漆(qi)酶(mei)（CE1.10.3.2）是(shi)壹種含(han)銅的(de)多(duo)酚(fen)氧(yang)化(hua)酶(mei)，屬(shu)於銅藍氧(yang)化(hua)酶(mei)家族(zu)，廣(guang)泛(fan)分(fen)布(bu)於(yu)真(zhen)菌和(he)高等(deng)植(zhi)物中(zhong)，具有(you)較(jiao)強(qiang)的氧(yang)化(hua)還(hai)原能(neng)力(li)，在紙(zhi)漿生物漂白(bai)，環(huan)境汙(wu)染(ran)物降(jiang)解和(he)木(mu)質(zhi)纖維素降解以及生物檢測方面(mian)有(you)非常(chang)廣(guang)泛(fan)的應用。
漆(qi)酶(mei)試(shi)劑盒(he) 其(qi)他系(xi)列

漆(qi)酶(mei)（Laccase）試(shi)劑盒(he)說明書

微量法(fa) 100T/48S

漆(qi)酶(mei)試(shi)劑盒(he) 其(qi)他系(xi)列

正(zheng)式(shi)測定前(qian)務必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差異較(jiao)大(da)的樣(yang)本(ben)做預(yu)測定測定意義(yi)：

漆(qi)酶(mei)（CE1.10.3.2）是(shi)壹種含(han)銅的(de)多(duo)酚(fen)氧(yang)化(hua)酶(mei)，屬(shu)於銅藍氧(yang)化(hua)酶(mei)家族(zu)，廣(guang)泛(fan)分(fen)布(bu)於(yu)真(zhen)菌和(he)高等(deng)植(zhi)物中(zhong)，具有(you)較(jiao)強(qiang)的氧(yang)化(hua)還(hai)原能(neng)力(li)，在紙(zhi)漿生物漂白(bai)，環(huan)境汙(wu)染(ran)物降(jiang)解和(he)木(mu)質(zhi)纖維素降解以及生物檢測方面(mian)有(you)非常(chang)廣(guang)泛(fan)的應用。

測定原(yuan)理(li)：

漆(qi)酶(mei)分(fen)解底(di)物ABTS 產(chan)生ABTS 自(zi)由(you)基，在 420nm 處(chu)的吸光系(xi)數(shu)遠(yuan)大(da)於底(di)物ABTS，測定 ABTS 自(zi)由(you)基的增加(jia)速(su)率，可計算(suan)得漆(qi)酶(mei)活性。

試(shi)劑組成和(he)配(pei)制：

工(gong)作液：粉劑×1 瓶，4℃避光保存，臨(lin)用前(qian)加(jia) 15ml 試劑壹溶(rong)解；用不完(wan)的(de)試(shi)劑 4℃保(bao)存壹周(zhou)。

自(zi)備儀器和(he)用品(pin)：

天(tian)平、低(di)溫(wen)離(li)心機、可見分(fen)光光度(du)計/酶(mei)標儀、微量石英比(bi)色皿(min)/96 孔板、恒溫(wen)水浴(yu)鍋。

酶(mei)液提(ti)取(qu)：

1、組織(zhi)：按(an)照組織(zhi)質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取(qu)液體(ti)積(ml)為(wei) 1：5~10 的比(bi)例（建(jian)議稱取約(yue) 0.1g 組織(zhi)，加(jia)入(ru) 1ml提(ti)取(qu)液），進(jin)行(xing)冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿。12000g 4℃離心 30min，取上(shang)清(qing)，置(zhi)冰(bing)上(shang)待測。

2、細(xi)胞(bao)：按(an)照細(xi)胞(bao)數(shu)量（104 個）：提(ti)取(qu)液體(ti)積（ml）為(wei) 500~1000：1 的比(bi)例（建(jian)議 500 萬細(xi)胞(bao)加(jia)入(ru)1ml 提(ti)取(qu)液），冰(bing)浴(yu)超(chao)聲波破碎(sui)細(xi)胞(bao)（功(gong)率 300w，超(chao)聲 3 秒，間隔(ge) 7 秒，總時(shi)間 3min）；然(ran)後 4℃，10000g離(li)心 10min，取(qu)上(shang)清(qing)置(zhi)於(yu)冰(bing)上(shang)待測。

3、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液：直接(jie)檢測。

測定步驟：

60℃水浴(yu) 20min 後(hou)冷(leng)卻(que)至室(shi)溫(wen)，取(qu) 200μl 反(fan)應液於微量石英比(bi)色皿(min)/96 孔板中測定 420nm 處(chu)吸光值(zhi)A，

△A=A 測定管-A 對(dui)照管。

註意事項(xiang)

1、極(ji)少數(shu)樣(yang)本(ben)在 60℃水浴(yu) 20min 後(hou)會出(chu)現沈(chen)澱，可經過(guo) 8000g 25℃離(li)心 10min 後，取(qu)上(shang)清(qing)檢測，例如成熟(shu)的(de)水稻(dao)葉片(pian)樣(yang)本(ben)。

2、為(wei)確保(bao)檢測準確性，若(ruo)ΔA 大(da)於 1，將(jiang)樣(yang)本(ben)用提(ti)取(qu)液稀釋 2~10 倍(bei)後重(zhong)新檢測，計算(suan)公(gong)式乘(cheng)以相應稀釋倍(bei)數(shu)。

酶(mei)活性計(ji)算(suan)公(gong)式：

用(yong)微量石英比(bi)色皿(min)測定的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式如下

按(an)照蛋白(bai)濃(nong)度(du)計算(suan)

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：每毫克蛋白(bai)每(mei)分(fen)鐘氧(yang)化(hua) 1nmol 底(di)物ABTS 所(suo)需(xu)的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位。

A

漆(qi)酶(mei)活性（nmol/min /mg prot）= 2．按(an)照樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)計算(suan)

 d ×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×Cpr）÷T= 9.26×△A÷Cpr

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：每克(ke)樣(yang)品每(mei)分(fen)鐘氧(yang)化(hua) 1nmol 底(di)物ABTS 所(suo)需(xu)的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位。

A

漆(qi)酶(mei)活性（nmol/min /g 鮮(xian)重(zhong)）= 3．按(an)照細(xi)胞(bao)數(shu)量計算(suan)

 d ×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×W÷V 樣(yang)總）÷T= 9.26×△A÷W

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：每 104 個(ge)細(xi)胞(bao)每(mei)分(fen)鐘氧(yang)化(hua) 1nmol 底(di)物ABTS 所(suo)需(xu)的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位。

A

漆(qi)酶(mei)活性（nmol/min /104 cell）= 4．按(an)照液體(ti)體(ti)積計(ji)算(suan)

 d ×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×細(xi)胞(bao)數(shu)量÷V 樣(yang)總）÷T= 9.26×△A÷細(xi)胞(bao)數(shu)量

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：每升(sheng)培養(yang)液每分(fen)鐘氧(yang)化(hua) 1nmol 底(di)物ABTS 所(suo)需(xu)的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位。

A

 漆(qi)酶(mei)活性（nmol/min /L）=d ×V 反(fan)總÷V 樣(yang)÷T= 9260×△A

ε：ABTS 毫摩爾消光系(xi)數(shu)：36L/mmol/cm；d：比色皿(min)光徑，1cm；V 反(fan)總：反(fan)應總(zong)體(ti)積，0.3ml；V樣(yang)：反(fan)應體(ti)系(xi)中(zhong)樣(yang)本(ben)體(ti)積，0.03ml；V 樣(yang)總：加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液體(ti)積，1ml；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白(bai)濃(nong)度(du)，mg/ml；W，樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)，g；T：反(fan)應時(shi)間，20min

用(yong) 96 孔板測定的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式如下

按(an)照蛋白(bai)濃(nong)度(du)計算(suan)

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：每毫克蛋白(bai)每(mei)分(fen)鐘氧(yang)化(hua) 1nmol 底(di)物ABTS 所(suo)需(xu)的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位。

A

漆(qi)酶(mei)活性（nmol/min /mg prot）= 2．按(an)照樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)計算(suan)

 d ×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×Cpr）÷T= 18.52×△A÷Cpr

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：每克(ke)樣(yang)品每(mei)分(fen)鐘氧(yang)化(hua) 1nmol 底(di)物ABTS 所(suo)需(xu)的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位。

A

漆(qi)酶(mei)活性（nmol/min /g 鮮(xian)重(zhong)）= 3．按(an)照細(xi)胞(bao)數(shu)量計算(suan)

 d ×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×W÷V 樣(yang)總）÷T= 18.52×△A÷W

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：每 104 個(ge)細(xi)胞(bao)每(mei)分(fen)鐘氧(yang)化(hua) 1nmol 底(di)物ABTS 所(suo)需(xu)的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位。

A

漆(qi)酶(mei)活性（nmol/min /104 cell）=

= 18.52×△A÷細(xi)胞(bao)數(shu)量 4．按(an)照液體(ti)體(ti)積計(ji)算(suan)

 d ×V 反(fan)總÷（V 樣(yang)×細(xi)胞(bao)數(shu)量÷V 樣(yang)總）÷T

酶(mei)活性定(ding)義(yi)：每升(sheng)培養(yang)液每分(fen)鐘氧(yang)化(hua) 1nmol 底(di)物ABTS 所(suo)需(xu)的酶(mei)量(liang)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力(li)單位。

A

漆(qi)酶(mei)活性（nmol/min /L）=

 d ×V 反(fan)總÷V 樣(yang)÷T= 18520×△A

ε：ABTS 毫摩爾消光系(xi)數(shu)：36L/mmol/cm；d：比色皿(min)光徑，0.5cm；V 反(fan)總：反(fan)應總(zong)體(ti)積，0.3ml；V樣(yang)：反(fan)應中(zhong)樣(yang)本(ben)體(ti)積，0.045ml；V 樣(yang)總：加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液體(ti)積，1ml；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白(bai)濃(nong)度(du)，mg/ml；W，樣(yang)本(ben)質(zhi)量(liang)，g；T：反(fan)應時(shi)間，20min。

漆(qi)酶(mei)試(shi)劑盒(he) 其(qi)他系(xi)列