植物葉綠(lv)體(ti)中(zhong)磷(lin)酸(suan)丙糖異(yi)構(gou)酶是光(guang)合(he)作(zuo)用(yong)中(zhong)參(can)與 calvin 循環(huan)的重要(yao)酶。作(zuo)用(yong)於磷(lin)酸(suan)甘油(you)醛(quan)和(he)磷(lin)酸(suan)二羥(qiang)丙酮(tong)之(zhi)間的轉化，磷(lin)酸(suan)二羥(qiang)丙酮(tong)能(neng)快速(su)透(tou)過葉(ye)綠(lv)體(ti)的包膜進入細(xi)胞質(zhi)，並在(zai)其(qi)中(zhong)逐(zhu)步(bu)轉化為蔗(zhe)糖。
磷(lin)酸(suan)丙糖異(yi)構(gou)酶試劑(ji)盒 光(guang)合系列(lie)

磷(lin)酸(suan)丙糖異(yi)構(gou)酶（Triose-phosphate isomerase，TPI）試劑(ji)盒說(shuo)明書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法(fa) 50 管(guan)/48 樣(yang)

磷(lin)酸(suan)丙糖異(yi)構(gou)酶試劑(ji)盒 光(guang)合系列(lie)

正式測(ce)定前務(wu)必(bi)取 2-3 個預期差(cha)異(yi)較大的樣(yang)本(ben)做預測(ce)定測(ce)定意(yi)義：

植物葉綠(lv)體(ti)中(zhong)磷(lin)酸(suan)丙糖異(yi)構(gou)酶是光(guang)合(he)作(zuo)用(yong)中(zhong)參(can)與 calvin 循環(huan)的重要(yao)酶。作(zuo)用(yong)於磷(lin)酸(suan)甘油(you)醛(quan)和(he)磷(lin)酸(suan)二羥(qiang)丙酮(tong)之(zhi)間的轉化，磷(lin)酸(suan)二羥(qiang)丙酮(tong)能(neng)快速(su)透(tou)過葉(ye)綠(lv)體(ti)的包膜進入細(xi)胞質(zhi)，並在(zai)其(qi)中(zhong)逐(zhu)步(bu)轉化為蔗(zhe)糖。

測(ce)定原理(li)：

磷(lin)酸(suan)丙糖異(yi)構(gou)酶將磷(lin)酸(suan)二羥(qiang)丙酮(tong)轉化為 3-磷(lin)酸(suan)甘油(you)醛(quan)，3-磷(lin)酸(suan)甘油(you)醛(quan)與(yu)NAD 在(zai) 3-磷(lin)酸(suan)甘油(you)醛(quan)脫(tuo)氫酶的作(zuo)用(yong)下生成(cheng) 3-磷(lin)酸(suan)甘油(you)酸(suan)和(he)NADH，340nm 處(chu)的吸光度(du)變(bian)化反(fan)映了磷(lin)酸(suan)丙糖異(yi)構(gou)酶的活(huo)性(xing)的高低。

組成(cheng)：

試劑(ji)二(er)：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，-20℃避光保(bao)存。臨用(yong)前加 5ml 蒸(zheng)餾(liu)水充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)；用(yong)不(bu)完(wan)的試劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復凍融。

試劑(ji)三：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，-20℃避光保(bao)存。臨用(yong)前加 5 ml 蒸(zheng)餾(liu)水充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)；用(yong)不(bu)完(wan)的試劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復凍融。

試劑(ji)四(si)：粉劑(ji)×1 瓶(ping)，-20℃避光保(bao)存。臨用(yong)前加 5 ml 蒸(zheng)餾(liu)水充(chong)分(fen)溶(rong)解(jie)；用(yong)不(bu)完(wan)的試劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後(hou)-20℃保存(cun)，禁(jin)止(zhi)反(fan)復凍融。

自備儀(yi)器和(he)用(yong)品(pin)：

天平(ping)、低溫(wen)離(li)心(xin)機(ji)、研缽(bo)、震蕩(dang)儀(yi)、紫(zi)外分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)、1 ml 石英(ying)比色(se)皿。

酶液提(ti)取

①總TPI 酶提(ti)取：建(jian)議稱(cheng)取(qu)約 0.1g 樣(yang)本(ben)，加入 1ml 提(ti)取液(ye)壹，冰浴(yu)勻(yun)漿後(hou)超聲破(po)碎(sui)（冰浴(yu)，200W，破碎(sui)3s，間歇(xie) 7s，總時間 1min），然後(hou) 4℃，8000g 離(li)心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)測(ce)定。

②胞漿和(he)葉綠(lv)體(ti)TPI 酶的分(fen)離(li)：按(an)照(zhao)植物組織質量(liang)（g）：提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5～10 的比例（建議稱(cheng)取(qu)約 0.1g 樣(yang)本(ben)，加入 1ml 提(ti)取液(ye)壹），冰浴(yu)勻(yun)漿後(hou)於 4℃，200g 離(li)心(xin) 5min，棄沈(chen)澱，取(qu)上清(qing)在(zai) 4℃，8000g離(li)心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)用(yong)於測(ce)定胞漿(jiang) TPI 酶活(huo)性(xing)，取沈(chen)澱加 1ml 提(ti)取液(ye)二(er)，震蕩(dang)溶(rong)解(jie)後(hou)超聲破(po)碎(sui)（冰浴(yu)，200W，破碎(sui) 3s，間歇(xie) 7s，總時間 1min），然後(hou) 4℃，8000g 離(li)心(xin) 10min，取(qu)上清(qing)測(ce)定葉綠(lv)體(ti)中(zhong)TPI 酶活(huo)性(xing)。

建議測(ce)定總TPI 酶活(huo)性(xing)，按照(zhao)步驟①提(ti)取粗(cu)酶液，若(ruo)需要(yao)分(fen)別(bie)測(ce)定胞漿(jiang)和(he)葉綠(lv)體(ti)中(zhong)的 TPI，則按(an)照(zhao)步驟②提(ti)取粗(cu)酶液。

測(ce)定操作(zuo):

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)預熱 30min，調節(jie)波長(chang)至 340nm，蒸(zheng)餾(liu)水調(tiao)零(ling)。

取 1ml 石英(ying)比色(se)皿，依次加入 600μL 試劑(ji)壹，100μL 試劑(ji)二(er)，100μL 試(shi)劑(ji)三，100μL 試(shi)劑(ji)四(si)，100μL粗(cu)酶液，充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，記錄 340nm 處(chu) 10s 的吸光值A1 和(he) 310s 的吸光值A2，△A=A2-A1

計(ji)算公式:

按照(zhao)樣(yang)本(ben)蛋白(bai)濃(nong)度(du)計(ji)算

酶活(huo)單位(wei)定義：每毫克組織蛋白(bai)每分(fen)鐘生成(cheng) 1 nmol 的NADH 定義為(wei)壹個酶活(huo)力單位(wei)。

TPI（nmol/min /mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

按照(zhao)樣(yang)本(ben)質量計(ji)算

酶活(huo)單位(wei)定義：每克組織每分(fen)鐘生成(cheng) 1 nmol 的NADH 定義為(wei)壹個酶活(huo)力單位(wei)。

TPI（nmol/min /g 鮮重）= ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總) ÷T=321.54×ΔA÷W

V 反(fan)總：反(fan)應體系(xi)總體積(ji)，1ml；ε：NADH 摩(mo)爾(er)消(xiao)光(guang)系(xi)數(shu)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色(se)皿光徑(jing)，1cm； V 樣(yang)：加入樣(yang)本(ben)體積(ji)，0.1ml；V 樣(yang)總：加入提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；T：反(fan)應時間(jian)，5 min；Cpr：樣(yang)本(ben)蛋白(bai)質(zhi)濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量，g

磷(lin)酸(suan)丙糖異(yi)構(gou)酶試劑(ji)盒 光(guang)合系列(lie)