植(zhi)物(wu)葉綠(lv)體(ti)中果(guo)糖 1,6-二(er)磷酸(suan)醛(quan)縮酶是光合(he)作(zuo)用(yong)中參(can)與calvin 循(xun)環(huan)的(de)重要酶。催(cui)化(hua)果(guo)糖 1,6-二(er)磷酸(suan)和景(jing)天庚(geng)酮糖(tang) 1,7-二磷酸(suan)的(de)合(he)成反(fan)應(ying)，在(zai)各種逆(ni)境(jing)脅迫下(xia)表(biao)現(xian)不(bu)同(tong)的(de)響(xiang)應(ying)。
果(guo)糖1,6-二(er)磷酸(suan)醛(quan)縮酶試(shi)劑(ji)盒 光合(he)系(xi)列(lie)

果(guo)糖 1,6-二(er)磷酸(suan)醛(quan)縮酶（Fructose 1,6 bisphosphate aldolase，FDA）試(shi)劑(ji)盒說(shuo)明(ming)書

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法(fa) 50 管(guan)/48 樣

果(guo)糖1,6-二(er)磷酸(suan)醛(quan)縮酶試(shi)劑(ji)盒 光合(he)系(xi)列(lie)

正(zheng)式(shi)測定(ding)前務(wu)必(bi)取(qu) 2-3 個(ge)預期(qi)差異(yi)較大的(de)樣本做(zuo)預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義：

植(zhi)物(wu)葉綠(lv)體(ti)中果(guo)糖 1,6-二(er)磷酸(suan)醛(quan)縮酶是光合(he)作(zuo)用(yong)中參(can)與calvin 循(xun)環(huan)的(de)重要酶。催(cui)化(hua)果(guo)糖 1,6-二(er)磷酸(suan)和景(jing)天庚(geng)酮糖(tang) 1,7-二磷酸(suan)的(de)合(he)成反(fan)應(ying)，在(zai)各種逆(ni)境(jing)脅迫下(xia)表(biao)現(xian)不(bu)同(tong)的(de)響(xiang)應(ying)。

測(ce)定(ding)原(yuan)理(li)：

果(guo)糖 1,6-二(er)磷酸(suan)醛(quan)縮酶催(cui)化(hua)果(guo)糖 1,6-二(er)磷酸(suan)生成 3-磷酸(suan)甘油醛(quan)和磷酸(suan)二羥(qiang)丙(bing)酮，在(zai)磷酸(suan)丙(bing)糖異(yi)構酶和 α-磷酸(suan)甘油脫氫(qing)酶作(zuo)用(yong)下催(cui)化(hua) NADH 和磷酸(suan)二羥(qiang)丙(bing)酮生(sheng)成 NAD 和α-磷酸(suan)甘油，340nm 處(chu)吸(xi)光值的(de)變(bian)化(hua)可反(fan)映(ying)果(guo)糖 1,6-二(er)磷酸(suan)醛(quan)縮酶活(huo)性(xing)的(de)高(gao)低(di)。

組(zu)成：

試(shi)劑(ji)二(er)：粉劑(ji)×1 瓶，-20℃避光保存。臨(lin)用(yong)前加 5ml 蒸餾水充(chong)分溶解；用不完的(de)試(shi)劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後-20℃保存，禁(jin)止反(fan)復凍(dong)融。

試(shi)劑(ji)三：粉劑(ji)×1 瓶，-20℃避光保存。臨(lin)用(yong)前加 5 ml 蒸餾水充(chong)分溶解；用不完的(de)試(shi)劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後-20℃保存，禁(jin)止反(fan)復凍(dong)融。

試(shi)劑(ji)四(si)：粉劑(ji)×1 瓶，-20℃避光保存。臨(lin)用(yong)前加 5 ml 蒸餾水充(chong)分溶解；用不完的(de)試(shi)劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後-20℃保存，禁(jin)止反(fan)復凍(dong)融。

試(shi)劑(ji)五：液體(ti)×1 瓶(ping)，4℃避光保存；用(yong)不完的(de)試(shi)劑(ji)分(fen)裝(zhuang)後-20℃保存，禁(jin)止反(fan)復凍(dong)融。

自(zi)備儀(yi)器和用品(pin)：

天(tian)平、低(di)溫(wen)離(li)心機(ji)、震(zhen)蕩儀(yi)、研缽(bo)、紫(zi)外(wai)分光(guang)光(guang)度(du)計(ji)、1 ml 石(shi)英比(bi)色(se)皿(min)。

酶液(ye)提(ti)取：

①總(zong)FDA 酶提(ti)取(qu)：建議稱取(qu)約(yue) 0.1g 樣本，加(jia)入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)壹(yi)，冰浴勻漿後超聲(sheng)破碎（冰浴，200W，破(po)碎3s，間(jian)歇 7s，總時(shi)間(jian) 1min），然後(hou) 4℃，8000g 離(li)心 10min，取(qu)上清(qing)測定(ding)。

②胞(bao)漿(jiang)和葉綠(lv)體(ti)FDA 酶的(de)分(fen)離(li)：按照(zhao)植(zhi)物(wu)組(zu)織(zhi)質量(liang)（g）：提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5～10 的(de)比(bi)例(li)（建議稱取(qu)約(yue) 0.1g 樣本，加(jia)入 1ml 提(ti)取(qu)液(ye)壹(yi)），冰浴勻漿後於 4℃，200g 離(li)心 5min，棄(qi)沈澱(dian)，取上(shang)清(qing)在(zai) 4℃，8000g離心 10min，取(qu)上清(qing)用於測(ce)定(ding)胞(bao)漿 FDA 酶活(huo)性(xing)，取(qu)沈(chen)澱(dian)加 1ml 提取液(ye)二，震蕩溶解後超聲(sheng)破碎（冰浴， 200W，破(po)碎 3s，間(jian)歇 7s，總時(shi)間(jian) 1min），然後(hou) 4℃，8000g 離(li)心 10min，取(qu)上清(qing)測定(ding)葉綠(lv)體(ti)中 FDA 酶活(huo)性(xing)。

建議測(ce)定(ding)總(zong)FDA 酶活(huo)性(xing)，按照(zhao)步(bu)驟①提(ti)取粗酶液(ye)，若(ruo)需要分(fen)別(bie)測定(ding)胞(bao)漿和葉綠(lv)體(ti)中的(de) FDA，則(ze)按照(zhao)步(bu)驟②提(ti)取粗酶液(ye)。

測(ce)定(ding)操(cao)作：

分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)預(yu)熱 30min，調(tiao)節波(bo)長(chang)至(zhi) 340nm，蒸餾水調(tiao)零。

取(qu) 1ml 石(shi)英(ying)比色(se)皿(min)，依次加入(ru) 500μl 試(shi)劑壹，100μl 試(shi)劑二(er)，100μl 試(shi)劑(ji)三，100μl 試劑四(si)，100μl 試(shi)劑(ji)五，100μl 粗酶液(ye)，充(chong)分混勻，記(ji)錄 340nm 處 10s 的(de)吸(xi)光值A1 和 310s 的(de)吸(xi)光值A2，△A=A1-A2

計(ji)算(suan)公式(shi)：

按照(zhao)樣本蛋(dan)白濃度(du)計(ji)算(suan)

酶活(huo)單(dan)位(wei)定(ding)義：每(mei)毫(hao)克(ke)組織(zhi)蛋(dan)白每(mei)分(fen)鐘(zhong)消耗 1 nmol 的(de)NADH 定(ding)義為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單位(wei)。

FDA（nmol/min /mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總(zong)÷(V 樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

按照(zhao)樣本質量(liang)計(ji)算(suan)

酶活(huo)單(dan)位(wei)定(ding)義：每(mei)克(ke)組織(zhi)每分(fen)消(xiao)耗 1 nmol 的(de)NADH 定(ding)義為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單位(wei)。

FDA（nmol/min /g 鮮(xian)重）= ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總(zong)÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

按照(zhao)細(xi)胞數(shu)量計(ji)算(suan)

酶活(huo)單(dan)位(wei)定(ding)義：每(mei) 104 個(ge)細胞(bao)每分(fen)鐘(zhong)消耗 1 nmol 的(de)NADH 定(ding)義為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單位(wei)。

FDA（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總(zong)÷(V 樣×細胞(bao)數量(liang)÷V 樣總) ÷T

= 321.54×ΔA÷細(xi)胞(bao)數(shu)量

按照(zhao)液(ye)體(ti)體(ti)積(ji)計(ji)算(suan)

酶活(huo)單(dan)位(wei)定(ding)義：每(mei)毫(hao)升液體(ti)每(mei)分鐘(zhong)消耗 1 nmol 的(de)NADH 定(ding)義為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)力(li)單位(wei)。

FDA（nmol/min /ml）= ΔA÷（ε×d）×V 反(fan)總(zong)÷V 樣÷T=321.54×ΔA

V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)總體(ti)積(ji)，1ml；ε：NADH 摩爾(er)消光(guang)系(xi)數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色(se)皿(min)光徑，1cm； V 樣：加入(ru)樣本體(ti)積(ji)，0.1ml；V 樣總：加(jia)入提(ti)取(qu)液(ye)體(ti)積(ji)，1ml；T：反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)，5 min；Cpr：樣本蛋(dan)白質濃度(du)，mg/ml；W：樣本質量(liang)，g

果(guo)糖1,6-二(er)磷酸(suan)醛(quan)縮酶試(shi)劑(ji)盒 光合(he)系(xi)列(lie)