L-半乳(ru)糖(tang)途(tu)徑(jing)是合成(cheng)AsA 的主要途(tu)徑(jing)。Gal LDH 位(wei)於線粒體(ti)內(nei)膜，負責催化植(zhi)物(wu)體內 AsA 生(sheng)物(wu)合(he)成(cheng)的最後壹(yi)步，也(ye)是該途(tu)徑(jing)的關鍵(jian)酶(mei)之壹(yi)，對植物(wu)體內(nei)AsA 含量(liang)的積(ji)累(lei)起著(zhe)至(zhi)關重(zhong)要的用(yong)。
L-半乳糖(tang)酸(suan)1,4-內酯脫(tuo)氫(qing)酶(mei)活性試(shi)劑盒(he)抗壞

L-半乳糖酸(suan)-1,4-內酯脫(tuo)氫(qing)酶(mei)（L-galactono-1,4-lactone dehydrogenase，Gal LDH）活性測(ce)定(ding)試(shi)劑盒(he)說明書

分光光度法(fa) 50 管(guan)/48 樣

L-半乳糖酸(suan)1,4-內酯脫(tuo)氫(qing)酶(mei)活性試(shi)劑盒(he)抗壞

正式(shi)測(ce)定前(qian)務(wu)必取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期(qi)差(cha)異(yi)較大的樣本做(zuo)預測定測(ce)定意義(yi)：

L-半乳糖途(tu)徑(jing)是合成(cheng)AsA 的主要途(tu)徑(jing)。Gal LDH 位(wei)於線粒體(ti)內(nei)膜，負責催化植(zhi)物(wu)體內 AsA 生(sheng)物(wu)合(he)成(cheng)的最後壹(yi)步，也(ye)是該途(tu)徑(jing)的關鍵(jian)酶(mei)之壹(yi)，對植物(wu)體內(nei)AsA 含量(liang)的積(ji)累(lei)起著(zhe)至(zhi)關重(zhong)要的用(yong)。

測定原(yuan)理(li)：

Gal LDH 催化L-半乳糖(tang)內(nei)還原(yuan)細(xi)胞se素c（Cyt c），還原(yuan)型Cyt c 在(zai) 550nm 有吸收(shou)峰；測(ce)定還原(yuan)型Cyt c 增加(jia)速率，來計(ji)算 Gal LDH 活性。

組成(cheng)：

試(shi)劑二：粉(fen)劑×1 瓶(ping)，4℃保存。臨(lin)用(yong)前加入 40ml 蒸餾(liu)水(shui)，充(chong)分溶解(jie)。試(shi)劑三(san)：粉(fen)劑×1 瓶(ping)，4℃保存。臨(lin)用(yong)前加入 5ml 蒸餾(liu)水(shui)，充(chong)分溶解(jie)。

自備儀(yi)器和(he)用(yong)品：

臺式(shi)離(li)心機(ji)、可(ke)見分光光度計(ji)、1ml 玻(bo)璃比色(se)皿(min)、可(ke)調式(shi)移(yi)液器、研缽、冰和(he)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

粗酶(mei)液提(ti)取(qu)：

按照組織質(zhi)量(liang)（g）：試(shi)劑壹(yi)體積(ji)(ml)為 1：5~10 的比例(li)（建議(yi)稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組織，加入 1ml 試(shi)劑壹(yi)）進行(xing)冰浴(yu)勻漿。13000g，4℃離(li)心 10min，取(qu)上(shang)清置(zhi)冰(bing)上(shang)待測(ce)。

Gal LDH 測定操作：

分光光度計(ji)預(yu)熱 30 min，調節波(bo)長(chang)到(dao) 550nm，蒸餾(liu)水(shui)調零(ling)。

試(shi)劑二在(zai) 25℃水浴(yu)鍋中(zhong)預熱 30 min。

依次在(zai) 1ml 玻璃比色(se)皿(min)中(zhong)加入 100μl 上清液(ye)、800μl 預(yu)熱的試(shi)劑二和(he) 100μl 試(shi)劑三(san)，迅(xun)速混(hun)勻後於(yu) 550nm比色(se)，記錄(lu) 10s 和 130s 的吸光值A1 和A2，△A = A2﹣A1。

Gal LDH 活性計(ji)算公式(shi)：

按蛋(dan)白濃度計(ji)算

Gal LDH 活性單(dan)位(wei)定義(yi)：25℃中(zhong)每(mei)毫(hao)克(ke)蛋(dan)白每(mei)分鐘(zhong)還原(yuan) 1nmol Cyt c 為 1 個(ge)酶(mei)活單位(wei)。

Gal LDH (nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V 反總(zong)×109÷（Cpr×V 樣）÷T

=289×△A ÷Cpr

按樣本質(zhi)量(liang)計(ji)算

Gal LDH 活性單(dan)位(wei)定義(yi)：25℃中(zhong)每(mei)克(ke)樣品每(mei)分鐘(zhong)還原(yuan) 1nmol Cyt c 為 1 個(ge)酶(mei)活單位(wei)。

Gal LDH (nmol/min/g 鮮重) = △A÷ε÷d×V 反總(zong)×109÷（W×V 樣÷V 樣總(zong)）÷T

=289×△A ÷W

ε：還原(yuan)型Cyt c 摩爾(er)消(xiao)光系數(shu)，17.3×103L/ mol/cm；d：比色(se)皿(min)光徑(jing)(cm)，1cm；V 反(fan)總(zong)：反應體系總(zong)體積(ji)， 1ml=0.001 L；109：1mol=1×109nmol；V 樣：加入反應體系中(zhong)上清液(ye)體(ti)積(ji)，100μl=0.1ml；Cpr：上清液(ye)蛋(dan)白濃度，mg/ml，蛋(dan)白質(zhi)濃度需(xu)要另(ling)外(wai)測(ce)定(ding)，建議(yi)使(shi)用(yong)本公司蛋(dan)白質(zhi)含量(liang) BCA 試(shi)劑盒(he)；V 樣總(zong)：加入提(ti)取(qu)液(ye)體積(ji)，1ml；W，樣本質(zhi)量(liang)，g；T：反(fan)應時間，2min。

註意事(shi)項:

試(shi)劑二和(he)試(shi)劑三(san)配制(zhi)好(hao)後 3 天(tian)內(nei)使(shi)用(yong)完。

L-半乳糖酸(suan)1,4-內酯脫(tuo)氫(qing)酶(mei)活性試(shi)劑盒(he)抗壞