植酸酶（phytase）是催化植酸及其(qi)鹽類(lei)水(shui)解(jie)為(wei)肌醇(chun)與磷(lin)酸（鹽）的(de)壹類(lei)酶(mei)的(de)總稱(cheng)，屬(shu)磷(lin)酸單(dan)酯水(shui)解(jie)酶(mei)，它能(neng)將(jiang)食品和(he)飼(si)料(liao)中(zhong)植酸及其(qi)鹽轉化為(wei)可(ke)供有(you)機體利用(yong)的(de)有(you)效(xiao)磷(lin)，降低糞(fen)便中(zhong)的(de)磷(lin)含(han)量，減(jian)輕(qing)對環境(jing)的(de)汙染(ran)，改(gai)善(shan)營養成(cheng)分的(de)吸收和(he)利用(yong)，因(yin)此具(ju)有(you)極(ji)其(qi)廣泛的(de)研究和(he)應(ying)用(yong)價值(zhi)。
植酸酶試(shi)劑(ji)盒(he) 其(qi)他(ta)系列(lie)

植酸酶（phytase）試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明書

微量法(fa) 100T/48S

植酸酶試(shi)劑(ji)盒(he) 其(qi)他(ta)系列(lie)

正式(shi)測定前(qian)務必(bi)取 2-3 個預期差(cha)異較(jiao)大的(de)樣本(ben)做(zuo)預(yu)測(ce)定測定意(yi)義：

植酸酶（phytase）是催化植酸及其(qi)鹽類(lei)水(shui)解(jie)為(wei)肌醇(chun)與磷(lin)酸（鹽）的(de)壹類(lei)酶(mei)的(de)總稱(cheng)，屬(shu)磷(lin)酸單(dan)酯水(shui)解(jie)酶(mei)，它能(neng)將(jiang)食品和(he)飼(si)料(liao)中(zhong)植酸及其(qi)鹽轉化為(wei)可(ke)供有(you)機體利用(yong)的(de)有(you)效(xiao)磷(lin)，降低糞(fen)便中(zhong)的(de)磷(lin)含(han)量，減(jian)輕(qing)對環境(jing)的(de)汙染(ran)，改(gai)善(shan)營養成(cheng)分的(de)吸收和(he)利用(yong)，因(yin)此具(ju)有(you)極(ji)其(qi)廣泛的(de)研究和(he)應(ying)用(yong)價值(zhi)。

測定原理(li)：

植酸酶在(zai)壹定溫度和(he)pH 值(zhi)條(tiao)件(jian)下(xia)，水(shui)解(jie)底物(wu)植酸鈉生(sheng)成(cheng)無機磷(lin)與肌醇(chun)衍(yan)生(sheng)物(wu)，無(wu)機磷(lin)在(zai)酸性(xing)環境(jing)中(zhong)與鉬酸銨顯(xian)色(se)劑(ji)反(fan)應生(sheng)成(cheng)藍(lan)色復(fu)合物(wu)，在(zai) 700nm 處(chu)有(you)特(te)征吸收峰，根(gen)據(ju) 700nm 處(chu)吸光(guang)值(zhi)變(bian)化可計算得(de)植酸酶活性(xing)。

試(shi)劑(ji)組(zu)成(cheng)和(he)配(pei)制(zhi)：

試(shi)劑(ji)壹(yi)：粉劑(ji)×1 支(zhi)，4℃保(bao)存(cun)，臨(lin)用(yong)前(qian)加緩(huan)沖液 6ml 配制(zhi)，現(xian)用(yong)現(xian)配(pei)；用(yong)不完(wan)的(de)試(shi)劑(ji) 4℃保(bao)存(cun)壹(yi)個(ge)月(yue)。顯色劑(ji)：粉(fen)劑(ji)×8 瓶(ping)，4℃保(bao)存(cun)，臨(lin)用(yong)前(qian)根據(ju)用(yong)量每瓶(ping)加 0.4ml 雙(shuang)蒸(zheng)水(shui)溶(rong)解(jie)，再加 1.6ml 試(shi)劑(ji)二混勻(yun)。

需自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和(he)用(yong)品：

天平、低溫離心(xin)機、可見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)/酶(mei)標(biao)儀(yi)、微(wei)量(liang)石(shi)英比色(se)皿/96 孔(kong)板(ban)、恒溫水(shui)浴(yu)鍋(guo)，超(chao)聲(sheng)溶(rong)解(jie)器(qi)，回(hui)旋式(shi)振蕩器。

樣本(ben)處(chu)理(li)：

酶制劑(ji)：按照(zhao)質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取液體積(ji)(ml)為(wei) 1：500~1000 的(de)比例(li)（建(jian)議(yi)稱取(qu)約 0.001g，加入 1ml

提(ti)取液）加入提(ti)取液，在(zai)超(chao)聲(sheng)波(bo)溶(rong)解(jie)器(qi)上溶(rong)解(jie) 15min，再用(yong)回旋(xuan)式(shi)振蕩器振蕩 15min，待測。

組織：按照(zhao)質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取液體積(ji)(ml)為 1：5~10 的(de)比例(li)（建議稱(cheng)取(qu)約(yue) 0.1g，加入 1ml 提(ti)取液）進(jin)行冰浴(yu)勻(yun)漿，在(zai)超(chao)聲(sheng)波(bo)溶(rong)解(jie)器(qi)上溶(rong)解(jie) 15min，再用(yong)回旋(xuan)式(shi)振蕩器振蕩 15min，4℃，4000g 離心(xin) 10min，取上清(qing)待測(ce)。

飼料樣品：飼(si)料烘(hong)幹(gan)粉碎(sui)，過 40 目篩，按照(zhao)質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取液體積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例(li)（建(jian)議(yi)稱取(qu)約 0.1g，加入 1ml 提(ti)取液）進(jin)行冰浴(yu)勻(yun)漿，在(zai)超(chao)聲(sheng)波(bo)溶(rong)解(jie)器(qi)上溶(rong)解(jie) 15min，再用(yong)回旋(xuan)式(shi)振蕩器振蕩 15min，4℃，4000g 離心(xin) 10min，取上清(qing)待測(ce)。

培養液等液體樣品，混勻(yun)直(zhi)接測定。

測定步驟(zhou)：

37℃溫育 5min

混勻(yun)，37℃溫育 30min，95℃，10min 終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)，冷(leng)卻至(zhi)室溫

混勻(yun)，37℃靜置 15min，10000g，室溫，離心(xin) 5min，取上清(qing) 200µl，測定 700nm 處(chu)吸光(guang)值(zhi)，△A=A 測(ce)定管-A 對(dui)照(zhao)管。每個(ge)測(ce)定管設(she)壹(yi)個對照(zhao)管。

註(zhu)意(yi)事項

1、顯色劑(ji)需要(yao)臨(lin)用(yong)前(qian)根據(ju)用(yong)量配(pei)制，每壹(yi)瓶(ping)是 13 個樣本(ben)的(de)用(yong)量，新(xin)配制(zhi)的(de)顯色(se)劑(ji)若(ruo)有(you)顏(yan)色則(ze)已(yi)經汙染或(huo)者(zhe)試(shi)劑(ji)過期，應放棄使用(yong)。

2、ΔA 線性(xing)範圍(wei)為 0.01-1。

酶活性(xing)計算(suan)公式(shi)：

用(yong)微量(liang)石英比色(se)皿測(ce)定的(de)計算(suan)公式(shi)如(ru)下(xia)

標(biao)準(zhun)曲(qu)線：y = 0.2764x + 0.0082，R2 = 0.9998；x 為標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度（μmol/ml），y 為吸光(guang)值(zhi)。

1． 按照(zhao)蛋白(bai)濃度計(ji)算(suan)

酶活性(xing)定義：在(zai) 37℃，pH5.5 的(de)條(tiao)件(jian)下(xia)，每毫(hao)克蛋白(bai)每分(fen)鐘(zhong)從(cong) 5mmol/L 的(de)植酸鈉溶(rong)液中釋(shi)放(fang)出(chu) 1μmol

的(de)無機磷(lin)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力單(dan)位。

植酸酶活性(xing)（μmol/min/mg prot）=（△A-0.0082）÷0.2764÷Cpr÷T =0.1206×（△A-0.0082）÷Cpr 2．按照(zhao)樣本(ben)質(zhi)量(liang)計(ji)算(suan)

酶活性(xing)定義：在(zai) 37℃，pH5.5 的(de)條(tiao)件(jian)下(xia)，每克樣本(ben)每分(fen)鐘(zhong)從(cong) 5mmol/L 的(de)植酸鈉溶(rong)液中釋(shi)放(fang)出(chu) 1μmol

的(de)無機磷(lin)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力單(dan)位。

植酸酶活性(xing)（μmol/min /g 鮮重）=（△A-0.0082）÷0.2764÷W÷T =0.1206×（△A-0.0082）÷W

3. 培養液等液體樣品

酶活性(xing)定義：在(zai) 37℃，pH5.5 的(de)條(tiao)件(jian)下(xia)，每毫(hao)升(sheng)液體每分(fen)鐘(zhong)從(cong) 5mmol/L 的(de)植酸鈉溶(rong)液中釋(shi)放(fang)出(chu) 1μmol

的(de)無機磷(lin)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力單(dan)位。

植酸酶活性(xing)（μmol/min /ml）=（△A-0.0082）÷0.2764÷T =0.1206×（△A-0.0082）

Cpr：樣本(ben)蛋白(bai)含(han)量，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量(liang)，g；T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，30min。

用(yong) 96 孔板測(ce)定的(de)計算(suan)公式(shi)如(ru)下(xia)

標(biao)準(zhun)曲(qu)線：y = 0.1382x + 0.0082，R2 = 0.9998；x 為標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度（μmol/ml），y 為吸光(guang)值(zhi)。

1.按照(zhao)蛋白(bai)濃度計(ji)算(suan)

酶活性(xing)定義：在(zai) 37℃，pH5.5 的(de)條(tiao)件(jian)下(xia)，每毫(hao)克蛋白(bai)每分(fen)鐘(zhong)從(cong) 5mmol/L 的(de)植酸鈉溶(rong)液中釋(shi)放(fang)出(chu) 1μmol的(de)無機磷(lin)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力單(dan)位。

植酸酶活性(xing)（μmol/min/mg prot）=（△A-0.0082）÷0.1382÷Cpr÷T = 0.2412×（△A-0.0082）÷Cpr 2．按照(zhao)樣本(ben)質(zhi)量(liang)計(ji)算(suan)

酶活性(xing)定義：在(zai) 37℃，pH5.5 的(de)條(tiao)件(jian)下(xia)，每克樣本(ben)每分(fen)鐘(zhong)從(cong) 5mmol/L 的(de)植酸鈉溶(rong)液中釋(shi)放(fang)出(chu) 1μmol的(de)無機磷(lin)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力單(dan)位。

植酸酶活性(xing)（μmol/min /g 鮮重）=（△A-0.0082）÷0.1382÷W÷T =0.2412×（△A-0.0082）÷W

3. 培養液等液體樣品

酶活性(xing)定義：在(zai) 37℃，pH5.5 的(de)條(tiao)件(jian)下(xia)，每毫(hao)升(sheng)液體每分(fen)鐘(zhong)從(cong) 5mmol/L 的(de)植酸鈉溶(rong)液中釋(shi)放(fang)出(chu) 1μmol的(de)無機磷(lin)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力單(dan)位。

植酸酶活性(xing)（μmol/min /ml）=（△A-0.0082）÷0.1382÷T =0.2412×（△A-0.0082） Cpr：樣本(ben)蛋白(bai)含(han)量，mg/ml；W：樣本(ben)質(zhi)量(liang)，g；T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，30min。

植酸酶試(shi)劑(ji)盒(he) 其(qi)他(ta)系列(lie)