3-磷酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)激(ji)酶是糖酵解(jie)的關(guan)鍵(jian)酶，廣(guang)泛存(cun)在(zai)於動(dong)植(zhi)物(wu)和(he)微生(sheng)物(wu)體(ti)內(nei)，催(cui)化(hua) 1，3-二磷(lin)酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)轉(zhuan)變為(wei) 3-磷酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)，產(chan)生(sheng) 1 分(fen)子(zi)ATP，具(ju)有(you)影響(xiang) DNA 復制(zhi)和(he)修補及(ji)刺激(ji)病(bing)毒(du) RNA 合成等(deng)生(sheng)物(wu)學功能，廣(guang)泛應(ying)用於藥物(wu)靶(ba)標(biao)設(she)計。
3-磷酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)激(ji)酶試(shi)劑盒 光合系列

3-磷酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)激(ji)酶（3-Phosphoglycerate kinase，PGK）試劑盒說明書(shu)

分光光(guang)度(du)法 50 管/48 樣

3-磷酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)激(ji)酶試(shi)劑盒 光合系列

正式測(ce)定(ding)前務必(bi)取 2-3 個(ge)預期差(cha)異較大的樣本(ben)做(zuo)預測定(ding)測定(ding)意義(yi)：

3-磷酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)激(ji)酶是糖酵解(jie)的關(guan)鍵(jian)酶，廣(guang)泛存(cun)在(zai)於動(dong)植(zhi)物(wu)和(he)微生(sheng)物(wu)體(ti)內(nei)，催(cui)化(hua) 1，3-二磷(lin)酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)轉(zhuan)變為 3-磷酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)，產(chan)生(sheng) 1 分子(zi)ATP，具(ju)有(you)影響(xiang) DNA 復制(zhi)和(he)修補及(ji)刺激(ji)病(bing)毒(du) RNA 合成等(deng)生(sheng)物(wu)學功能，廣(guang)泛應(ying)用於藥物(wu)靶(ba)標(biao)設(she)計。

測定(ding)原(yuan)理：

3-磷酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)激(ji)酶催(cui)化(hua) 3-磷酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)和(he)ATP 產生 1,3-二磷(lin)酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)和(he)ADP，1,3-二磷(lin)酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)在(zai) 3-磷(lin)酸(suan)甘(gan)油(you)醛(quan)脫氫(qing)酶和(he) NADH 作用下產生(sheng) 3-磷(lin)酸(suan)甘(gan)油(you)醛(quan)、NAD 和(he)磷酸(suan)，340nm 處的吸光度(du)變化(hua)反映了 3-磷酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)激(ji)酶的活性的高低(di)。

組(zu)成：

試劑二：粉(fen)劑×1 瓶(ping)，-20℃避(bi)光保(bao)存(cun)。臨用前加 5ml 蒸(zheng)餾(liu)水充(chong)分(fen)溶解(jie)；用不完(wan)的試劑分(fen)裝後-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反復凍融(rong)。

試劑三(san)：粉(fen)劑×1 瓶(ping)，-20℃避(bi)光保(bao)存(cun)。臨用前加 2.5 ml 蒸(zheng)餾(liu)水充(chong)分(fen)溶解(jie)；用不完(wan)的試劑分(fen)裝後-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反復凍融(rong)。

試劑四(si)：粉(fen)劑×1 瓶(ping)，-20℃避(bi)光保(bao)存(cun)。臨用前加 2.5 ml 蒸(zheng)餾(liu)水充(chong)分(fen)溶解(jie)；用不完(wan)的試劑分(fen)裝後-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反復凍融(rong)。

試劑五：粉劑×1 瓶(ping)，-20℃避(bi)光保(bao)存(cun)。臨用前加 10 ml 蒸(zheng)餾(liu)水充(chong)分(fen)溶解(jie)；用不完(wan)的試劑分(fen)裝後-20℃保存(cun)，禁止(zhi)反復凍融(rong)。

自備儀(yi)器和(he)用(yong)品(pin)：

天(tian)平(ping)、低溫(wen)離(li)心(xin)機、研(yan)缽(bo)、紫外分(fen)光光度(du)計、1 ml 石英比(bi)色(se)皿(min)。

酶液提(ti)取:

①總(zong) PGK 酶提(ti)取：建(jian)議稱(cheng)取約 0.1g 樣本，加入 1ml 提(ti)取液，冰(bing)浴勻漿(jiang)後超(chao)聲(sheng)破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總(zong)時間 1min），然後 4℃，500g 離心(xin) 5min，取上清(qing)測定(ding)。

②胞漿(jiang)和(he)葉(ye)綠體 PGK 酶的分離(li)：按(an)照植物(wu)組(zu)織質(zhi)量(liang)（g）：提(ti)取液體(ti)積(ml)為 1：5～10 的比(bi)例(li)（建(jian)議稱(cheng)取約 0.1g 樣本，加入 1ml 提(ti)取液），冰(bing)浴勻漿(jiang)後於 4℃，500g 離心(xin) 5min，棄(qi)沈澱，取上清(qing)在 4℃， 8000g 離心(xin) 10min，取上清(qing)用於測定(ding)胞漿(jiang) PGK 酶活性，取沈澱加 1ml 提取液，震蕩溶解後超(chao)聲(sheng)破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總(zong)時間 1min），然後 4℃，500g 離心(xin) 5min，取上清(qing)測定(ding)葉綠體中 PGK酶活性。

建(jian)議測(ce)定(ding)總(zong)PGK 酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若(ruo)需(xu)要分(fen)別(bie)測定(ding)胞漿(jiang)和(he)葉(ye)綠體中的PGK，則(ze)按(an)照步驟②提取粗酶液。

測定(ding)操(cao)作:

分光光(guang)度(du)計預熱(re) 30min，調(tiao)節波(bo)長至 340nm，蒸(zheng)餾(liu)水調(tiao)零(ling)。

取 1ml 石(shi)英比(bi)色(se)皿(min)，依次(ci)加入 500μl 試(shi)劑壹(yi)，100μl 試(shi)劑二，50μl 試(shi)劑三(san)，50μl 試(shi)劑四(si)，200μl

試劑五，100μl 粗酶液，充(chong)分(fen)混(hun)勻，記錄(lu) 340nm 處 10s 的吸光值A1 和(he) 310s 的吸光值A2，△A=A1-A2

計算公(gong)式:

按照樣本蛋白濃度(du)計算

酶活單(dan)位(wei)定(ding)義：每(mei)毫(hao)克(ke)組(zu)織蛋白每(mei)分(fen)鐘(zhong)消(xiao)耗(hao) 1 nmol 的NADH 定(ding)義為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力(li)單(dan)位(wei)。

PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總(zong)÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

按照樣本質(zhi)量(liang)計(ji)算

酶活單(dan)位(wei)定(ding)義：每(mei)克(ke)組(zu)織每(mei)分(fen)鐘(zhong)消(xiao)耗(hao) 1 nmol 的NADH 定(ding)義為(wei)壹(yi)個(ge)酶活力(li)單(dan)位(wei)。

PGK（nmol/min /g 鮮(xian)重）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總(zong)÷(W ×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總(zong)) ÷T=321.54×ΔA÷W

V 反總(zong)：反應(ying)體系總(zong)體(ti)積，1ml；ε：NADH 摩爾消(xiao)光(guang)系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比(bi)色(se)皿(min)光(guang)徑，1cm； V 樣：加入樣(yang)本(ben)體積，0.1ml；V 樣總(zong)：加入提(ti)取液體(ti)積，1ml；T：反應(ying)時間，5 min；Cpr：樣本(ben)蛋(dan)白質(zhi)濃度(du)，mg/ml；W：樣本質(zhi)量(liang)，g

3-磷酸(suan)甘(gan)油(you)酸(suan)激(ji)酶試(shi)劑盒 光合系列