(zhong)氧(yang)化 1nmol 愈(yu)創木酚(fen)所需的酶量(liang)為(wei)壹個酶活力(li)單(dan)位(wei)。

MnP 活性（nmol/min/g 鮮(xian)重(zhong)）= [ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109] ÷（V 樣(yang)×W÷V 樣(yang)總(zong)）÷T= 826×ΔA÷W 3．按(an)照(zhao)細胞數(shu)量(liang)計算(suan)

酶活性定(ding)義(yi)：每(mei) 104 個(ge)細胞每(mei)分(fen)鐘(zhong)氧(yang)化 1nmol 愈(yu)創木酚(fen)所需的酶量(liang)為(wei)壹個酶活力(li)單(dan)位(wei)。

MnP 活性（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109] ÷（V 樣(yang)×細胞數(shu)量(liang)÷V 樣(yang)總(zong)）÷T

= 826×ΔA÷細胞數(shu)量(liang) 4．按(an)照(zhao)液(ye)體體(ti)積(ji)計算(suan)

酶活性定(ding)義(yi)：每(mei)毫(hao)升培(pei)養液(ye)每(mei)分(fen)鐘(zhong)氧(yang)化 1nmol 愈(yu)創木酚(fen)所需的酶量(liang)為(wei)壹個酶活力(li)單(dan)位(wei)。

MnP 活性（nmol/min/ml）= [ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×109]÷V 樣(yang)÷T= 826×ΔA

ε：愈(yu)創木酚(fen)摩爾(er)消光(guang)系(xi)數(shu)：12100L/mol/cm；d：96 孔(kong)板(ban)光徑(jing)，0.5cm；V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)總(zong)體(ti)積(ji)，2×10-4 L；V 樣(yang)：反(fan)應(ying)中樣(yang)本(ben)體積(ji)，0.02ml；V 樣(yang)總(zong)：加(jia)入(ru)提取液(ye)體積(ji)，1ml；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋(dan)白(bai)濃度，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量(liang)，g；T：反(fan)應(ying)時間(jian)，2min。

錳(meng)過氧(yang)化物(wu)酶試劑(ji)盒(he) 其他(ta)系(xi)列(lie)