APX 催化催化H2O2 氧化AsA，通過測(ce)定AsA 氧化速率(lv)，來(lai)計算(suan)得 APX 活性。
抗(kang)壞血酸(suan)過氧化物(wu)酶(mei)活性測定試(shi)劑盒

抗(kang)壞血酸(suan)過氧化物(wu)酶(mei)（ascorbate peroxidase，APX）活性測定試(shi)劑盒說(shuo)明(ming)書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度法 50 管(guan)/48 樣

抗(kang)壞血酸(suan)過氧化物(wu)酶(mei)活性測定試(shi)劑盒

正(zheng)式(shi)測定前務(wu)必(bi)取 2-3 個(ge)預期差異(yi)較大的樣本(ben)做預測(ce)定測(ce)定意義(yi)：

APX 是(shi)植(zhi)物(wu)清(qing)除(chu)活性氧的重要(yao)抗(kang)氧化酶(mei)之(zhi)壹(yi)，也(ye)是抗(kang)壞血酸(suan)代謝的關鍵(jian)酶(mei)之(zhi)壹(yi)。APX 具(ju)有多種同功(gong)酶(mei)，分(fen)別(bie)定位於(yu)葉(ye)綠體(ti)、胞(bao)質、線粒(li)體、過(guo)氧化物(wu)和(he)乙(yi)醛酸體，以及(ji)過(guo)氧化體和類(lei)囊(nang)體(ti)膜上(shang)。APX 催化 H2O2 氧化AsA，是植(zhi)物(wu)AsA 的主要(yao)消(xiao)耗(hao)者(zhe)。APX 的活性直接(jie)影響(xiang)到 AsA 的含量，APX 與AsA 具有壹(yi)定的負相(xiang)關性。

測(ce)定原(yuan)理：

APX 催化催化H2O2 氧化AsA，通(tong)過(guo)測定AsA 氧化速率(lv)，來(lai)計算(suan)得 APX 活性。

組(zu)成(cheng)：

試(shi)劑二(er)：粉劑×1 瓶(ping)，4℃保(bao)存(cun)。臨用前加(jia) 5 ml 蒸餾(liu)水(shui)充(chong)分(fen)溶解。

自(zi)備儀器和(he)用品(pin)：

低(di)溫離(li)心(xin)機(ji)、紫(zi)外分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)、1ml 石(shi)英(ying)比色(se)皿(min)、移(yi)液槍(qiang)、研缽、冰和(he)蒸餾(liu)水(shui)。

粗酶(mei)液提(ti)取：

按(an)照(zhao)組織(zhi)質量(liang)（g）：試(shi)劑壹(yi)體(ti)積(ml)為(wei) 1：5~10 的比例(li)（建(jian)議(yi)稱取約(yue) 0.1g 組織(zhi)，加(jia)入 1ml 試(shi)劑壹(yi)）進(jin)行(xing)冰浴(yu)勻漿。13000g，4℃離(li)心(xin) 20min，取上(shang)清置(zhi)冰上(shang)待(dai)測(ce)。

測(ce)定：

分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)預熱(re) 30 min，調節波長到 290nm，用蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調零(ling)。

試(shi)劑壹(yi)在(zai) 25℃中(zhong)預熱(re) 30min。

依(yi)次在 1ml 石英(ying)比色(se)皿(min)中(zhong)加(jia)入 100μl 上清(qing)液、700μl 預熱(re)的試(shi)劑壹(yi)、100μl 試(shi)劑二(er)和 100μl 試(shi)劑三(san)，迅(xun)速混勻後在 290nm 測定 10 s 和(he) 130 s 光(guang)吸(xi)收(shou)A1 和(he)A2，△A=A1-A2。

APX 活性計算(suan)公(gong)式(shi)：

(1) 按(an)樣本(ben)蛋白(bai)濃(nong)度計(ji)算(suan)

活性單位定義(yi)：每毫克蛋白(bai)每(mei)分(fen)鐘(zhong)氧化 1nmol AsA 為(wei) 1 個(ge)酶(mei)活單位。

APX(nmol/min/mg prot) = △A÷(ε×d）×V 反(fan)總(zong)×109÷(Cpr×V 樣)÷T=1786×△A÷ Cpr

（2）按(an)樣本(ben)質量(liang)計(ji)算

活性單位定義(yi)：每g 組(zu)織每(mei)分(fen)鐘(zhong)氧化 1nmol AsA 為(wei) 1 個(ge)酶(mei)活單位。

APX(nmol/min/g 鮮(xian)重 ) = △A÷(ε×d）×V 反總×109÷(W×V 樣÷V 樣總(zong))÷T

=1786×△A ÷W

ε：AsA 在(zai) 290nm 處摩爾(er)吸(xi)光(guang)系(xi)數為(wei) 2.8×103 L/mol/cm；d：比色(se)皿(min)光(guang)徑(jing)（cm），1 cm；V 反(fan)總：反(fan)應(ying)體系(xi)總體(ti)積（L），1000μl=1×10-3 L；109：1mol=1×109nmol；V 樣：加(jia)入反應(ying)體系(xi)中(zhong)上(shang)清液體(ti)積（ml），100μl=0.1 ml；V 樣總(zong)：加(jia)入提取液體(ti)積，1ml；Cpr：上清(qing)液蛋(dan)白質濃(nong)度（mg/ml），需(xu)要(yao)另(ling)外測(ce)定，建(jian)議(yi)使用本(ben)公(gong)司(si)BCA 蛋白質含量測定試(shi)劑盒；W：樣本(ben)質量(liang)，g；T：催化反(fan)應時(shi)間（min），2min。

註(zhu)意事(shi)項：

配制好的試(shi)劑二(er) 4℃保存(cun)，並且(qie) 3 天(tian)內(nei)使用完(wan)。

抗(kang)壞血酸(suan)過氧化物(wu)酶(mei)活性測定試(shi)劑盒